RESUMO
Abstract Ceratobasidium ramicola is a fitopathogenic fungus that harmful and causes various levels of damage on several types of forestry and horticultural crops. The purpose of this study was to examine the effect of Acacia villosa, Myristica fragrans, Acacia mangium and Calliandra calothyrsus leaf extracts as tannin sources related to the in vitro inhibition of Ceratobasidium ramicola growth. The in vitro inhibition was performed by employing solid potato dextrose agar (PDA) medium to obtain the radial inhibition, while liquid potato dextrose broth (PDB) medium was used to obtain the biomass inhibition. Experimental design was based on in time nested-completely randomized design and statistical analysis was carried out with SAS software version 9.1. The result of radial growth inhibition of Ceratobasidium ramicola showed that tannin extracts of A. mangium and M. Fragrans were not significantly different to each other. Treatment of tannin extracts from A. villosa, M. fragrans, A. mangium and C. Calothyrsus with a concentration of 1% were significantly different with other concentrations and resulted the greatest inhibition values. Tannin extract of A. Mangium at 1% concentration produced the greatest radial inhibition by 33.2%. In most cases, the effective inhibition from tannin extract occurred at the 24h of incubation. The greatest biomass inhibition was produced on 1% tannin extract of A. mangium by 64.3%, while the lowest was produced from 1% tannin extract of M. fragrans by 27.0%.
Resumo Ceratobasidium ramicola é um fungo fitopatogênico prejudicial que causa vários danos em diversas culturas florestais e agrícolas. O objetivo deste estudo foi examinar o efeito dos extratos de folhas de Acacia villosa, Myristica fragrans, Acacia mangium e Calliandra calothyrsus como fontes de tanino relacionadas à inibição do crescimento in vitro de Ceratobasidium ramicola. A inibição in vitro foi realizada empregando o meio de ágar batata dextrose para obter a inibição radial, enquanto o meio de caldo de batata dextrose líquido foi usado para obter a inibição da biomassa. O projeto experimental foi fundamentado in time. O delineamento utilizado foi inteiramente casualizado, e a análise estatística foi realizada com o software SAS, versão 9.1. O resultado da inibição do crescimento radial de Ceratobasidium ramicola mostrou que os extratos de tanino de A. mangium e M. fragrans não diferiram significativamente entre si. Os tratamentos de extratos de tanino de A. villosa, M. fragrans, A. mangium e C. Calothyrsus, utilizando uma concentração de 1%, foram significativamente diferentes em comparação com outras concentrações e resultaram em maiores valores de inibição. O extrato de tanino de A. mangium a 1% de concentração produziu a maior inibição radial, com taxa de 33,2%. Na maioria dos casos, a inibição efetiva do extrato de tanino ocorreu em 24 horas de incubação. A maior inibição de biomassa foi produzida em 1% de extrato de tanino de A. Mangium, com taxa de 64,3%, enquanto a menor foi produzida a partir de 1% de extrato de tanino de M. fragrans, com taxa de 27%.
Assuntos
Myristica , Acacia , Fabaceae , Taninos , Extratos VegetaisRESUMO
A study was conducted to evaluate the effect of chlorogenic acid (ChA) added pre-cooling and its combination with caffeine added during warming on cooled-stored boar semen parameters. Ten ejaculates were diluted in commercial extender with or without 4.5mg/ml ChA and stored at 15°C. After 0, 24 and 72 hours of storage, aliquots of these doses were taken and incubated at 37°C in the presence or absence of 8.0mM caffeine. Semen quality was evaluated after 10 and 120 minutes of incubation. The ChA increased (P <0.01) the sperm motility, viability, acrosomal integrity and the percentage of spermatozoa with high mitochondrial activity (PMHA), however, decreased (P <0.01) the malondialdehyde (MDA) concentration. Caffeine increased (P<0.05) the sperm motility, viability, PMHA and the MDA concentration and reduced (P <0.05) the acrosome integrity. When associated (ChA+caffeine), there was an increase (P <0.05) in sperm motility and viability, PMHA and acrosome integrity. The addition of ChA to the dilution medium improves the quality of the swine inseminating doses. The addition of caffeine during re-warming is only recommended when the semen is stored for prolonged periods (72h), and the inseminating dose should be used immediately after its addition.(AU)
