Ultraestrutura e criopreservação de sêmen de jundiá amazônico (Leiarius marmoratus) em cativeiro / Ultrastructure and sperm cryopreservation of the amazon catfish (Leiarius marmoratus) in captivity

Os objetivos do presente estudo foram analisar a ultraestrutura do espermatozoide do jundiá amazônico e avaliar a sua criopreservação com três agentes crioprotetores (metanol 10%, DMSO 10% e etilenoglicol 10%) e duas soluções ativadoras (NaCl 0,29% e NaHCO3 1%). Como diluente, foi utilizada uma solução de glicose a 5%, sendo o sêmen envasado em palhetas de 0,25mL e congelado em vapor de nitrogênio (botijão dry shipper). No sêmen fresco, o espermatozoide apresentou comprimento de 25,46±2,54µm, cabeça esférica (1,51±0,18µm), ausência de acrossoma, peça intermediária com formato cônico (0,93±0,17µm), ligeiramente assimétrica, com presença de vesículas, e flagelo único (21,48±2,45µm). O sêmen descongelado apresentou valores mais altos (P<0,05) para duração, vigor e taxa de motilidade espermática com os crioprotetores metanol 10% e DMSO 10%. A duração da motilidade espermática foi maior (P<0,05) com o ativador NaHCO3 1% (21-96 s). O sêmen de Leiarius marmoratus criopreservado com DMSO e metanol apresentou, respectivamente, 7,32±4,21% e 8,94±6,69% de taxa de motilidade. No entanto, os resultados não foram satisfatórios para estabelecer um protocolo para a espécie.(AU)

The aims of this study were to describe the spermatozoon ultrastructure and to evaluate the sperm cryopreservation of the amazon catfish with three cryoprotectant agents (10% methanol, 10% DMSO, and 10% ethylene glycol) and two activator agents (0.29% NaCl and 1% NaHCO3). Glucose 5% extender was used as a diluent solution and sperm loaded in 0.25 straws was frozen in nitrogen vapor (dry shipper). Fresh spermatozoon was 25.46±2.54µm long, the head was spherical (1.51±0.18µm) with no acrosome, the midpiece was cone shaped (0.93±0.17µm) with presence of vesicles, slightly asymmetric, and the flagellum was single (21.48±2.45µm). Post-thawed semen presented higher values (P< 0.05) for duration, vigor and sperm motility rate with cryoprotectants 10% methanol and 10% DMSO. The duration of sperm motility was longer (P< 0,05) when triggered in 1% NaHCO3 (96-21 s). Leiarius marmoratus semen cryopreserved with DMSO and methanol, presented respectively 7.32±4.21% and 8.94±6.69% of motility. However, the results were not satisfactory to establish a protocol for the specie.(AU)

Use of aqueous extract of noni in extender for sheep semen freezing / Utilização do extrato aquoso de noni em diluente para congelação de sêmen ovino

The study aimed to evaluate the action of aqueous extract of noni in an extender for sheep semen freezing. Treatments differed in inclusion of aqueous extract of noni in the extender: T1 ˗ no addition; T2 ˗ 24µg/mL; T3 ˗ 72µg/mL; and T4 ˗ 120µg/mL. Ejaculates were collected, diluted in the four treatments, and frozen. After thawing, the semen was subjected to a thermoresistance test and evaluated for subjective motility, vigor, membrane integrity assessment by hypo-osmotic swelling test, live-dead assay, computer-assisted sperm analysis and the status of sperm capacitation and acrosome reaction. Data were subjected to ANOVA, and then to Student Newman Keuls's test at 5% significance level. In the thermoresistance test after two hours of incubation, motility in T4 (120µg/mL) was lower than in the other treatments, with no differences in the HoS test in either diluted semen or in the semen evaluated immediately post-thawing, while for the other times, treatments showed similar responses. Regarding the motility parameters, a difference was observed for progressive motility, curvilinear velocity, average path velocity, and amplitude of lateral head displacement. As to the sperm capacitation status, a difference was observed between treatments for the sperm capacitated with intact acrosome.(AU)

Este estudo teve como objetivo avaliar a ação do extrato aquoso de noni em diluente para congelação de sêmen de carneiro. Os tratamentos diferiram quanto à inclusão de extrato aquoso de noni ao meio diluidor em: T1˗ sem adição de extrato; T2˗ 24µg/mL ; T3- 72µg/mL e 120µg/mL. Por meio de vagina artificial, 16 ejaculados foram coletados, diluídos entre os quatro tratamentos e congelados. Após o descongelamento, o sêmen foi submetido ao teste de termorresistência e avaliado quanto à motilidade subjetiva, ao vigor espermático, à integridade de membrana pelo teste hiposmótico, bem como ao teste supravital, à análise de sêmen assistida por computador (CASA) e ao status de capacitação espermática e de reação acrossomal. Os dados foram submetidos a uma análise de variância, seguida pelo teste de Student-Newman-Keuls com 5% de significância. No teste de termorresistência, após duas horas de incubação, a motilidade do T4 (120µg/mL) apresentou-se inferior aos demais tratamentos. Não houve diferença significativa no teste HOS tanto para o sêmen diluído quanto para o sêmen avaliado imediatamente pós-descongelação; para as demais horas, os tratamentos apresentaram comportamento semelhante. Para os parâmetros de cinética, foi observada diferença estatística para motilidade progressiva, velocidade curvilinear, velocidade do percurso médio e amplitude de deslocamento lateral da cabeça. Quanto ao estado de capacitação espermática, observou-se diferença entre os tratamentos para espermatozoide capacitado com acrossomo intacto.(AU)

Fragmentación del ADN espermático e infertilidad masculina / Fragmentation of sperm DNA and male infertility

