Impact of topical nifedipine on wound healing in animal model (pig) / Impacto da nifedipina tópica na cicatrização de feridas em modelo animal (porco)

Abstract Background The human skin is an extremely sophisticated and evolved organ that covers the whole body. External agents or the patient's own diseases can cause skin injuries that can challenge healthcare professionals and impose high social, economic and emotional costs. Objectives To evaluate the impact of topical nifedipine on skin wound healing, specifically on polymorphonuclear cells, vascular proliferation, and collagen. Methods We used three pigs, and created eight injuries in the dorsal region of each animal. We applied 1%, 10%, and 20% concentration nifedipine creams to four of the wounds in animals 1, 2, and 3 respectively and treated the other twelve wounds with saline solution 0.9% only. We analyzed the presence of polymorphonuclear cells, vascular proliferation, and collagen at six different times (days 1, 3, 7, 14, 21, and 28). Results The evaluation of polymorphonuclear levels showed mild cell activity at all times in the control group, while in the nifedipine groups, marked levels were more frequent at all times during the experiment. There was a 4.84-fold increase in the chance of marked vascular proliferation (p = 0.019) and, at the same time, a decrease in collagen formation (OR 0.02 / p = 0.005) in animal 3. Conclusions Topical NFD may have an impact on skin wound healing mechanisms. Our study showed that polymorphonuclear cells and vascular proliferation increased. We also demonstrated that collagen formation decreased. Therefore, topical NFD may have a positive impact on skin wound healing. Additional studies are needed to confirm our results.

Resumo Contexto A pele humana é um órgão extremamente sofisticado e evoluído que cobre todo o corpo. As lesões cutâneas podem ser causadas por agentes externos ou pelas próprias doenças do paciente, e podem representar um desafio para os profissionais de saúde com altos custos sociais, econômicos e emocionais. Objetivos Avaliar o impacto da nifedipina tópica na cicatrização de feridas cutâneas, especialmente em relação a polimorfonucleares, proliferação vascular e colágeno. Métodos Utilizamos três porcos e realizamos oito ferimentos na região dorsal de cada animal. Aplicamos as concentrações de nifedipina creme a 1%, 10% e 20% para os animais 1, 2 e 3, respectivamente, sendo que, em quatro ferimentos, aplicamos o creme e, nos outros quatro ferimentos, apenas soro fisiológico a 0,9%. Analisamos a presença de polimorfonucleares, proliferação vascular e colágeno em seis momentos diferentes (dias 1, 3, 7, 14, 21 e 28). Resultados A avaliação dos níveis polimorfonucleares mostrou atividade celular discreta em todos os momentos no grupo controle, enquanto nos grupos nifedipina, os níveis marcados foram mais frequentes em todos os momentos do experimento. Houve aumento de 4,84 vezes na chance de uma produção marcada (p = 0,019) da proliferação vascular e, ao mesmo tempo, diminuição da formação do colágeno (odds ratio, OR 0,02; p = 0,005) no animal 3. Conclusões A nifedipina tópica pode ter impacto no mecanismo de cicatrização cutânea. Nosso estudo mostrou que há aumento dos polimorfonucleares e da proliferação vascular. Além disso, há diminuição da formação do colágeno. Assim, a nifedipina tópica pode ter impacto positivo na cicatrização das feridas cutâneas. Estudos adicionais são necessários para confirmar nossos resultados.

Expression of CD14 and toll-like receptors 2 and 4 by milk neutrophils in bovine mammary glands infected with Corynebacterium bovis / Expressão de CD14 e dos receptores do tipo toll 2 e 4 por neutrófilos lácteos provenientes de glândulas infectadas por Corynebacterium bovis

This study evaluated the expression of CD14, toll-like receptor (TLR) 2 and TLR4 on the surface of milk neutrophils in bovine mammary glands infected with Corynebacterium bovis. Here, we used 23 culture-negative control quarters with no abnormal secretion on the strip cup test and milk somatic cell count lower than 1x105 cells/mL, and 14 C. bovis infected quarters. The identification of neutrophils, as well as, the percentage of neutrophils that expressed CD14, TLR2 and TLR4 were analyzed by flow cytometry using monoclonal antibodies. The present study encountered no significant difference in the percentages of milk neutrophils that expressed TLR2 and TLR4 or in the expression of TLR4 by milk neutrophils. Conversely, a lower median fluorescence intensity of TLR2 in milk neutrophils was observed in C. bovis-infected quarters. The percentage of neutrophils that expressed CD14 and the median fluorescence intensity of CD14 in milk neutrophils was also lower in C. bovis-infected quarters...