O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da adição de ácido clorogênico (ChA) antes do resfriamento e sua combinação com cafeína adicionada durante o reaquecimento sobre a qualidade do sêmen suíno resfriado. Dez ejaculados foram diluídos em diluidor comercial com adição ou não de 4,5mg/mL de ChA e armazenados a 15°C. Após zero, 24 e 72 horas de armazenamento, 10mL foram retirados e incubados a 37°C na presença ou ausência de 8,0mM de cafeína. A qualidade seminal foi avaliada após 10 e 120 minutos de incubação. O ChA aumentou (P<0,01) a motilidade, a viabilidade, a integridade acrosomal e a porcentagem de espermatozoides com alta atividade mitocondrial (PMHA), entretanto diminuiu (P<0,01) a concentração de malondialdeído (MDA). A cafeína aumentou (P<0,05) a motilidade, a viabilidade, a PMHA e a concentração de MDA e reduziu a integridade acrossomal. Quando associados (ChA+cafeína), houve aumento (P<0,05) na motilidade, na PMHA, na viabilidade e na integridade acrossomal. Conclui-se que a adição de ChA ao meio de diluição melhora a qualidade das doses inseminantes de suínos. A adição de cafeína durante o reaquecimento só é recomendada ao sêmen adicionado de ChA quando esse for armazenado por períodos prolongados (72h), devendo a dose inseminante ser utilizada imediatamente após sua adição.(AU)
Assuntos
Animais , Masculino , Preservação do Sêmen/veterinária , Cafeína , Criopreservação/veterinária , Ácido Clorogênico , Sus scrofa , Motilidade dos Espermatozoides , AntioxidantesRESUMO
Abstract Ceratobasidium ramicola is a fitopathogenic fungus that harmful and causes various levels of damage on several types of forestry and horticultural crops. The purpose of this study was to examine the effect of Acacia villosa, Myristica fragrans, Acacia mangium and Calliandra calothyrsus leaf extracts as tannin sources related to the in vitro inhibition of Ceratobasidium ramicola growth. The in vitro inhibition was performed by employing solid potato dextrose agar (PDA) medium to obtain the radial inhibition, while liquid potato dextrose broth (PDB) medium was used to obtain the biomass inhibition. Experimental design was based on in time nested-completely randomized design and statistical analysis was carried out with SAS software version 9.1. The result of radial growth inhibition of Ceratobasidium ramicola showed that tannin extracts of A. mangium and M. Fragrans were not significantly different to each other. Treatment of tannin extracts from A. villosa, M. fragrans, A. mangium and C. Calothyrsus with a concentration of 1% were significantly different with other concentrations and resulted the greatest inhibition values. Tannin extract of A. Mangium at 1% concentration produced the greatest radial inhibition by 33.2%. In most cases, the effective inhibition from tannin extract occurred at the 24h of incubation. The greatest biomass inhibition was produced on 1% tannin extract of A. mangium by 64.3%, while the lowest was produced from 1% tannin extract of M. fragrans by 27.0%.
Resumo Ceratobasidium ramicola é um fungo fitopatogênico prejudicial que causa vários danos em diversas culturas florestais e agrícolas. O objetivo deste estudo foi examinar o efeito dos extratos de folhas de Acacia villosa, Myristica fragrans, Acacia mangium e Calliandra calothyrsus como fontes de tanino relacionadas à inibição do crescimento in vitro de Ceratobasidium ramicola. A inibição in vitro foi realizada empregando o meio de ágar batata dextrose para obter a inibição radial, enquanto o meio de caldo de batata dextrose líquido foi usado para obter a inibição da biomassa. O projeto experimental foi fundamentado in time. O delineamento utilizado foi inteiramente casualizado, e a análise estatística foi realizada com o software SAS, versão 9.1. O resultado da inibição do crescimento radial de Ceratobasidium ramicola mostrou que os extratos de tanino de A. mangium e M. fragrans não diferiram significativamente entre si. Os tratamentos de extratos de tanino de A. villosa, M. fragrans, A. mangium e C. Calothyrsus, utilizando uma concentração de 1%, foram significativamente diferentes em comparação com outras concentrações e resultaram em maiores valores de inibição. O extrato de tanino de A. mangium a 1% de concentração produziu a maior inibição radial, com taxa de 33,2%. Na maioria dos casos, a inibição efetiva do extrato de tanino ocorreu em 24 horas de incubação. A maior inibição de biomassa foi produzida em 1% de extrato de tanino de A. Mangium, com taxa de 64,3%, enquanto a menor foi produzida a partir de 1% de extrato de tanino de M. fragrans, com taxa de 27%.