La integridad del ADN de los espermatozoides, es un indicador importante de la fertilidad, se utiliza como una variable adicional para evaluar, junto al espermograma, la calidad de una muestra seminal. En el presente trabajo se describen algunos aspectos de interés relacionados con la fragmentación del ADN espermático, cuya etiología es multifactorial y está relacionada con factores intrínsicos, como el empaquetamiento anormal de la cromatina durante la espermiogénesis, la apoptosis defectuosa antes de la eyaculación y la producción excesiva de especies reactivas del oxígeno; y con factores extrínsecos, como son los cambios en los hábitos de vida, la exposición a agentes tóxicos, así como la edad avanzada. La fragmentación está asociada al deterioro de las variables seminales, además afecta la fertilidad natural y la realizada por tratamientos de reproducción asistida, por lo que la implementación en los laboratorios de Andrología, de la tecnología para detectar si el ADN de los espermatozoides está íntegro o fragmentado, incorpora un nuevo conocimiento en el estudio de los hombres con trastornos de fertilidad, lo que contribuye a mejorar el diagnóstico y pronóstico de la infertilidad masculina. Para realizar este trabajo se revisaron 122 artículos, de los cuales 84 cumplieron con los criterios de calidad esperados. La búsqueda se realizó a través de los buscadores habituales(AU)

Sperm DNA´s integrity is an important indicator of fertility and it is used as an additional variable to evaluate the quality of a seminal sample, together with the spermogram. This paper describes some interesting aspects related to the fragmentation of sperm DNA, whose etiology is multifactorial and is related to intrinsic factors, such as the abnormal packing of chromatin during spermiogenesis, defective apoptosis before ejaculation, and the excessive production of oxygen´s reactive species; and with extrinsic factors, such as changes in life habits, exposure to toxic agents, as well as aging. Fragmentation is associated with the deterioration of seminal variables, it also affects natural fertility and that produced by assisted reproduction treatments, so the implementation in the andrology laboratories of the technology to detect if the DNA of the sperm is intact or fragmented incorporates a new knowledge in the study of men with fertility disorders, which contributes to improve the diagnosis and prognosis of male infertility. To carry out this work, 122 articles were reviewed, of which 84 met the expected quality criteria. The search was made through the usual search engines(AU)

Epididymal morphophysiology of adult collared peccaries (Pecari tajacu) / Morfofisiologia epididimária de catitus (Pecari tajacu) adultos

A functional understanding of the epididymis makes it possible to increase a species' fertility, since it facilitates the preservation of gametes for use in assisted reproduction techniques. This study analyzed the histological features of the different regions of the epididymis of the Pecari tajacu and the associated pathologies found in the spermatozoa present in this organ. After an orchiectomy surgery to remove the testicles and epididymis obtained from eight adult animals bred in captivity, fixation and histological processing of samples were carried out. The presence of pseudostratified columnar epithelium with stereocilia was observed in all regions of the epididymis (caput, corpus and caudal). Similarities were noted between the average height of the corpus and caudal epithelium, which differed from that found at the caput (1- proximal: region associated with the efferent ducts; 2- distal: region associated with corpus epididymis). It was also observed that the proximal caput presents a smaller average of the tubules diameter compared to other portions of the epididymis. Regarding pathologies of the spermatozoa, thirteen different types of morphological modifications were observed. Underdeveloped spermatozoa and detached heads were most frequently encountered along the epididymis of the collared peccaries. This study is a pioneer in the area and its data will serve as a basis for comparative research on the reproductive biology of artiodactyls, thus contributing to their conservation and reproduction.(AU)

O entendimento funcional do epidídimo possibilita o aumento da fertilidade de uma espécie, pois torna possível a preservação de gametas para o uso em técnicas de reprodução assistida. Este trabalho estudou os aspectos histológicos das diferentes regiões do epidídimo de Pecari tajacu, bem como as patologias associadas encontradas nos espermatozoides presentes nesse órgão. Após procedimento cirúrgico de orquiectomia, para remoção dos testículos e epidídimos, obtidos de oito animais adultos nascidos em cativeiro, realizou-se a fixação e o processamento histológico das amostras. Constatou-se em todas as regiões do epidídimo (cabeça, corpo e cauda) a presença de epitélio pseudoestratificado colunar com estereocílios. Foram observadas semelhanças entre a altura média do epitélio do corpo e da cauda, a qual era diferente da encontrada na cabeça (1- proximal: região associada aos ductos eferentes; 2- distal: região associada ao corpo do epidídimo). Foi verificado que a cabeça proximal apresenta a média de diâmetro dos túbulos menor em relação às demais porções do epidídimo. Em relação às patologias dos espermatozoides, constataram-se treze tipos diferentes de alterações morfológicas. Os espermatozoides subdesenvolvidos e cabeças soltas foram as mais frequentes ao longo do epidídimo de catitus. Os dados deste trabalho são pioneiros, e servirão como base para pesquisas comparativas sobre a biologia reprodutiva dos artiodátilos, contribuindo para a sua conservação e produção.(AU)

Avaliação do tocoferol no congelamento do sêmen bovino e nas taxas de prenhez após inseminação artificial em tempo fixo / Tocopherol evaluations at the freezing of bovine semen on the pregnancy rates after fixed time artificial insemination

