RESUMO
Abstract Background: Coffee pulp has a high content of antioxidants capable of modifying the oxidative status in small ruminants. However, high amounts for a prolonged time can reduce fertility. Objective: To determine the effect of two inclusion levels of coffee pulp during estrous synchronization on reproductive variables and oxidative status of primiparous ewes. Methods: Sixty Suffolk x Dorset primiparous ewes were distributed into three treatments in a completely randomized design; T0: (n=20) 1.5 kg balanced diet, T1: (n=20) 1.5 kg balanced diet and 5% coffee pulp, T2: (n=20) 1.5 kg balanced diet and 10% coffee pulp. Supplementation was given for 16 days before estrus synchronization and until the beginning of the breeding season. A progestogen (CIDR®) was inserted for 11 days and a dose of PGF2α was applied two days prior to its withdrawal. Estrus detection started 12 hours after CIDR withdrawal. Blood samples were obtained during the supplementation period to measure oxidative status, antioxidant capacity, glucose and insulin, and up to 9 days after breeding to determine progesterone concentration. Pregnancy diagnosis was performed at 30 and 60 days post-breeding. An analysis of repeated measures of mixed effects and frequency analysis were carried out. Results: Inclusion of coffee pulp for a short period prior to breeding did not affect reproductive parameters, nor progesterone, glucose or insulin concentrations (p>0.05); however, antioxidant capacity increased, while lipid oxidation showed an opposite trend (p<0.05). Conclusion: Inclusion of up to 10% coffee pulp in the diet of ewe lambs for 16 days prior to breeding improves oxidative status without causing adverse effects on pregnancy, estrus or prolificacy.
Resumen Antecedentes: La pulpa de café tiene un alto contenido de antioxidantes capaces de modificar el estado oxidativo en pequeños rumiantes. Sin embargo, a dosis elevadas y por un tiempo prolongado puede reducir la fertilidad. Objetivo: Determinar el efecto de dos niveles de inclusión de pulpa de café durante la sincronización del estro en variables reproductivas y el estado oxidativo de ovejas primerizas. Métodos: Se utilizaron 60 ovejas primalas Suffolk x Dorset fueron distribuidas en tres tratamientos en un diseño completamente al azar; T0: (n=20) con 1,5 kg de dieta integral, T1: (n=20) con 1,5 kg de dieta integral y 5% de pulpa de café, T2: (n=20) con 1,5 kg de dieta integral y 10% de pulpa de café. La suplementación se realizó por 16 días, previo a la sincronización del estro y hasta el empadre. El progestágeno (CIDR®) se insertó en las ovejas por 11 días y se aplicó una dosis de PGF2α dos días antes de su retiro. La detección de estro comenzó a las 12 horas post-retiro del CIDR®. Se obtuvieron muestras sanguíneas durante el periodo de suplementación para medir estado oxidativo, capacidad antioxidante, glucosa e insulina, y hasta 9 días posteriores al empadre para determinar las concentraciones de progesterona. El diagnóstico de gestación se realizó a los 30 y 60 días post-monta. Se realizaron análisis de medidas repetidas utilizando un modelo de efectos mixtos, además de análisis de frecuencias. Resultados: La inclusión de pulpa por un periodo corto previo al empadre no afectó los parámetros reproductivos ni las concentraciones de progesterona, glucosa o insulina (p>0,05); sin embargo, la capacidad antioxidante se incrementó, mientras que la oxidación lipídica siguió una tendencia inversa (p<0,05). Conclusión: La inclusión hasta de 10% de pulpa de café en la dieta de ovejas por 16 días previo al empadre mejora el estado oxidativo sin ocasionar efectos adversos en el porcentaje de preñez, estro o prolificidad.