RESUMO
abstract The aim of this study was to evaluate the effects of caffeine, tea polyphenol and daidzein on the pharmacokinetics of lansoprazole and its metabolites. Rats were intragastrically administered caffeine (30 mg·kg-1, once per day), tea polyphenol (400 mg·kg-1, once per day) or daidzein (13.5 mg·kg-1, once per day) for 14 days, followed by an intragastric administration of lansoprazole (8 mg·kg-1) on the 15th day. The plasma concentrations of lansoprazole and its two primary metabolites, 5-hydroxylansoprazole and lansoprazole sulfone, were determined by high-performance liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry (HPLC-MS/MS). Tea polyphenol significantly elevated the Area Under the Curve (AUC) of lansoprazole from 680.29 ± 285.99 to 949.76 ± 155.18 μg/L.h and reduced that of lansoprazole sulfone from 268.82 ± 82.37 to 177.72 ± 29.73 μg/L.h. Daidzein increased the AUC of lansoprazole from 680.29 ± 285.99 to 1130.44 ± 97.6 μg/L.h and decreased that of lansoprazole sulfone from 268.82 ± 82.37 to 116.23 ± 40.14 μg/L.h. The pharmacokinetics of 5-hydroxylansoprazole remained intact in the presence of tea polyphenol or daidzein. Caffeine did not affect the pharmacokinetics of lansoprazole and its metabolites. The results imply that tea polyphenol and daidzein may inhibit the in vivo metabolism of lansoprazole by suppressing CYP3A.
resumo O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da cafeína, do polifenol do chá e da daidzeína na farmacocinética do lansoprazol e de seus metabólitos. Administraram-se, intragastricamente, aos ratos cafeína (30 mg·kg-1, uma vez ao dia), polifenol do chá(400 mg·kg-1, uma vez ao dia) ou daidzeína (13,5 mg·kg-1, uma vez ao dia), por 14 dias, seguindo-se a administração de lansoprazol (8 mg·kg-1) no 15º. dia. As concentrações plasmáticas do lansoprazol e de seus dois metabólitos primários, 5-hidroxilansoprazol e sulfona de lansoprazol, foram determinadas por cromatografia líquida de alta eficiência acoplada com espectrometria de massas (CLAE-EM/EM). O polifenol do chá elevou, significativamente, a Área Sob a Curva (ASC) do lansoprazol de 680,29 ± 285,99 para 949,76 ± 155,18 μg/L.h e reduziu a da sulfona de lansoprazol de 268,82 ± 82,37 para 177,72 ± 29,73 μg/L.h. A daidzeína aumentou a ASC do lansoprazol de 680,29 ± 285,99 para 1130,44 ± 97,6 μg/L.h e reduziu a da sulfona de lansoprazol de 268,82 ± 82,37 para 177,72 ± 29,73 μg/L.h. A farmacocinética do 5-hidroxilansoprazol permaneceu intacta na presença de polifenol do chá ou daidzeína. A cafeína não afetou a farmacocinética do lansoprazol e de seus metabólitos. Os resultados sugerem que o polifenol do chá e a daidzeína podem inibir o metabolismo in vivo do lansoprazol por supressão da CYP3A.
Assuntos
Ratos , Cafeína/farmacocinética , Polifenóis/farmacocinética , Lansoprazol/farmacocinética , Ratos , FarmacocinéticaRESUMO
Objetivos: Avaliar a atividade anti-Trichomonas vaginalis do extrato de folhas de videira (Vitis labrusca) provenientes de cultivo convencional e orgânico.Métodos: Extratos de folhas secas de videira, orgânico e convencional, foram elaborados com extrator Sohxlet. A composição fenólica total dos extratos foi avaliada por Folin-Cicoalteau e Cromatografia Líquida de Alta Eficiência. A atividade antiparasitária dos extratos foi realizada em cultura de T. vaginalis. Os testes foram realizados em três concentrações finais: 5, 10 e 20 mg/mL. Os trofozoítos foram contados em hemocitômetro e sua densidade foi ajustada em meio de cultura Trypticase-Yeast Extract-Maltose (TYM), de forma a se obter a concentração final de 1×105 trofozoítos/mL. Após incubação com os extratos por 24 horas a 37°C, foi feita a contagem dos trofozoítos com motilidade em hemocitômetro. Os controles do veículo foram realizados, adicionando-se água em substituição aos extratos.Resultados: O extrato de folhas convencionais é rico em catequina e os orgânicos, em resveratrol. Os extratos de V. labrusca não apresentaram atividade anti-T. vaginalis nas concentrações de 5 e 10 mg/mL. Entretanto na concentração de 20 mg/L, o extrato de folhas secas convencionais reduziu em 100% e o extrato orgânico em 48% a sobrevivência dos trofozoítos. Os polifenóis catequina, quercetina e rutina estavam em maior concentração no extrato com maior eficácia, os quais podem ser os responsáveis pela ação anti-T. vaginalis do extrato convencional.Conclusões: O extrato de folha de videira pode ser uma alternativa no combate a T. vaginalis. Estudos pré-clínicos e clínicos são necessários para comprovar eficácia e segurança desta intervenção...