O presente estudo avaliou se a adição de tocoferol no diluidor para a criopreservação de sêmen bovino reduz os danos causados pelo estresse oxidativo e melhora a capacidade fertilizante do sêmen utilizado na IATF. No primeiro lote sincronizado foram utilizadas 84 fêmeas Nelore (Bostaurusindicus) e no segundo lote 44 fêmeas. Para a inseminação artificial as vacas foram divididas aleatoriamente em dois grupos: controle (inseminadas com sêmen criopreservado sem uso de aditivos) e tocoferol (inseminadas com sêmen criopreservado com adição de 10mmol/mLtocoferol). Foram utilizados sêmen de três reprodutores da raça Nelore (Bos taurus indicus), sendo as doses provenientes de uma única partida, distribuída aleatoriamente entre as fêmeas inseminadas. O diagnóstico de gestação foi realizado 35 dias após a IATF por exame ultrassonográfico retal. O experimento foi realizado em delineamento inteiramente casualizado, e a taxa de prenhez comparada pelo teste qui-quadrado. A adição de 10mmol/mL de tocoferol no diluidor do sêmen não influenciou (P>0,05) na taxa de prenhez após IATF em comparação ao grupo controle (sem aditivos) para as médias do primeiro lote sincronizado (n=84; 38,5% vs 40%), segundo lote sincronizado (n=44; 28% vs 31,6%) e para a média geral dos lotes (n=128; 34,4% vs 37,5%). Nas condições experimentais a adição de 10mmol de tocoferol ao meio crioprotetor do sêmen não melhorou a taxa de prenhez após a inseminação artificial em tempo fixo na espécie bovina.

The present study evaluated if the addition of tocopherol to the extender semen cryopreservation reduces the damage caused by oxidative stress and preserves the fertilizing capacity of semen used in FTAI. In the first lot we used 84 synchronized females Nelore (Bos taurus indicus) and the second lot 44 females.For the artificial insemination the cows were randomly divided into two groups: control (inseminated with semen cryopreserved without using additives) and treatment (inseminated with semen cryopreserved with added 10 mmol/ml tocoferol). We used three semen sires Nelore (Bos taurus indicus), with doses starting from a single, randomly distributed among females inseminated. The pregnancy diagnosis was done 35 days after FTAI by rectal ultrasonography. The experimental design was completely randomized and pregnancy rates compared by chi-square test. There were no effect (P> 0.05) in pregnancy rate using cryopreserved semen with added 10mmol/ml tocopherol in the bovine semen extender compared to the control group (no additives) in the first synchronized group (n = 84, 38.5% vs 40%), in the second synchronized group (n = 44, 28% vs 31.6%) and the all animals (n = 128, 34.4% vs 37.5%). We conclude that, under the experimentalconditions, the addition of 10 mmol of tocopherol in the semen extender did not improve the pregnancy rate after FTAI in the bovine species.

Morphology and ultrastructure of the freshwater rotifer Brachionus bidentatus (Monogononta: Brachionidae) using scanning and transmission electron microscopy / Morfología y ultraestructura del rotífero de agua dulce Brachionus bidentatus (Monogononta: Brachionidae), utilizando microscopía electrónica de barrido y transmisión

The study of sexual reproductive behavior supported by ultrastructural evidence is important in rotifers to describe differences among potential cryptic species. In this research, the morphology of the rotifer Brachionus bidentatus is described at the ultrastructural level, using electronic microscopy, together with a brief description and discussion of its sexual reproductive behavior. The characteristics of the (a) male,(b) the female, (c) the sexual egg or cyst, (d) the partenogenic egg, (e) the no-fecundated sexual egg (male egg), and (f) the trophi, were described. Another part of this research is dedicated to the ultrastructure of the sex cells of the male rotifer B. bidentatus. Samples were obtained from La Punta pond in Cosio, Aguascalientes, Mexico (22°08’ N - 102°24’ W), and a culture was maintained in the laboratory. Fifty organisms, from different stages of the rotifer Brachionus bidentatus, were fixed in Formol at 4% and then prepared; besides, for the trophi, 25 female rotifer Brachionus bidentatus were prepared for observation in a JEOL 5900 LV scanning electronic microscope. In addition, for the observation of male sex cells, 500 males of Brachionus bidentatus were isolated, fixed and observed in a JEOL 1010 transmission microscope. Females of B. bidentatus in laboratory cultures had a lifespan of five days (mean±one SD=4.69±0.48; N=13), and produced 4.5+3.67 (N=6) parthenogenetic eggs during such lifespan. In the case of non-fertilized sexual eggs, they produced up to 18 eggs (mean±one SD=13±4.93; N=7). Sexual females produced a single cyst on average (mean±one SD=1±0; N=20). For the sexual cycle, the time of copulation between male and female ranged from 10 to 40 seconds (mean±one SD=17.33±10.55, N=7). The spermatozoa are composed of a celular body and a flagellum, the size of the body is of 300nm while the flagellum measures 1 700nm. The rods have a double membrane. Their mean length is almost 2.45µm±0.74, N=6; and their mean wide is 0.773µm±0.241, N=11. The evidence on the specific ultrastructural characteristics of the rotifer B. bidentatus is notorious, even more in the male and in the cyst cell. Regarding the ultrastructure of the spermatozoa and the rods, compared to other species they only differ in size, despite their structural resemblance. Our study of the ultraestructure of this species adds useful information that along with molecular data will help clarify the taxonomy of brachionid rotifers. Rev. Biol. Trop. 61 (4): 1737-1745. Epub 2013 December 01.