O presente estudo objetivou avaliar alterações na expressão de CD14, e dos receptores do tipo toll (TLR) 2 e 4 na superfície de neutrófilos lácteos provenientes de glândulas mamárias infectadas por Corynebacterium bovis. O presente estudo utilizou 23 quartos negativos no exame bacteriológico, sem alterações na prova de fundo escuro e com contagem automática de células somáticas menor que 1 x105 células/mL, e 14 quartos mamários infectados por C. bovis A identificação de neutrófilos, assim como a porcentagem de neutrófilos lácteos que expressaram CD14, TLR2 e 4 foram avaliadas por citometria de fluxo utilizando anticorpos monoclonais. A porcentagem de neutrófilos que expressaram TLR2 e TLR4 nos quartos mamários infectados por C. bovis não diferiu dos quartos mamários sadios, assim como na expressão de TLR4. No entanto, a intensidade de fluorescência do TLR2 na superfície dos neutrófilos foi menor nos quartos mamários infectados por C. bovis. A porcentagem de neutrófilos que expressaram CD14 e a intensidade de fluorescência da molécula de CD14 foi menor na superfície dos neutrófilos lácteos dos quartos infectados por C. bovis...

Células inflamatorias en la secreción nasal y citocinas proinflamatorias Th1, Th2, Th17 y reguladoras en el suero de pacientes con leishmaniasis cutánea Americana / Inflammatory cells in the nasal secretion and serum pro-inflammatory Th1, Th2, Th17 and regulatory cytokines from American cutaneous leishmaniasis patients

En la forma mucocutánea (LCM) y cutánea (LCL) de la leishmaniasis, se genera una respuesta inflamatoria cuyos mediadores (células y citocinas) se han involucrado en la severidad de las úlceras y en el daño tisular observado en estos pacientes, particularmente en los LCM. Por ello, nos propusimos identificar los grupos celulares predominantes en la secreción nasal de pacientes con LCL y LCM, y relacionarlos con citocinas proinflamatorias y reguladoras. Evaluamos en pacientes LCL (n=20), LCM (n=14) y 20 individuos sanos: a) La cuantificación de tipos de leucocitos en "frotis" de secreción nasal, úlceras cutáneas y sangre periférica teñidos con Giemsa empleando microscopía óptica, b) Concentraciones séricas de IL-8, IL-4 e IL-10 por citometría de flujo (CBA array) e IFN-γ, TNF-α e IL-17 por ELISA. El grupo celular predominante en la secreción nasal de pacientes con LCM fueron los neutrófilos (80,7%) y escasos eosinófilos (0,6%), comparados con los LCL y controles, en los que no se observaron estas células. Mientras que los "frotis" de las ulceras de los LCL presentaron 45,3% de neutrófilos y 43% de linfocitos. En contraste, en sangre periférica, de los pacientes se observó un incremento de neutrófilos y linfocitos junto a una frecuencia significativa de monocitos (LCM: 5,3; LCL: 6,3%) y eosinófilos (LCM: 8,2%; LCL: 5,2%). Todo esto sugiere la participación de los neutrófilos en la inmunopatogénesis en la LCM. Adicionalmente, se demostró una mayor (P=0,03) concentración sérica de IL-8 en los pacientes con LCL (18,5ρg/mL) y LCM (18,2ρg/mL) respecto a los individuos sanos, sugiriendo que esta citocina promueve el reclutamiento de neutrófilos al sitio de infección en los LCM, mientras que en los LCL contribuyen junto con los linfocitos T CD4+ de la subpoblación Th1 y productores de IFN-γ, en la activación de mecanismos leishmanicidas.