AIMS: To evaluate the anti-Trichomonas vaginalis activity of the extract of organic and conventional leaves of Vitis labrusca.METHODS: Organic and conventional grapevine leaf extracts were prepared with extractor Sohxlet. The total phenolic extracts were evaluated by Folin-Cicoalteau and High-Performace Liquid Chromatography. The antiparasitic activity of the extracts was performed on growth of T. vaginalis. Tests were conducted at three final concentrations of 5, 10 and 20 mg/mL. The trophozoites were counted by hemocytometer and their density was adjusted in Trypticase-Yeast Extract-Maltose (TYM) growth environment in order to obtain a final concentration of 1x105 trophozoites/ml. After incubated with the extracts for 24 hours at 37 �C, the count of motile trophozoites was taken by hemocytometer. The vehicle controls were performed by substituting the extract by water.RESULTS: The conventional leaf extract is rich in catechin and the organic in resveratrol. The extracts of V. labrusca showed no anti-T.vaginalis activity at concentrations of 5 and 10 mg/mL. However in the concentration of 20 mg/L conventional grapevine leaf extracts reduced by 100% and the organic extract by 48% the survival of trophozoites. Catechin polyphenols, quercetin and rutin were in higher concentration in the extract with greater efficacy, which may be the responsible for the anti-T. vaginalis action of the conventional extract.CONCLUSIONS: The vine leaf extract may be an alternative to combat T. vaginalis. Pre-clinical and clinical studies are needed to confirm efficacy and safety of this intervention...
Assuntos
Humanos , Antitricômonas , Compostos Fenólicos , Infecções , Trichomonas vaginalis , Tricomoníase , VitisRESUMO
Caries is a multifactorial and transmittable disease that results mainly from bacteria present in the oral cavity. Oral microorganisms can produce metabolic acids that diffuse through dental tissues and interfaces leading to dissolution of mineral. In dentine, after mineral is dissolved, organic matrix is also exposed to breakdown by host enzymes such as matrix metalloproteinases (MMPs) that are activated by low pH followed by neutralization. This review aims to discuss the activity of different antibacterial and antiproteolytic compounds such as chlorhexidine and natural polyphenols in the control of caries progression.
A cárie é uma doença transmissível e multifatorial, resultante principalmente da presença de bactérias na cavidade oral. Os microorganismos orais podem produzir metabólitos ácidos que se difundem entre os tecidos e interfaces dentais levando a dissolução de minerais. Na dentina, após dissolução mineral, a matriz orgânica também é sujeita à degradação por enzimas, como as metaloproteinases (MMPs), que são ativadas pelo baixo pH seguido de neutralização. Esta revisão objetiva discutir a atividade de diferentes compostos antibacterianos e antiproteolíticos, como clorexidina e polifenóis, no controle da progressão de lesões cariosas.
Assuntos
Catequina , Clorexidina , Cárie Dentária , Dentina , Compostos FenólicosRESUMO
El própolis es una resina cérea de composición compleja y consistencia viscosa, que usado en la alimentación de animales, favorece el incremento de peso y masa muscular, mediante la estimulación de la ingesta alimenticia. En cabras estimula la producción de sólidos totales, grasa y proteína en la leche; resultando benéfico también en bovinos, pollos, porcinos, tilapias y trucha arco iris. El propóleo al ser evaluado en diferentes especies animales, ha demostrado poseer propiedades inmunoestimulantes, antioxidantes, antibacteriales, antitumorales y antivirales. Estas características hacen del propóleo una sustancia importante, que puede ser incluida en la dieta de los animales para fortalecer su sistema inmunológico, por su resistencia a enfermedades y ayudan a mejorar el rendimiento productivo, características que lo clasifican como aditivo natural funcional.