El estudio del comportamiento reproductivo sexual apoyado en evidencias ultraestructurales en rotíferos, es importante para describir diferencias entre especies potencialmente crípticas. En este trabajo se describe a nivel ultraestructural la morfología del rotífero Brachionus bidentatus, usando microscopía electrónica, junto con una breve descripción y discusión de su comportamiento sexual reproductivo. Se presentan las características del: (a) macho, (b) hembra, (c) huevo partenogenético, (d) huevo sexual no fecundado, (e) trofos. También se muestra un apartado sobre la ultra estructura de las células sexuales de rotíferos macho B. bidentatus. Para el estudio se utilizó una cepa proveniente del bordo La Punta (22°08’ N - 102°24’ W), ubicado en Cosió, estado de Aguascalientes, México y se cultivaron en el laboratorio. Para el procesamiento de las muestras se tomaron 50 organismos fijados en Formol al 4%, de los diferentes estadios del rotífero Brachionus bidentatus, mientras que para el trofos se tomaron 25 organismos hembra del rotífero Brachionis bidentatus y se prepararon para observarse en un microscopio electrónico de barrido JEOL 5900 LV, mientras que para las observaciones de las células sexuales del macho se aislaron 500 organismos machos del rotífero Brachionus bidentatus, se fijaron e incluyeron en resina epóxica (EPON) para su observación en un microscopio electrónico de transmisión JEOL 1010 operado a 80kv. Los análisis obtenidos de hembras de B. bidentatus en cultivos de laboratorio demuestran un ciclo de vida de cinco días (4.69±0.48; N=13), y una producción de 4.5±3.67 (N=6) huevos partenogenéticos. En el caso de los huevos no fertilizados, la hembra produce más de 18 huevos (13±4.93; N=7). Para los huevos sexuales solo se produce uno solo por hembra (1±0; N=20). En el ciclo sexual, los tiempos de copula entre el macho y la hembra están en el rango de 10 a 40 segundos (17.33±10.55, N=7). Los espermatozoides se componen de un cuerpo celular y un flagelo, el tamaño del cuerpo celular es de 300nm mientras que el flagelo mide 1 700nm. Los bastones presentan una doble membrana y su tamaño a lo largo va de 2.45µm±0.74; N=6 mientras que el ancho es de 0.773µm±0.241; N=11. La evidencia sobre las características específicas ultraestructurales del rotífero B. bidentatus son notorias, más aun en el macho y en el quiste. En cuanto a la ultraestructura de los espermatozoides y los bastones respecto a otras especies sólo difieren en su tamaño, a pesar de las similitudes estructurales las estructuras de los bastones se evidencian con mayor claridad y dan más evidencias sobre su funcionalidad. Nuestro estudio de la ultraesturctura de esta especie añade información útil que junto con un análisis molecular ayudarán a clarificar la taxonomía de rotíferos brachionidos.

Aproximación al desempeño operativo de un modelo de redes neuronales en el diagnóstico de la infertilidad masculina / Approach to operational performance of a neuronal network model in the diagnosis of male infertility

Objetivo: realizar una aproximación a la capacidad de las redes neuronales supervisadas para clasificar lizando los parámetros seminales convencionales. Materiales y métodos: estudio de corte transversal ensamblado sobre la base de datos del Grupo Reproducción de la Universidad de Antioquia, en el que se escogieron hombres con problemas re-productivos en los doce meses previos y hombres con antecedente de haber tenido hijos. Muestreo por conveniencia. Se tomaron en cuenta: la edad, el tiempo de abstinencia sexual, el volumen del eyaculado, el pH, los porcentajes de movilidad y de viabilidad, y la concentración espermática. Mediante una red neuronal supervisada se desarrolló un modelo de entrenamiento y un modelo de validación. Resultados: se incluyeron 204 hombres. Para el modelo de entrenamiento 129 hombres, 35 para la validación, 40 para probar el modelo y 25 para la validación externa. En el modelo de la red neuronal clasificó adecuadamente el 90% de los sujetos con problemas reproductivos y el 91% de los sujetos cuadamente el 40% de los sujetos con problemas reproductivos y el 100% de los sujetos fértiles. Conclusión: las redes neuronales surgen como una tecnología que podría ser valiosa para el estudio de la infertilidad masculina. Se requieren evaluaciones más rigurosas para definir su real utilidad en el estudio de la pareja infértil

Objective: To determine the ability of supervised neuronal networks at making the appropriate classification of fertile and infertile men using conventional seminal parameters. Materials and methods: Cross-sectional study assembled on the database of the Universidad de Antioquia Reproduction Group, with a selection of men experiencing reproductive problems within the previous 12 months, and men with a history of having had children. Convenience sampling. The data considered were age, time of sexual abstinence, ejaculate volume, pH, percentage of sperm motility, viability and concentration. Using a supervised neuronal network, a training model and a validation model were created. Results: Overall, 204 men were included, 129 for the training model, 35 for validation, 40 for testing the model and 25 for external validation. The neuronal network model made the correct classification of 90% of the subjects with reproductive problems, and 91% of the fertile subjects. In the validation model, the neuronal network made the correct classification of 40% of the subjects with reproductive problems, and 100% of the fertile subjects. Conclusion: Neuronal networks emerge as a technology that may prove to be valuable for the study of male infertility. More rigorous evaluations are required in order to determine their true usefulness in the study of infertile couples

Actividad espermicida y citotóxica del extracto de Sapindus saponaria L. (jaboncillo) / Evaluation of the spermicidal and cytotoxic activity of extracts of Sapindus saponaria L. (jaboncillo)

Introducción: los espermicidas están entre los métodos anticonceptivos que pueden inmovilizar o matar los espermatozoides. Objetivo: evaluar la actividad espermicida y citotóxica de los extractos de Sapindus saponaria L., conocida como jaboncillo, sobre espermatozoides humanos y la línea celular HeLa, respectivamente. Métodos: las muestras de semen donadas por individuos sanos se incubaron con los extractos de Sapindus saponaria L. y sus respectivas fracciones. La movilidad y la viabilidad espermática se evaluó antes y después de cada tratamiento. Adicionalmente, el efecto citotóxico del extracto se valoró sobre la línea celular HeLa mediante el ensayo 3-(4,5 dimetiltiazol-2-il)-5-(3-carboximetoxifenil)-2-(4-sulfofenil)-2H-tetrazolio (MTS). Resultados: el máximo efecto espermicida se observó cuando las muestras de semen se incubaron con la fracción polar del extracto de hojas de Sapindus saponaria L., luego de 5 min de tratamiento (p< 0,05). No se encontró efecto citotóxico en la línea celular HeLa luego de 6 y 12 h de tratamiento con la fracción polar del extracto de hojas. Conclusión: el extracto de Sapindus saponaria L. puede ser una nueva opción como espermicida con menos efectos adversos.