Resumo Antecedentes: A polpa de café tem alto conteúdo de antioxidantes capazes de modificar o estado oxidativo em pequenos ruminantes; no entanto, em doses elevadas e por um tempo prolongado reduz a fertilidade. Objetivo: Determinar o efeito de diferentes níveis de inclusão de polpa de café durante a sincronização do estro em diferentes variáveis reprodutivas e estado oxidativo das ovelhas primíparas. Métodos: Sessenta ovelhas primíparas dos cruzamentos Suffolk x Dorset foram distribuídas em três tratamentos em um design completamente aleatório; T0: (n=20) com 1,5 kg de dieta completa, T1: (n=20) com 1,5 kg de dieta completa contendo 5% de polpa de café, T2: (n=20) com 1,5 kg de dieta completa contendo 10% de polpa de café. A suplementação realizou-se por 16 dias, antes do início da sincronização de estros e até o momento do acasalamento. O progestogênio (CIDR) foi inserido nas ovelhas durante 11 dias e uma dose de PGF2α foi aplicada dois dias antes da sua retirada. Doze horas após a retirada do CIDR iniciou-se a detecção de estros. Foram obtidas amostras de sangue durante o período de suplementação, para medição do estado oxidativo, capacidade antioxidante, glicose e insulina e até 9 dias posteriores ao início da estação de monta para determinar as concentrações de progesterona. O diagnostico de gestação realizou-se aos 30 e 60 dias post-monta. Uma análise de medidas repetidas de efeitos mistos e análise de freqüência foi realizada. Resultados: A inclusão de polpa por um período curto antes da estação de monta não afetou os parâmetros reprodutivos nem as concentrações de progesterona, glicose e insulina (p>0,05); porém, a capacidade antioxidante nas ovelhas foi aumentada, enquanto a oxidação lipídica seguiu uma tendência inversa (p<0,05). Conclusão: Inclusão de polpa de café na dieta de ovelha até 10% durante 16 dias antes do acasalamento melhora o estado oxidativo, sem causar efeitos adversos na porcentagem de gravidez, estro e prolificidade.
RESUMO
Abstract Background: Proper timing for embryo collection and transfer in horses -which is critical for the success of this biotechnology- is still debated. Additionally, there is little information on this technology under tropical conditions. Objective: To determine the best day for collection and transfer of embryos in Mangalarga Marchador mares under Brazilian northeast's conditions. Methods: Donors (n= 30) and recipients (n= 76) in diestrus phase were selected based on both clinical and gynecology examinations. Estrus was induced on both donor and recipient mares by intramuscular injection of 5 mg Dinoprost, aiming to obtain an ovulation interval of -1 to +3 between recipient and donor. Ovulation was induced with buserelin acetate when the largest follicle reached at least 35 mm in diameter. At this time, mares were subjected to artificial insemination at 48-hour intervals until ovulation. The embryos were collected on days 7, 8, and 9 after ovulation. Results: The embryo collection on day 8 was more efficient (p<0.05) than on day 7, but it was not more effective (p>0.05) than day 9, which presented the same efficiency (p>0.05) as day 7. From a total of 76 embryos transferred to the recipients, that were between days 4 and 9 after ovulation, there was no influence (p>0.05) of the day of transfer on pregnancy rate. Conclusions: The embryo collection must be performed on day 8 after ovulation, and transfer can be performed on any day of that interval (4-9) without affecting the pregnancy rate.
Resumen Antecedentes: El momento mas apropiado para la recolección y transferencia de embriones en equinos -que es fundamental para el éxito de esta biotecnología- continua siendo sujeto de estudio. Además, es escasa la información sobre esta tecnología en condiciones tropicales. Objetivo: Determinar el momento mas adecuado para la recolecta y transferencia de embriones en yeguas Mangalarga Marchador, en las condiciones del nordeste Brasileño. Métodos: Donadoras (n= 30) y receptoras (n= 76) en la fase de diestro se seleccionaron con base en los exámenes clínicos y ginecológicos. El estro de las yeguas donadoras y receptoras fue inducido con 5 mg de Dinoprost, vía intramuscular, intentando obtener un intervalo de ovulación de -1 a +3 entre la receptora y la donadora. La ovulación fue inducida con acetato de buserelina cuando el folículo mayor alcanzó 35 mm de diámetro. En ese momento, las yeguas fueron sometidas a inseminación artificial en intervalos de 48 horas hasta la ovulación. Los embriones fueron recolectados en los días 7, 8 y 9 después de la ovulación. Resultados: La recolecta de embriones en el día 8 fue más eficiente (p<0,05) que en el día 7, pero no fue más efectivo (p>0,05) que en el día 9, el cuál presentó la misma eficiencia (p>0,05) que en el día 7. De un total de 76 embriones transferidos a las receptoras, que se encontraban entre el día 4 y 9 después de la ovulación, no se registró influencia (p>0,05) del día de la transferencia en la tasa de preñez. Conclusiones: La recolecta embrionaria debe ser realizada el día 8 después de la ovulación, y la transferencia puede ser realizada en cualquier día de este intervalo (4 a 9) sin que se afecte la tasa de preñez.
