Detecção de Aeromonas spp. e do gene de virulência aerolisina em tilápias do Nilo (Oreochromis niloticus) com a técnica de mPCR / Detection of Aeromonas spp. and virulence gene aerolysin in Nile tilapia (Oreochromis niloticus) using PCR technique

As infecções causadas por bactérias do gênero Aeromonas estão entre as doenças mais comuns em peixes cultivados em todo o mundo, com ocorrência de aeromoniose em todos os países que possuem cultivo de tilápia do Nilo (Oreochromis niloticus). O presente trabalho descreve o desenvolvimento de uma nova multiplex PCR (mPCR) para diagnóstico de Aeromonas spp. e identificação do gene aerolisina (aerA). Para padronização da mPCR foram utilizadas cepas de referência de várias espécies do gênero Aeromonas e de outros gêneros. Também foram usadas cepas de campo de A. hydrophila oriundas de cultivos de peixes pacamãs (Lophiosilurus alexandri) e Aeromonas spp. de tilápias do Nilo. Os primers foram desenhados com base na região 16S rRNA e aerA. Para verificar a melhor temperatura de anelamento foram utilizados gradientes entre 59°C a 61°C com 40ng de DNA molde. Os produtos da amplificação da região 16S rRNA e do gene aerA apresentaram 786 e 550pb, respectivamente. A mPCR apresentou melhor temperatura de anelamento a 57,6°C com limite de detecção das concentrações de DNA em ambos genes (16S rRNA and aerA) de 10-10g/μL. A mPCR padronizada é rápida, sensível e específica no diagnóstico de Aeromonas spp. e identificação do gene aerolisina. Esta metodologia apresenta vantagens quando comparada aos métodos de diagnóstico convencionais, podendo ser utilizada em cultivos comerciais de tilápias do Nilo ou outros peixes. A identificação do gene aerolisina é uma importante ferramenta na determinação do potencial patogênico dos isolados de Aeromonas spp. estudados.(AU)

Infections caused by bacteria of the genus Aeromonas are among the most common diseases in fish farming systems worldwide, and this disease occurs in all countries which have Nile tilapia (Oreochromis niloticus) farmed. The present work describes the development of a new multiplex PCR (mPCR) technique that diagnosis the genus Aeromonas and detects aerolysin gene (aerA). Reference strains of several Aeromonas species and other genera were used for standardization of mPCR. Strains of A. hydrophila from "pacaman" fish (Lophiosilurus alexandri) and Aeromonas spp. from Nile tilapia from farming systems were used too. Primers were designed based on the 16S rRNA region and aerA (aerolysin toxin). To verify a better annealing temperature were used gradients between 59°C and 61°C with 40ng of the DNA template. The 16S rRNA gene and the aerA gene amplification products showed 786 and 550 bp, respectively. The mPCR showed better annealing temperature at 57.6°C, and the detection limit for both genes (16S rRNA and aerA) was 10-10g/μL of the DNA. The standardized mPCR is quick, sensitive, and specific for Aeromonas spp. diagnosis and to detect aerolysin gene. This method showed advantages when compared to the conventional diagnostic methods and can be used in Nile tilapia or other fish farming systems. The detection of aerolysin gene is an important tool to determine the potential pathogenicity of Aeromonas spp. isolates.(AU)

Descentralización del diagnóstico de influenza pandémica en Chile: implementación laboratorios regionales de RT-PCR / Decentralization of pandemic influenza diagnosis in Chile: implementing regional laboratories RT-PCR

Debido a la pandemia de influenza A (H1N1) en el mundo, el Ministerio de Salud en Chile desarrolló un proyectodestinado a fortalecer la capacidad de los laboratorios descentralizados, mediante utilización de la técnica de biología molecular RT-PCR. El proyecto contempló: 1) Readecuación de los espacios físicos en los laboratorios clínicos, 2) compra de equipamiento, 3) adquisición de reactivos e insumos de laboratorio, 4) adquisición de materiales para la toma de muestra, 5) capacitación del recurso humano y 6) verificación del correcto funcionamiento del laboratorio. Al 2010, se encuentran funcionando 6 laboratorios que emplean RT-PCR; se ha obtenido un 100 por ciento de concordancia de las muestras y las autoridades centrales han elaborado un algoritmo de derivación de muestras respiratorias por parte de los 29 Servicios de Salud a los laboratorios regionales, basado en grupos objetivos establecidos en la vigilancia de influenza.

Due to pandemic influenza A (H1N1) in the world, the Ministry of Health in Chile developed a project to strengthen decentralized laboratory capacity through the use of molecular biology technique RT-PCR. The project included: 1) Renovating the physical space in clinical laboratories, 2) purchasing equipment, 3) purchasing laboratory reagents and supplies, 4) acquiring materials for sample collection, 5) human resource training 6) verifying the proper functioning of the laboratory. By 2010, 6 laboratories employing RT-PCR are running, a 100 percent match of the samples has been obtained and the central authorities have developed an algorithm for derivation of respiratory specimens from the 29 Health Services to regional laboratories based on target groups established in the surveillance of influenza.