Introduction: spermicides are contraceptive methods aimed at either immobilizing or killing spermatozoa. Objective: evaluate the spermicidal and cytotoxic activity of extracts of Sapindus saponaria L. (jaboncillo) on human spermatozoa and the HeLa cell line, respectively. Methods: semen samples from healthy individuals were incubated with extracts of Sapindus saponaria L. and their fractions. Sperm motility and viability were measured before and after each treatment. Additionally, the cytotoxic effect of the extract on the HeLa cell line was assessed by the 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxy methoxy phenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium MTS assay. Results: maximum spermicidal effect was observed when semen samples were incubated with the polar fraction of Sapindus saponaria L. leaf extract after 5 minutes of treatment (p< 0.05). No cytotoxic effect on the HeLa cell line was found after 6 and 12 hours of treatment with the polar fraction of the leaf extract. Conclusion: the extract of Sapindus saponaria L. may be a new spermicidal option with fewer adverse effects.

Diferencias del estado redox entre espermatozoides y plasma seminal en adultos jóvenes / Difference of redux status between spermatozoa and seminal plasma in young adults

Introducción: Las especies reactivas del oxígeno y el estrés oxidativo desempeñan un papel fundamental en la infertilidad masculina. Sin embargo, estas especies oxidantes también han sido asociadas con los procesos de capacitación de los gametos masculinos cuando son generadas a bajos niveles y de manera controlada. Actualmente los biomarcadores redox son introducidos en el diagnóstico clínico de la infertilidad masculina en el mundo, como una herramienta complementaria a los parámetros del espermiograma. Sin embargo, en Cuba, esta metodología aún no se encuentra extendida a los servicios de salud. Objetivo: El objetivo del presente trabajo fue caracterizar el estado redox de espermatozoides y el líquido seminal de sujetos aparentemente sanos, a través de la determinación de una serie de biomarcadores de estrés oxidativo. Los niveles de malonildialdehído, la actividad de las enzimas antioxidantes superóxido dismutasa y catalasa, así como los niveles de glutatión reducido, el potencial de peroxidación y la capacidad reductora fueron determinados mediante técnicas espectrofotométricas. Métodos: Se analizaron 40 muestras de semen de sujetos aparentemente sanos, las cuales fueron obtenidas mediante masturbación sin el empleo de lubricantes y con al menos tres días de abstinencia eyaculatoria. En el estudio se incluyeron sujetos de 20 a 35 años, aparentemente sanos según exámenes de laboratorio clínico y con paternidad probada. Resultados: Los resultados demostraron que existen diferencias significativas (p< 0,05) entre los marcadores evaluados en el líquido seminal con respecto al espermatozoide, lo cual sugiere la existencia de un estado redox diferenciado entre ambos compartimentos. Conclusiones: Estos hallazgos demuestran la necesidad de evaluar el nivel de estrés oxidativo tanto en las células sexuales como en el fluido que las contiene. Ello contribuirá, sin lugar a dudas, a un diagnóstico más eficaz e integral de la capacidad fértil del hombre

Background: Reactive oxygen species and oxidative stress play a fundamental role in male infertility. However, these oxidizing species have also been associated with the process of capability of male gametes when they are generated at low levels and in a controlled manner. Currently, redox biomarkers are introduced in the clinical diagnosis of male infertility in the world as a complementary tool to the spermiogram parameters. However, in Cuba, this methodology is not yet extended to health services. Objective: The objective of this study was to characterize the redox status of spermatozoa and seminal fluid of apparently healthy subjects through the identification of a number of biomarkers of oxidative stress. Methods: 40 samples of semen of apparently healthy subjects were analyzed, which were obtained by masturbation without the use of lubricants and with at least 3 days of ejaculatory abstinence. The study included subjects from 20 to 35 years of age, who were apparently healthy according to both laboratory tests and paternity test results. Results: The results showed that there are significant differences (p<0, 05) between the markers evaluated in the seminal fluid and the spermatozoon which suggests the existence of a differentiated redux status between the two compartments. Conclusions: These findings demonstrate the need to evaluate the level of oxidative stress in both sexual cells and the fluid that contains them. It will contribute, with no doubt, to a more effective and comprehensive diagnosis of man's fertility

Buserelin acetate-induced spermiation in Leptodactylus ocellatus and evaluation of semen characteristics / Espermiação com acetato de buserelina em Leptodactylus ocellatus e avaliação de características seminais

By understanding the hormonal action behind the induction of spermiation in Leptodactylus ocellatus can help in the collection of semen for artificial insemination and cryopreservation. The experiments were conducted at the Experimental Frog Farm of the Federal University of Viçosa. Seven L. ocellatus males with the following secondary sexual characteristics were selected: black thorns, developed forelimbs, and amplexus reflex. Spermiation was induced in these animals by applying daily 0.4 µg buserelin acetate hormone (GnRHa) for 7 days, being the semen collected 90 min after the application. The volume, color, vigor, motility, sperm concentration, and spermatozoa morphology were subsequently evaluated. Three animals responded to GnRHa induction, enabling the collection of seven samples of semen, and the first sample was collected 97.5h after the first application. The semen of the creole frog presented the following characteristics: an average volume of 0.38 mL, murky color, sperm vigor of 3.71, sperm motility of 77.14%, sperm concentration of 6.60 x 106 SPTZ mL-1, and 69% of normal sperm. GnRHa can induce spermiation in the creole frog. Although the volume of collected semen was low, the color, vigor, motility, concentration, and spermatozoa content showed to be adequate.