In mucocutaneous (MCL) and cutaneous (LCL) leishmaniasis, the inflammatory mediators (cytokines and cells) have been associated with ulcers severity and tissue damage observed in these patients, particularly in MCL. Therefore, we decided to identify the predominant cell groups in the nasal secretion of LCL and MCL patients, and related pro-inflammatory and regulatory cytokines. It was evaluated in LCL (n = 20), MCL patients (n = 14) and 20 healthy volunteers: a) Differential leukocyte count by optical microscopy performed in: smear of a runny nose, skin ulcers and peripheral blood dyed with Giemsa, b) serum levels of IL-8, IL-4 and IL-10 using cytometric bead array (CBA) assay and IFN-γ, TNF-α and IL-17 by ELISA. In MCL patients, neutrophils (80.7%) were the most abundant cellular group in nose secretion, followed by a small amount of eosinophils (0.6%) compared to the LCL and controls, where no such cells were observed. In contrast, in peripheral blood from ACL patients were observed an abundant amount of neutrophils and lymphocytes together with a significant frequency of monocytes (MCL:5.3%; LCL: 6.3%) and eosinophils (MCL:8.2%; LCL:5.2%). While the smear from skin ulcers of LCL patients showed 45.3% of neutrophils and 43% lymphocytes. All of these indicate that neutrophils might play a role in the MCL immunopathogenesis. Moreover, an increased serum levels of IL-8 (P=0.03) were found in LCL (18.5ρg/mL) and MCL (18.2ρg/mL) patients, suggesting that this cytokine promotes the recruitment of neutrophils to the infection site in MCL; while in LCL patients may contribute with CD4 + Th1 (IFN-γ) cells in the activation of leishmanicida mechanisms.

Correlação entre a contagem automática de células somáticas e a porcentagem de neutrófilos pela citometria de fluxo e pela técnica de citocentrifugação / Correlation between automatic somatic cell count and the percentage of neutrophils through flow cytometry and cytocentrifugation technique

O objetivo do presente estudo foi avaliar a correlação entre a contagem automática de células somáticas (CCS) com a porcentagem de neutrófilos pela técnica de citocentrifugação e pela citometria de fluxo. Para tal, 102 amostras de leite proveniente de 28 vacas da raça Holandesa foram coletadas e submetidas ao isolamento de células do leite e posterior identificação da população de neutrófilos. Após citocentrifugação, os neutrófilos foram identificados por microscopia óptica utilizando-se o corante de Rosenfeld. Os neutrófilos lácteos foram identificados por citometria de fluxo utilizando anticorpo monoclonal específico (CH138A) e anticorpo monoclonal secundário conjugado à ficoeritrina. O presente estudo demonstrou correlação positiva entre a CCS e a porcentagem de neutrófilos por citometria de fluxo (r= 0,625) e pela técnica de citocentrifugação (r= 0,267). Observou-se também correlação positiva entre a porcentagem de neutrófilos pela citometria de fluxo e pela técnica de citocentrifugação (r = 0,496), embora a porcentagem de neutrófilos no leite tenha sido maior pela técnica de citocentrifugação quando comparada com a citometria de fluxo. Deste modo, o presente estudo indica que a citometria de fluxo pode ser uma ferramenta útil no diagnóstico e controle da mastite bovina.

The purpose of the present study was to assess the correlation between the automatic somatic cell count (SCC) and the percentage of neutrophils through cytocentrifugation technique and flow cytometry. Thus, 102 milk samples from 28 Holstein dairy cows were collected and submitted to milk cell isolation procedures, and afterwards, the neutrophils were identified. After cytocentrigugation, the neutrophils were microscopically identified using the rosenfeld dye. The milk neutrophils were recognized by flow cytometry using primary mouse IgM monoclonal antibody (CH138A) and phycoerytrin (PE) goat anti-mouse IgM antibody. This study found a positive correlation between SCC and the percentage of neutrophils through cytocentrifugation (r= 0.267) and flow cytometry (r= 0.625). A positive correlation was also encountered between the percentage of neutrophils through cytocentrifugation and flow cytometry (r= 0.496), although the percentage of neutrophils was higher in samples submitted to cytocentrifugation. In conclusion, flow cytometry can be a useful tool in the diagnosis and control of mastitis.

Muerte leucocitaria por toxicidad del propóleo / Leukocyte death incited by propolis toxicity

Objetivo: El propósito de este estudio fue evaluar el grado de citotoxicidad in vitro que presenta el propóleo sobre leucocitos polimorfonucleares. Material y métodos: Estudio experimental, controlado, in vitro. Procedimiento estadístico de: análisis de varianza de repetidas medidas y post-hoc de Scheffé, estableciendo una significancia estadística de p < 0.05. Se tomaron 10 mL de sangre venosa periférica de seis individuos sanos, ambos sexos entre 20 y 30 años de edad escogidos al azar para obtener los leucocitos. Resultados: Análisis de Scheffé con 95% de confiabilidad para comparación entre grupo control y grupo experimental: significativo con p 0.0001 para propóleo 1, control 1 y propóleo 2, control 2, para propóleo 1, propóleo 2, p 0.5002/control 1, control 2, p 0.9621. Conclusiones: El propóleo en dilución 1:4 aplicado a leucocitos polimorfonucleares durante1-2 horas en el experimento provocó muerte celular en un 70%; dando significancia estadística.