Resumo Antecedentes: A importância do momentoda colheita e da transferência do embrião equino para o sucesso dessa biotécnica em equino continua sem ser completamente entendida. Adicionalmente, existe pouca informação sobre essa tecnologia em condições tropicais. Objetivo: Determinar o melhor dia para colheita e para transferência de embriões em eguas manga larga marchador nas condições do nordeste brasileiro. Métodos: Doadoras (n = 30) e receptoras (n = 76) na fase de diestro foram selecionadas com base nos exames clínico e ginecológicos. O estro das éguas doadoras e receptoras foi induzido com 5 mg de Dinoprost administrado por via intramuscular, buscando obter um intervalo de ovulação de -1 a +3 entre a receptora e a doadora. A ovulação foi induzida com acetato de buserelina quando o foliculo maior alcançou o tamanho de 35 mm de diâmetro. Nesse momento, as éguas foram submetidas a inseminação artificial em intervalos de 48 horas até a ovulação. Os embriões foram colhidos nos dias 7, 8 e 9 depois da ovulação. Resultados: A colheita de embriões no dia 8 foi mais eficiente (p<0,05) do que no dia 7, porem não foi mais efetivo (p>0,05) do que o dia 9, o qual apresentou a mesma eficiência (p>0,05) que o dia 7. De um total de 76 embriões transferidos para as receptoras que se encontravam entre os dias 4 e 9 depois da ovulação, não se registrou influência (p>0,05) do dia da transferência sobre a taxa de prenhez. Conclusões: A colheita embrionária deve ser realizada no dia 8 depois da ovulação, e a transferência pode ser realizada em qualquer dia desse intervalo (4-9) sem que a taxa de prenhez seja afetada.
RESUMO
El desarrollo de sistemas de cultivo in vitro que permitan obtener altos porcentajes de embriones viables es de gran importancia para la implementación de biotecnologías como el clonado y la transferencia de genes. Estudios tendientes a mejorar la eficiencia de los sistemas de cultivo embrionario son especialmente importantes en ganado caprino por el escaso desarrollo de estos métodos en dicha especie. El objetivo del presente estudio fue comparar el desarrollo de embriones caprinos fecundados in vivo cultivados: a) con células epiteliales de oviducto caprino (CEO), b) en fluido sintético de oviducto (SOF; del Inglés: synthetic oviduct fluid) o c) en medio condicionado por células epiteliales de oviducto caprino (MC). Embriones de 1-8 células colectados del oviducto de cabras superovuladas se cultivaron in vitro durante 4-5 días en los diferentes tratamientos. Al término del cultivo se estableció el estadio de desarrollo embrionario alcanzado y el número de células por embrión a partir de embriones teñidos con lacmoid. Un mayor porcentaje de embriones se desarrollaron hasta el estado de mórula/blastocisto en cocultivo comparado con los cultivados en SOF (75% vs. 41% respectivamente; P < 0,05) o MC (5,5%); mientras que el SOF resultó superior al MC para sustentar el desarrollo de los embriones caprinos hasta mórula/blastocisto. Los embriones producidos en cocultivo con CEO tenían más células que los cultivados en SOF (15,3 vs. 8,1 células/embrión; P < 0,05) y estos últimos más que los cultivados en MC. La viabilidad de los embriones generados en SOF se confirmó mediante transferencia a una cabra receptora, seguido por el nacimiento de 2 cabritos. En conclusión el cocultivo con CEO brinda mejores condiciones para sustentar el desarrollo in vitro de embriones caprinos en relación con los otros dos sistemas estudiados.
Development of reliable in vitro culture systems to produce high percentages of viable embryos is instrumental in the application of biotechnologies such as cloning and transgenesis. This is especially true for caprine species in which in vitro technology for embryo culture has been poorly developed. The objective of this study was to compare in vitro development of in vivo fertilized caprine embryos in: a) coculture with caprine oviductal epithelial cells (OEC), b) synthetic oviduct fluid (SOF), or c) medium conditioned by oviductal epithelial cells (CM). In vivo fertilized 1-8 cell caprine embryos collected by oviductal flushing were allocated to treatments and cultured for 4-5 days in vitro. At the end of the culture period, embryonic development was recorded and the number of cells per embryo was determined in lacmoid-stained embryos. A significantly higher percentage of embryos reached the morula/blastocyst stage in coculture compared with those cultured in SOF (75% vs. 41% respectively; P < 0.05) or CM (5.5%); SOF was superior to CM to supporting goat embryo development. Likewise, embryos grown in coculture with OEC had more cells than those cultured in SOF (15.3 vs. 8.1 cells/embryo; P < 0.05). Cell counts were higher in embryos cultured in SOF than those originated from CM. In conclusion, coculture of goat embryos with OEC provided superior conditions to support in vitro development of early-stage goat embryos compared with the other treatments studied.