O conhecimento da ação de hormônios na indução à espermiação de Leptodactylus ocellatus pode permitir a coleta de sêmen para estudos de fertilização artificial e criopreservação. O experimento foi realizado no Ranário Experimental da Universidade Federal de Viçosa, onde sete machos de L. ocellatus com as características sexuais secundárias: acúleos negros, membros anteriores desenvolvidos e reflexos ao amplexo foram induzidos à espermiação com aplicação do hormônio acetato de buserelina (GnRHa) na dosagem de 0,4 µg, durante sete dias a cada 24h e o sêmen coletado após 90 min. O volume, cor do sêmen, vigor espermático, motilidade espermática, concentração espermática e morfologia dos espermatozoides foram avaliados. Três animais responderam à indução pelo acetato de buserelina permitindo a coleta de sete amostras de sêmen, a primeira após 97,5h da primeira aplicação. O sêmen da rã-manteiga apresentou volume médio de 0,38 mL, coloração turva, vigor espermático de 3,71; motilidade espermática de 77,14%, concentração de 6,60 x 106 SPTZ mL-1 e 69% de espermatozoides normais. O acetato de buserelina pode induzir à espermiação da rã-manteiga. O volume seminal coletado foi baixo, mas a coloração, vigor, motilidade, concentração e número de espermatozoides de L. ocellatus foram adequados.

Modulation of spermatozoon acrosome reaction

Spermatozoon acrosome reaction is an exocytotic event of the utmost importance for the development of mammalian fertilisation. Current evidence shows that the triggering of the acrosome reaction (AR) could be regulated by the action of diverse compounds, namely, metabolites, neurotransmitters and hormones. The aim of the present review is to describe the modulating effects of several compounds that have been classified as inductors or inhibitors of acrosome reaction. Among AR inductors, it is necessary to mention progesterone, angiotensin II, atrial natriuretic peptide, cathecolamines, insulin, leptin, relaxin and other hormones. Regarding the inhibitors, oestradiol and epidermal growth factor are among the substances that retard AR. It is worth mentioning that gamma-aminobutyric acid, a neurotransmitter known to be an inhibitor in the central nervous system, has been shown to induce AR. The multiple hormones located in the fluids of the female reproductive tract are also likely to act as subtle regulators of AR, constituting a fundamental aspect for the development of successful fertilisation. Finally, it is necessary to emphasise that the study of regulation exerted by hormones and other compounds on AR is essential for further understanding of mammalian reproductive biology, especially spermatozoon physiology.

Alterações de cromatina em espermatozóides de ovinos e caprinos avaliadas por azul de toluidina e alaranjado de acridina / Chromatin alterations in ram and goat spermatozoa evaluated by toluidine blue and acridine orange

Reprodutores com espermograma normal podem se comportar como subférteis ou passarem por períodos de subfertilidade. As alterações na cromatina dos espermatozóides são possíveis explicações encontradas para tais comportamentos. Conduziu-se este trabalho, com o objetivo de testar a eficiência de azul de toluidina (AT) e do alaranjado de acridina (AA) na identificação de alterações na compactação de cromatina em espermatozóides de ovinos e caprinos, além de avaliar a correlação entre essas alterações e as de morfologia espermática. Para tal, foram avaliadas amostras de sêmen de 15 ovinos e de 15 caprinos, com dez repetições para cada método por animal. Calcularam-se a média, o desvio padrão (DP) e o coeficiente de variação (CV) para cada técnica e animal. Utilizou-se o teste t-Student para avaliar diferença entre as médias obtidas nos dois métodos. Também foram calculados a correlação de Pearson e os coeficientes kappa ponderado e não ponderado para avaliar a concordância entre os métodos com AT e AA. Foi verificado que nem sempre as anomalias morfológicas de cabeça são acompanhadas por alterações na cromatina identificáveis pelos métodos utilizados neste trabalho. O método AT é mais estável e possui maior sensibilidade do que AA para ambas as espécies, sendo o mais indicado para caprinos. Contudo, em razão de apresentar repetibilidade muito baixa, ambos os métodos não são indicados para avaliação espermática em ovinos.

Males with normal spermogram can behave as subfertile or pass for periods of subfertility. Chromatin alterations of spermatozoa can account for such behavior. The objective of the present work was to test the efficacy of toluidine blue (TB) and acridine orange (AO) in the identification of alterations in chromatin compaction in spermatozoa from rams and goats, in addition to evaluate the correlation between those alterations and the ones of spermatic morphology. In order to do that, samples of semen from 15 rams and 15 goats were evaluated with 10 replications for each method. Mean, standard deviation and coefficient of variation were calculated for each animal and technique. Student's t-test was used to evaluate differences between the averages of two methods. Pearson correlation coefficient, weighted and non weighted kappa coefficient were also calculated to evaluate the agreement between methods with TB and AO. It was verified that morphological alterations of head not always are accompanied by alterations in chromatin identified by the methods used in this work. The TB method is more stable and sensitive than AO method for both species and this is most appropriate for goats. However, due to the very low repeatability, both methods are not indicated for evaluating ram spermatozoa.

Criopreservação de espermatozóides eqüinos comparando duas curvas de congelamento combinadas com diluentes comerciais: uma análise laboratorial / Cryopreservation of equine spermatozoa comparing different freezing rates combined with commercial extenders: laboratorial analysis

Durante o processo de criopreservação de sêmen, os espermatozóides sofrem alguns danos que resultam na diminuição da fertilidade deste. O presente estudo foi realizado com o objetivo de avaliar os efeitos da utilização combinada de duas curvas de congelamento com dois diluentes comerciais (FR-5® e Botu-Crio®) sobre a criopreservação de sêmen eqüino. Foram analisados 20 ejaculados de dois garanhões. As amostras foram avaliadas por microscopia de contraste de fase e microscopia de epifluorescência, observando-se a motilidade progressiva e total do sêmen pós-descongelamento e a integridade e a funcionalidade da membrana dos espermatozóides. A combinação entre curva automatizada e Botu-Crio® apresentou as maiores médias nas análises de motilidade total e progressiva, após o descongelamento. O diluente Botu-Crio®, isoladamente, preservou também as membranas destes, quando foram realizadas as análises de integridade utilizando teste com diacetato de carboxifluoresceína e iodeto de propídio e funcionalidade de membrana pelo teste hiposmótico.