Propolis is a waxy resin of a complex composition and a viscose consistency, that used in animal feeding, favors weight increase and muscle mass gain, by stimulation of food intake. In goats it stimulates production of total solid, fat and milk proteins. It also shows beneficial results in bovines, broilers, pigs, tilapia and rainbow trout. Propolis, when evaluated in different animal species, has shown to have immunostimulatory, antioxidant, antibacterial, antiviral and antitumor properties. These characteristics make of propolis an important substance that can be included in the animal diet in order to strengthen their immune system, because of its resistance to disease and because they help improve production efficiency, characteristics that classify it as a functional natural additive.
RESUMO
The oily (hexane) and aqueous extracts from apple seeds (Malus domestica Borkh Rosaceae-) cultivars Winter Banana (WB), Winter Permain (WP) and Blanca de Asturias (BA) have shown significant differences in phenolic content and antioxidant activity. BA seed oily extracts and WB seed aqueous extracts have presented the best scavenging capacity of DPPH radical and inhibition of hydroxyl radicals. In the biological assay apple seed extracts showed protection against low density lipoproteins (LDL) oxidation, which might fight the risk of atherosclerosis. The BA oily seed extract may have potential use as nutraceutical ingredient.
La fracción oleosa (obtenida con hexano) y extractos acuosos de harina de semilla de manzana (Malus domestica BorkhRosaceae-) variedades Winter Banana (WB), Winter Permain (WP) y Blanca de Asturias (BA) mostraron diferencias significativas en el contenido de polifenoles independientemente de la variedad. Las diferentes fracciones mostraron capacidad de atrapamiento del radical DPPH y de inhibición del radical hidroxilo, siendo la fracción oleosa de las semillas de BA la mejor en los dos análisis; en el caso de los extractos acuosos, las semillas de WB presentaron la mejor respuesta. En la evaluación biológica los diferentes extractos mostraron un efecto protector contra la oxidación de las lipoproteínas de baja densidad (LDL) lo cual puede disminuir el riesgo de ateroesclerosis. La fracción oleosa de semillas de BA mostró mayor potencial como ingrediente nutracéutico.
Assuntos
Antioxidantes , Compostos Fenólicos/análise , Fenóis/análise , Malus/química , Extratos Vegetais , Sementes/químicaRESUMO
Objetivo - Foi analisado como material biológico os extratos brutos da polpa e da casca de berinjela (Solanum melongena L.), que é fonte da enzima Polifenol oxidase (PFO) [EC.1.14.18.1] e estes foram estudados como materiais biocatalíticos para a oxidação aeróbica de substratos fenólicos19. Métodos - Extraiu-se a PFO dos extratos por trituração, filtração e centrifugação. Através da medida de absorbância e método do Biureto, obteve-se a atividade e a proteína total. Quantidade e tempo de contato do polímero foram determinados espectrofotometricamente. A caracterização cinética da PFO baseou-se na temperatura ótima, estabilidade ao calor, pH ótimo de atividade e de estabilidade. Os valores obtidos foram comparados com os da polpa e casca de banana nanica. Resultados - A atividade específica da PFO na banana nanica (1056 u/mg da polpa e 1537,5 u/mg da casca) é superior à do extrato de berinjela (376,5 u/mg da polpa e 500 u/mgda casca). Os valores de pH de atividade (pH 5,0) e de estabilidade (pH 7,0), tempo de contato com o polímero (zero) e de armazenamento (34 dias) foram iguais para ambos os extratos. A atividade da PFO foi superior na casca quando comparada a polpa de berinjela. A massa de polímero PVP necessária para adsorção de compostos polifenólicos excedentes foi três vezes maior na polpa do que na casca. A temperatura ótima de atividade para a polpa foi de 40°C e para a casca de 15°C. Conclusões - A caracterização da PFO da berinjela é similar a da banana nanica, porém, a maior atividade específica desta última a torna mais propícia na construção do biossensor para quantificar fenóis/polifenóis em amostras.