Objective: The aim of the present study was to assess the extent of propolis' in vitro cytotoxicity on polymorphonuclear leukocytes. Materials and methods: The present study was an in vitro, controlled, experimental endeavor. Statistical procedure entailed variance analysis of repeated measures as well as Scheffe's post-hoc. A p < 0.05 statistical significance was established. To obtain leukocytes, 10 mL of peripheral venous blood was harvested from six randomly selected, healthy, 20-30 year old subjects, of both genders. Results: Scheffe's analysis with 95% reliability for comparison between control and experimental groups. Significant with p 0.0001 for propolis 1 control 1 and propolis 2 control 2. For propolis 1 propolis 2 p 0.5002/control 1 control 2 p 0.9621. Conclusions: In the present experiment propolis at a 1:4 dilution applied for 1-2 hours to polymorphonuclear leukocytes caused 70% cellular death. This resulted in statistical significance.

Effects of in vitro selenium supplementation on blood and milk neutrophils from dairy cows / Efeito da suplementaçãoin vitro de selenio sobre neutrófilos do leite e sanguineos em vacas leiteiras

The study was designed to assess the effects of in vitro selenium addition on intracellular hydrogen peroxide production by neutrophils from the milk and blood of dairy cows. Blood from 10 dairy cows and 20 milk samples from five dairy cows were incubated with 0 mg (control) or 10μM of sodium selenite. Then, milk and blood neutrophils were submitted for evaluation of intracellular hydrogen peroxide production by flow cytometry using 2',7'-dichlorofluorescein diacetate as a probe. The selenium status of the animals was evaluated by determination of the blood glutathione peroxidase activity. The results of the present work showed that in vitro selenium supplementation leads to an enhancement in intracellular hydrogen peroxide production, which indicates an improvement in the bactericidal effects of blood and milk neutrophils even in cows with a selenium-adequate status. Thus, the present study showed that in vitro Se supplementation leads to an enhancement in intracellular hydrogen peroxide production, indicating an improvement in the bactericidal effects of blood and milk neutrophils in cows with Se-adequate status.

O presente estudo avaliou o efeito da suplementação in vitro de selênio sobre a produção intracelular de perόxido de hidrogênio (H2O2) por leucόcitos polimorfonucleares do leite e do sangue em bovinos. Assim, 10 e 20 amostras de sangue e leite, respectivamente, foram incubadas com 0 mg (controle) ou 10μM de selenito de sόdio. A determinação da produção intracelular de peróxido de hidrogênio se deu por citometria de fluxo através da utilização do 2´,7´ diclorodihidrofluoresceína diacetato como sonda. A mensuração do conteúdo de selênio foi avaliada pela atividade da glutationa peroxidase eritrocitária. Os leucócitos polimorfonucleares tanto sanguíneos quanto do leite apresentaram significativo aumento na produção intracelular de H2O2 com a suplementação in vitro de selênio. Desta forma, o presente estudo apontou para aumento da produção intracelular de H2O2, indicando aumento da capacidade microbicida dos leucócitos polimorfonucleares sanguíneos e lácteos mesmo em animais com níveis adequados de selênio.

Capacidade fagocítica de polimorfonucleares (PMN) humanos frente a várias partículas: Candida albicans, Zymosan, Staphylococcus aureus, Micrococcus, Escherichia coli / Phagocytosis capacity of the human neutrophils (PMN) against some particles

O processo de fagocitose envolve a ligação de partículas a receptores de superfície, resultando em indução de sinais intracitoplasmáticos e internalização de partículas, tendo importante papel na evolução das moléstias infecciosas, principalmente das bacterianas. Neste trabalho, nos propusemos a estudar a fagocitose “in vitro”, por meio do isolamento de PMN do sangue periférico de 17 amostras provenientes de doadores do Hemocentro do HURNP colocados em contato com as diversas partículas acima citadas. Com o objetivo de se obter a indicação da partícula mais adequada para uso na rotina laboratorial, as características avaliadas foram a capacidade fagocítica e a facilidade de leitura ao microscópio ótico. Os resultados obtidos indicam maior capacidade fagocítica (em porcentagem de células que apresentaram fagocitose) quando se faz uso da partícula de Zymosan (77 por cento) seguido de C. albicans (70 por cento) e o maior índice de partículas fagocitadas (em porcentagem de células que fagocitaram acima de 4 partículas) quando se fez uso de Zymozan (50 por cento) seguido de S. aureus (37 por cento) permitindo concluir que destas partículas a mais adequada para uso na rotina laboratorial é o Zimosan.