During semen cryopreservation, sperm cells were submitted to several deleterious events leading to membrane damage which result in fertility decrease. This study was designed to compare the effects of two freezing techniques (conventional and automated), and the use of two commercial extenders as cryoprotectants (FR-5® and Botu-Crio®) on total and progressive motility, integrity and functionality of spermatic membranes during the cryopreservation of equine semen. Twenty ejaculates from two stallions were analyzed. The total and progressive motility of fresh and post-thawing semen samples were evaluated by patterns assays. Function of plasmatic membrane was measured by the hipoosmotic swelling test. Integrity of plasmatic membrane was evaluated using carboxifluorescein diacatate and iodidium propide fluorescent probes. There were significant differences between the two freezing techniques and/or between cryoprotectants for all assessed parameters. The combination of Botu-Crio® and automated curves showed better results on total and progressive post-thawing motility. The extender Botu-Crio®, alone, showed to better preserve the membrane integrity and function.

Determinação da razão ótima de espermatozóides por ovócitos de piabanha Brycon insignis (pisces - characidae) / Determination of the optimum ratio of spermatozoa per oocyte of the piabanha Brycon insignis

Determinou-se a razão ótima de espermatozóides por ovócitos da piabanha Brycon insignis, utilizando-se dois machos e duas fêmeas da espécie, submetidos ao procedimento de desova induzida. Os gametas foram extrusados manualmente 200 horas-grau após a aplicação do extrato bruto de hipófise. Os ovócitos foram misturados e deste pool retiraram-se amostras com 2g de ovócitos (701 ovócitos/g). O sêmen do pool foi diluído em solução de NaCL 1,2 por cento de tal forma que, após a adição de 1ml do sêmen diluído aos ovócitos, fossem obtidas as seguintes razões espermatozóides por ovócitos em cada tratamento: T1=86.662, T2=173.324, T3=259.986, T4=346.648 e T5=433.310. A taxa de fertilização do sêmen não diluído usado como controle foi de 65,3 por cento. Após ativação espermática com NaHCO3 1 por cento e fecundação, os ovos foram transferidos para as incubadoras e nelas foram observadas as seguintes percentagens de fertilização em relação à do grupo-controle: T1=35,7 por cento, T2=53,1 por cento, T3=79,1 por cento, T4=93,4 por cento e T5=87,8 por cento. A percentagem de fertilização (em relação ao controle) aumentou de forma linear, segundo a equação de regressão: Y=15,55+0,0002297X (P<0,01; R²=0,98), até a proporção de 314.481 espermatozóides por ovócitos, após o que a taxa de fertilização se estabilizou no limite de 88 por cento

The optimum spermatozoa:oocyte ratio of piabanha Brycon insignis was studied. Two males and two females were induced to spawn, and the gametes were stripped after 200 hourgrades starting from the application of carp pituitary gland. Oocytes from two females were mixed, and samples of 2g (701 oocytes/g) were collected from the obtained pool and placed into plastic cups. The semen from the two males, after mixed to compose a pool, was diluted in NaCl solution (1.2 percent) so that, after the addition of 1ml of diluted sperm into the oocytes, the following spermatozoa:oocyte ratios (tri-replicated) were obtained: T1=86,662, T2=173,324, T3=259,986, T4=346,648 and T5=433,310. After the activation using 1 percent NaHCO3 and fertilization, the eggs were transferred to incubators, and observed the percentages of fertilization relative to the control. T1=35.7 percent, T2=53.1 percent, T3=79.1 percent, T4=93.4 percent and T5=87.8 percent. Undiluted semen was used as "control", which showed 65 percent of fertilization. The percentage of fertilization (relative to the control) increased linearly according to the regression Y= 15.55 + 0.0002297X (P<0.01; R²=0.98), until the proportion of 314,481 spermatozoa per oocyte, and, from this point, the fertilization rate maintained at 88 percent

Observaciones morfohistológicas del testículo y espermatozoides de Microlophus peruvianus (Lesson, 1826) (Sauria:Tropiduridae)

El presente trabajo proporciona información morfohistológica de los testículos y espermatozoides de 5 individuos de la lagartija peruana Microlophus peruvianus (Lesson, 1826), procedentes de Huaral, Lima (11º 26´S; 77º24´W); colectados durante el mes de setiembre de 2005. El trabajo de campo se combinó con el análisis de laboratorio de las gónadas. La longitud promedio hocico-cloaca fue de 91,3mm ± 13,655, encontrándose todos los individuos con gran actividad meiótica en la línea espermatogénica con un grosor del epitelio germinativo de 126,33 μm ± 0,092, lo que sugiere que el mes de colecta estaría dentro de su ciclo activo de reproducción. La línea espermatogénica presenta los tipos celulares típicos de la espermatogénesis: espermatogonias (3,544 μm ± 0,4513), espermatocitos primarios (4,864 μm ± 0,5292), espermátides (2,85 μm ± 0,4071); no se encontraron espermatocitos secundarios. La morfología y biometría del espermatozoide de M. peruvianus propone su importancia como valor taxonómico.

The present work provides morphological and histological information of the testicles and spermatozoon of 5 specimens of the Peruvian small lizard Microlophus peruvianus (Lesson, 1826), from Huaral, Lima (11º 26´S; 77º24´W); collected during September, 2005. The fieldwork was combined with the gonads analysis at the laboratory. The snout-sewer length average was 91,3mm ± 13.655; all specimens deals a great spermatogenic meiotic activity showing a germinative epithelium thickness of 126.33 mm ± 0.092, which suggests that the month of collect would be within its active cycle of reproduction. The spermatogenic cells present the typical cellular types of the spermatogenesis: spermatogonias (3.544 mm ± 0.4513), primary espermatocitos (4.864 mm ± 0.5292), spermatids (2.85 mm ± 0.4071); No secondary spermatocytes where founded. The morphology and biometry of the spermatozoon of M. peruvianus proposes its importance as taxonomic value.