Objective - Biological material was analyzed as the crude extracts of the pulp and peel of eggplant (Solanum melongena L.), which is the source of the enzyme Polyphenol oxidase (PPO) [EC.1.14.18.1] and these have been studied as materials for the biocatalytic aerobic oxidation of phenolic substrates19. Methods - Drew to PPO extracts by grinding, filtering and centrifuging. By measuring the absorbance and the Biuret method, we obtained activity and total protein. Amount and contact time of the polymer were determined spectrophotometrically. The kinetic characterization of PPO was based on the study of the optimum temperature, heat stability, pH optimum of activity and stability. The values obtained were compared with those of banana pulp nanica. Results - Results showed that the specific activity of PPO in the banana nanica (1056 u/mg of pulp and 1537.5 u/mg of peel) is higher than in the extract of eggplant (376.5u/mg of pulp and 500 u/mg of peel). The pH values of activity (pH 5.0) and stability (pH 7.0), time of contact with the polymer (zero) and storage (34 days) were similar for both extracts. The activity of PPO was higher in peel compared to the eggplant pulp. The mass of polymer PVP required for adsorption of polyphenolics compounds was three times higher in the pulp than in peel. The optimum temperature for activity of the pulp was 40°C and the peel of 15°C. Conclusions - The characterization of PPO eggplant is similar to the banana, however, the highest specific activity that makes it more conducive to the construction of biosensor to quantify phenols / polyphenols in the samples.
RESUMO
Introdução - Extrato bruto da casca de banana nanica (Musa acuminata); melhor fonte de enzima Polifenol oxidase (PFO) [EC.1.14.18.1] foi estudado como material biocatalítico para a oxidação aeróbica de substratos fenólicos. Materiais e Métodos - O extrato bruto de PFO foi obtido como em Perone et al.14 (2000). A atividade da enzima PFO e proteína total foram determinadas nesse extrato. Foi construído um biossensor desse extrato bruto da casca de banana nanica com 75 unidades de PFO, imobilizada com reagente glutaraldeído. Resultados - Esse biossensor, sensível a polifenóis, foi caracterizado e apresentou pH ótimo de imobilização da enzima igual a 6,5 e sensibilidade acentuada para o substrato catecol. Também foi utilizado no estudo da determinação da concentração de taninos em amostras de diversos tipos de chás. Conclusões - Foi verificado que a porcentagem de erro comparando com o método espectrofotométrico apresentou valores menores que 1,0% estando, portanto, de acordo com o procedimento padrão oficial. Comparando os resultados obtidos com esse biossensor e o de extrato bruto da polpa de banana nanica observamos, melhor tempo de armazenamento das membranas com a casca do que com a polpa, e uma diminuição significativa na quantidade de extrato imobilizado. Assim, conclui-se que o extrato de PFO da casca é melhor fonte de enzima do que a polpa e, portanto, será usado na construção dobiossensor. A vantagem do método amperométrico apresentado é possuir baixo custo, rapidez nas determinações e boa sensibilidade comparado com métodos cromatográficos.
Introduction - Crude extract of banana nanica (Musa acuminata); the best source of enzyme Poliphenol oxidase (PPO) [EC.1.14.18.1] was studied as biocatalytic material to the aerobic oxidation of phenolics substrates. Materials and Methods - The crude extract of I was done the same as at Perone et al.14 (2000). The activity from the enzyme PPO and total protein were determined in this extract. It has been built a biosensor of this crude extract from the peel of stunded banana with 75unities of PPO immobilized with glutaraldeyde reagent. Results - This biosensor, sensitive to poliphenol, was characterized and presented immobilizing optimium pH of the enzyme equal to 6.5and acute sensibility to its catechol substrate. It was also used at the study of the determination of tanines concentration in samples of many kinds of tea. Conclusions - It was verified that percentage of error comparing with the spectrophotometric method, has presented lower than 1,0% values according to the standard methods. Comparing the results obtained with this biosensor and the crude extract of the pulp of banana nanica, it was observed the better stock time of the membranes with the peel than with the pulp, and significative diminishing of the amount of immobilized extract. So, we conclude that the extract of PPO from the peel is better source of enzyme than the pulp and it will be used at the construction of the biosensor. The advantage of the amperometrics methods presented is to obtain low cost, fast determination and good sensibility compared to cromatographics methods.
