Bioanalytical method development and validation for determination of metoprolol tartarate and hydrochlorothiazide using HPTLC in human plasma

A simple, sensitive, rapid and economic chromatographic method has been developed for determination of metoprolol tartarate and hydrochlorothiazide in human plasma using paracetamol as an internal standard. The analytical technique used for method development was high-performance thin-layer chromatography. HPTLC Camag with precoated silica gel Plate 60F254 (20 cm×10 cm) at 250 µm thicknesses (E. Merck, Darmstadt, Germany) was used as the stationary phase. The mobile phase used consisted of chloroform: methanol: ammonia (9:1:0.5v/v/v). Densitometric analysis was carried out at a wavelength of 239 nm. The rf values for hydrochlorothiazide, paracetamol and metoprolol tartarate were 0.13±0.04, 0.28±0.05, 0.48±0.04, respectively. Plasma samples were extracted by protein precipitation with methanol. Concentration ranges of 200, 400, 600, 800, 1000, 1200 ng/mL and 2000, 4000, 6000, 8000, 10000, 12000 ng/mL of hydrochlorothiazide and metoprolol tartarate, respectively, were used with plasma for the calibration curves. The percent recovery of metoprolol tartarate and hydrochlorothiazide was found to be 77.30 and 77.02 %, respectively. The stability of metoprolol tartarate and hydrochlorothiazide in plasma were confirmed during three freeze-thaw cycles (-20 ºC) on a bench for 24 hours and post-preparatively for 48 hours. The proposed method was validated statistically and proved suitable for determination of metoprolol tartarate and hydrochlorothiazide in human plasma.

Um método simples, sensível, rápido e econômico empregando a cromatografia em camada delgada de alta eficiência (HPTLC) foi desenvolvido para determinação do tartarato de metoprolol e hidroclorotiazida em plasma humano, usando paracetamol como padrão interno. Placas prontas de sílica-gel 60F254 (20 cm×10 cm), 250 µm de espessura, para HPTLC Camag (E. A Merck, Darmstadt, Alemanha) foramutilizadas como fase estacionária. A fase móvel utilizada consistiu de clorofórmio: metanol: amônia (9:1:0,5 v/v/v). A análise densitométrica foi realizada no comprimento de onda 239 nm. Os valores de Rf de hidroclorotiazida, paracetamol e tartarato de metoprolol foram 0.13±0.04, 0.28±0.05, 0.48±0.04 respectivamente. As proteínas do plasma foram extraídas por precipitação com metanol. Para construção das curvas de calibração, empregaram-se intervalos de concentração de 200, 400, 600, 800, 1000, 1200 ng/mL e 2000, 4000, 6000, 8000, 10000, 12000 ng/mL de hidroclorotiazida e tartarato de metoprolol, respectivamente. Os percentuais de recuperação do tartarato de metoprolol e de hidroclorotiazida foram de 77,30 e 77,02, respectivamente. A estabilidade do tartarato de metoprolol e de hidroclorotiazida no plasma foi confirmada durante três ciclos de congelamento e descongelamento (-20 ºC), durante 24 horas e póspreparação durante 48 horas. O método proposto foi validado estatisticamente, sendo adequado para determinação do tartarato de metoprolol e hidroclorotiazida em plasma humano.

Padrões eletroforéticos das proteínas de reserva em grãos de sorgo com presença e ausência de tanino / Electrophoretic patterns of grain storage proteins of sorghum with presence and absence of tannin

Muitos métodos para determinar a presença de taninos são descritos na literatura, mas nenhum deles é universalmente aceito como ideal ou utilizado de forma unânime. Alguns métodos colorimétricos não diferenciam taninos de outros compostos fenólicos, outros utilizam substâncias que não são adequadas como padrão. Métodos que utilizam a capacidade dos taninos de precipitar as proteínas podem causar resultados divergentes devido às diferenças na conformação dessas moléculas. Assim, objetivou-se, neste estudo, identificar a presença de taninos em 10 híbridos de sorgo através da análise de padrões proteicos obtidos por eletroforese. O método colorimétrico Azul da Prússia foi utilizado para quantificar os taninos nas amostras. A precipitação das proteínas pelos taninos permitiu identificar os genótipos de sorgo com tanino através dos padrões proteicos das frações albuminas, globulinas e prolaminas. A análise eletroforética das prolaminas mostrou que as bandas produzidas pelo polipeptídeo kafirina, podem ser utilizadas na identificação de sorgo sem tanino no grão.

Several methods are described on the literature to determine the presence of tannin, however none of them is universally accepted as the ideal or even are used in a unanimous way. Some colorimetric methods do not differentiate tannins from others phenolic compounds, others use substances which are not appropriate to use as standard. Methods that use the capacity of tannins to precipitate proteins may end up with divergent results due to differences on the molecule conformation. Thus, the objective of this study was to identify the presence of tannin in 10 hybrids of sorghum throughout analysis of pattern proteins obtained by electrophoresis. The colored method Prussian Blue was used to quantify tannins on the samples. The protein precipitation by tannins permitted to identify the sorghum genotypes with grain tannin through protein standards of fractions of albumin, globulin and prolamins. The electrophoresis analysis of the prolamins showed that the bands produced by the kafirin polypeptide may be used in sorghum identification without the presence of tannin in grain.