Avaliação de diferentes técnicas para coloração de sêmen de peixes / Different techniques to evaluate to stain fish semen / Evaluación de técnicas para colorear sémen de peces

A análise da morfologia dos espermatozóides do sêmen colhido de 30 pacus (Piaractus mesopotamicus) consistiu de três soluções fixadoras: formol salina tamponada (FS), citrato sódio diidratado a 3% (CS) e água destilado (Ag) e para corar as células espermáticas três corantes: Vermelho Congo (VC), Rosa Bengala (RB) e Williams-modificado (WM). As combinações de corantes e soluções fixadoras utilizadas foram: RB X FS, WM X FS, VC X FS, VC X Ag, WM X Ag, WM X CS e VC X CS. Na avaliação dos esfregaços levaram-se em consideração as alterações anatômicas, a eficiência do corante, a aglutinação e a sujidade. Quando o sêmen foi diluído em CS e Ag, os espermatozóides sofreram alterações anatômicas e aglutinação, inviabilizando a análise. O FS não gerou alteração anatômica e nem aglutinação dos espermatozóides, sendo possível avaliar a eficiência do corante. Ao analisar a combinação RB X FS verificou-se a melhor média estimada de 9,97 pontos (P<0,05), com baixa sujidade e boa eficiência do corante. A combinação WM X FS resultou na média estimada de 7,35 pontos e a do VC X FS de 6,83 pontos que foram valores menores (P<0,05) em comparação aos esfregaços da combinação RB X FS. De acordo com os resultados obtidos neste estudo, a combinação do RB X FS apresentou os melhores resultados, sendo recomendado preparar esfregaços para analisar a morfologia dos espermatozóides de pacus (Piaractus mesopotamicus).

The analyses of spermatozoa morphology from semen obtained from pacus (Piaractus mesopotamicus) consisted of three fi xers solution: formal-saline buffered (FB), 3 % sodium citrate diihydrated (SC) and distilled water (DW) and to stain the spermatic cells were used three dyeing: Congo red (CR), Bengal rose (BR) and Williams modifi ed (WM). Combinations of dyeing and fi xers solution were: BR x BF, WM x FB, CR x FB, CR x DW, WM x DW, WM x SC and CR x SC. In the rubbing brush stained evaluation was considered spermatozoa anatomic alterations, dyeing effi ciency, agglutination and dirtiness. For semen diluted in SC and DW was observed spermatozoa anatomic alterations and agglutination on the rubbing brush, becoming impossible any analyses. When semen was diluted in FB to prepare rubbing brush was not observed spermatozoa anatomic alterations and agglutination, becoming possible to evaluate dyeing effi ciency. In analyze of BR x FB combination was verifi ed the best estimate average of 9.97 points (P<0.05), showing reduced dirtiness and good effi ciency of dyeing. When combination was WM x FB the estimate average was 7.35 points and CR x FB was 6.83 points which were lower (P<0.05) than the average verifi ed in the rubbing brush stained with BR x FB. According to the results observed in this study, the best combination to evaluate spermatozoa morphology from pacus semen was rubbing brush stained with BR x FB combination.

El análisis de la morfologia de los espermatozoides del semen colectado de 30 pacus (Piaractus mesopotamicus) consistio en tres soluciones fi jadoras: Formol salina tamponada (FS), citrato sodio bihidratado al 3% (CS) y agua destilada (Ag) y para colorear las células espermáticas tres colorantes: Rojo Congo (VC), Rosa Bengala (RB) y Williams ­ modifi cado (WM). Las combinaciones de colorantes y soluciones fi jadoras utilizadas fueron: RB x FS, WB x FS, VC x FS, VC x Ag, WM x Ag, WM x CS y VC x CS. En la evaluación de los frotis se tuvo en cuenta las alteraciones anatómicas, la efi ciencia del colorante, la aglutinacion y la suciedad. Cuando el semen fue diluído en CS y Ag, los espermatozoides sufrieron alteraciones anatómicas y aglutinación, inviabilizando el análisis. El FS no generó alteracion anatómica ni aglutinación de losespermatozoides, siendo posible evaluar la efi ciencia del colorante. Al analizar la combinación RB x FS se verifi có la mejor média estimada de 9,97 puntos (P〈0,05) con baja suciedad y buena efi ciencia del colorante. La combinación WM x FS resultó en el promedio estimado de 7,35 puntos y la de VC x FS de 6,83 puntos que fueron valores menores (P〈0,05) en comparación a los frotis de la combinación RB x FS. De acuerdo con los resultados obtenidos en este estudio, la combinación de RB x FS presentó los mejores resultados, siendo recomendado para preparar frotis para analizar la morfologia de los espermatozoides de pacus (Piaractus mesopotamicus).

Aspectos morfológicos e ultraestruturais do Espermatozóide de Curimata Inornata Vari, 1989 (Pisces, Teleostei) do Rio Amazonas

Morphological and ultrastructural aspects of the spermatozoon of Curimata inornata Vari, 1989 (Pisces, Teleostei) is described by light and transmission electron microscopy, the spermatozoon head contains a nucleus ovoid-shaped, with granular chomatin electron dense, a short middle piece and a tail, with the classic 9+2 axoneme.

Estão descritos aspectos morfológicos e ultraestruturais do espermatozóide de Curimata inornata Vavi, 1989 (Pisces,Teleostei) observados com microsopia óptica e microscopia eletrônica de transmissão. O espermatozóide é constituído de cabeça, contendo um núcleo ovoide com cromatina granular densa, uma peça intermediária curta e uma cauda com a constituição axonêmica clássica de microtúbulos de 9p+2.