Assuntos
Compostos Fenólicos/análise , Extratos Vegetais/análise , Taninos/análise , Taninos/química , Plantas/enzimologiaRESUMO
Introdução - Extrato bruto da casca de banana nanica (Musa acuminata); melhor fonte de enzima polifenol oxidase (PFO) [EC.1.14.18.1] foi estudado como material biocatalítico para a oxidação aeróbica de substratos fenólicos. Material e Métodos - Foi estudada a extração da PFO dessa fonte. A atividade da enzima PFO e proteína total foram determinadas nesse extrato. O estudo da quantidade e do tempo de contato do polímero SB-100 com esse extrato foi realizado. A caracterização cinética da PFO foi determinada com temperatura ótima, estabilidade ao calor, pH ótimo de atividade e de estabilidade. Os valores obtidos foram comparados com a PFO da polpa de banana nanica. Resultados - Os resultados mostraram que a quantidade de polímero SB-100 foi maior usando o extrato da casca de banana nanica do que para a polpa, mas o tempo de contato não houve alteração. O pH de atividade (pH 6,0), de estabilidade (pH 6,5) e a temperatura ótima (30°C), não apresentaram variações comparando os dois extratos utilizados. Conclusões - Verificou-se, portanto que o uso do extrato bruto da casca de banana nanica apresentou maior atividade enzimática de PFO do que para a polpa da fruta; enquanto a caracterização cinética praticamente não variou nos dois extratos. O que se pode concluir é que, para a construção do biossensor a casca da banana é melhor que a polpa por apresentar maior atividade da enzima. A seguir, um biossensor será construído, para detecção de fenólicos e os resultados serão comparados com os da polpa.
Introduction - Crude extract of the pell of stunded banana (Musa acuminata); the best source enzyme polyphenol oxidase (PPO) [EC.1.14.18.1] was studied as material biocatalitic for the aerobic phenolic substratum oxidation. Material and Methods - The extraction of the PPO of this source was studied. The activity of enzyme PPO and total protein had been determined in this extract. The study of the amount and the contact time of polymer SB-100 with this extract was done. The kinetic characterization of the PPO was determined with great temperature, stability to the heat, great pH of activity and stability. The gotten values had been compared with the PPO of the pulp of stunded banana. Results - The results had shown that the amount of polymer SB-100 was bigger used in the extract of the pell of stunded banana than the pulp, but the contact time did not have any alteration. The pH of activity (pH 6,0), of stability (pH 6,5) and the great temperature (30°C), had not presented variations comparing the two used extracts. Conclusions - It was verified, therefore that the use of the crude extract of the pell of stunded banana presented greater enzimatic activity of PPO than in the pulp of fruit; while the kinetic characterization practically did not vary in two extracts. We can conclude that for the construction of the biosensor the pell of the banana is better than the pulp for presenting greater activity of the enzyme. Next, a biosensor will be constructed, for detection of phenolics and the results will be compared with ones the pulp.
RESUMO
Introdução - Extrato bruto de banana nanica (Musa acuminata); uma das melhores fontes vegetais da enzima Polifenol oxidase (PFO) [EC.1.14.18.1]13, foi parcialmente purificada e caracterizada pretendendo-se usar, para futuros estudos como material biocatalítico para a oxidação aeróbica dos substratos fenólicos. Material e Métodos - Foi estudada a extração da PFO dessa fonte13 e a purificação parcial desse extrato bruto usando etanol, acetona e sulfato de amônio (0-80%), que precipitam o excesso de enzimas presentes nesse extrato, com posterior diálise. A seguir, foi determinada a atividade e proteína total nesses extratos. O pH de estabilidade e de atividade, o efeito da temperatura e da estabilidade ao calor sobre a atividade da enzima; além da determinação da estabilidade (tempo de armazenamento), foram determinados. Resultados - A purificação parcial do extrato bruto apresentou melhores resultados com sulfato de amônio (40%) dialisado em membrana semi-permeável, comparado com etanol e acetona; isto pode ser devido esses dois últimos terem precipitado a enzima em questão, por apresentarem baixa constante dielétrica.O pH de estabilidade foi de 6,0 e o pH de atividade foi de 6,5; mantendo-se a faixa encontrada para o extrato bruto13. A temperatura ótima encontrada foi de 30°C e o tempo de armazenamento desse extrato foi em torno de 50 dias, apresentando menor decréscimo de atividade com o tempo, quando comparado com o extrato bruto13. Conclusão - As características cinéticas do extrato parcialmente purificado não apresentaram grandes variações comparado com o extrato bruto13; além do tempo de purificação enzimática ser longo, aumentando o tempo para análises analíticas usando essa enzima.
Introduction - Crude extract of stunded banana (Musa acuminate); best source of enzyme Polyphenol oxidase (PPO) [EC.1.14.18.1]13, it was partially purificated and characterized and will be used to futures studies as biocatalitic material to the aerobic oxidation of phenolics substrates. Material and Methods - The extraction of PPO in this source was studied13 and the partial purification in this crude extract using ethanol, acetone and sulphate of ammonia (0 - 80%), that precipitate the excess of enzymes presents in this extract and after dialysis. Ahead, the activity and total protein was determined in this extracts. The pH of estability and activity, the effect of temperature and estability to the heat upon the activity of enzyme; beyond of determination of estability (stockpile's time), they were determinated. Results - The partial purificated of crude extract introduced best results with dialysied sulphate of ammonia (40%), compared with ethanol and acetone; this can be due to these two last had precipitated the enzyme in question, by they introduce low constant dielectric. The pH of estability was 6,0 and the pH of activity was 6,5; keeping the range found to the crude extract13. The temperature found it was 30°C and stockpile's time in this extract was about 50 days, introducing minor decrease activity with the time, when compared with the crude extract13. Conclusion - Characteristics kinetics of extract partially purificated didn't introduce large variations compared with the crude extract13; beyond of time enzymatic purification to be long, increasing the time for analytics analysis using this enzyme.
Assuntos
Musa , Enzimas , Polifenóis , Misturas ComplexasRESUMO
Introdução - Extrato bruto de banana nanica (Musa acuminata); melhor fonte de enzima Polifenoloxidase (PFO) [EC.1.14.18.1] foi estudado como material biocatalítico para a oxidação aeróbica de substratos fenólicos. Material e Métodos - Foi estudada a extração da PFO dessa fonte. A atividade da enzima PFO e proteína total foram determinadas nesse extrato. Um biossensor amperométrico foi construído usando 100 U de PFO proveniente do extrato bruto de banana nanica, imobilizada sobre uma membrana de teflon (Celgard 2400) com o uso do reagente bifuncional glutaraldeído 2,5% m/V. Após secagem, esta membrana enzimática foi acoplada na extremidade de um eletrodo de oxigênio. Esse biossensor foi usado na determinação de compostos fenólicos; utilizado no estudo da determinação do teor de paracetamol em formulações farmacêuticas como Tandrilax, Cefalium, Diatyl, Vick pirena e Descon. Comparando os resultados obtidos pelo método amperométrico proposto com o oficial espectrofotométrico. Resultados - Os medicamentos analisados por amperometria apresentaram valores compatíveis com o da farmacopéia, observando-se seletividade do método proposto. Conclusões - Verificou-se que a porcentagem de erro apresentou valores menores que 1% estando, portanto, de acordo com o procedimento padrão oficial. A vantagem do método amperométrico apresentado é possuir baixo custo, rapidez nas determinações e boa sensibilidade comparado com métodos cromatográficos de determinação desse fármaco.
Introduction - Partial purificated extract of stunded banana (Musa acumunata), the best source of enzyme Poliphenol oxidase (PPO) [EC.1.14.18.1] was studied as biocatalitic material to the aerobic oxidation of phenolics substrates using an amperometry biosensor with PPO immobilized. Material and Methods - The extraction of PPO was studied in the source, the partial purification of this crude extract using ammonium sulphate (40%), that precipitate the enzyme excess presents in this extract with posterior dialysis. After it was determinated the total activity and proteins in the two extracts. An amperometric biosensor was builded using 50 U of PPO proceeding of purificated partial extract of stunded banana; immobilized on a Teflon membrane (Celgard 2400), with the use of the reagent glutaraldeyde 2,5% m/v. After drying, this enzymatic membrane was copled in the extremity of an oxygen electrode. This biosensor was used in the determination of phenolics in urine samples of persons that use drugs, metabolizing phenols by amperometry and by spectrophotometry. Results - In the urine samples, was possible to notice that persons that use L- Dopa shows greather quantity of phenols than persons that use amphetamines. Conclusions -The percentage of error in the samples studied was minor that 3%, using the crude extract and purificated partialment, using the spectrophotometric standard method, showing the efficiency of the amperometric method used with or without the enzymatic purification.