Avaliação da sororretividade cruzada entre a infecção por Trypanosoma caninum e a leishmaniose visceral canina / Evaluation of serological cross-reactivity between natural infection by Trypanosoma caninum and canine visceral leishmaniasis

Os testes sorológicos constituem um importante instrumento para o diagnóstico da leishmaniose visceral (LV), sendo os inquéritos sorológicos caninos uma das medidas recomendadas pelo Ministério da Saúde brasileiro, para o controle da doença humana. Trypanosoma caninum é um parasita recentemente descrito em cães domésticos em diferentes áreas de LV. Considerando a importância do cão no ciclo de transmissão de L. chagasi e a possibilidade desse novo parasita confundir o diagnóstico para leishmaniose, este estudo objetivou investigar o status sorológico de animais infectados por T. caninum e avaliar a reatividade cruzada com os testes sorológicos empregados na rotina de controle da LV no Brasil. Foram analisadas 117 amostras de soro de cães classificadas em 3 grupos: grupo Tc (animais infectados por T. caninum), grupo Lc (infectados por L. chagasi) e grupo Co (controles saudáveis) - com os kits disponibilizados para a rede pública - imunofluorescência indireta (IFI-LVC), ELISA (EIE-LVC) e teste imunocromatográfico (DPP) - e com testes in house empregando antígenos de T. caninum (IFI-Tc e ELISA-Tc) e de L. chagasi (IFILc e ELISA-Lc). Os cães infectados por T. caninum reagiram ao IFI-Tc e ELISA-Tc com sensibilidade de 64.1 por cento e 94.9 por cento e especificidade de 23.1 por cento e 35.9 por cento, respectivamente. Para os testes comerciais IFI-LVC, EIE-LVC e DPP, a sensibilidade foi de 100 por cento e especificidade de 70.5 por cento, 68 por cento e 97.5 por cento respectivamente. A especificidade destes testes tornou-se mais elevada quando o grupo Tc foi excluído das análises, com diferença significativa para IFI-LVC (x2=4.36, p=0.036) e não significativa para os demais testes (EIE-LVC - x2=2,87, p=0,089; DPP - x2=0,05, p=0,818)...

Serologic tests constitute an important tool for the diagnosis of visceralleishmaniasis (VL), being canine serologic inquiries one of the measuresrecommended by the Brazilian Health Ministry, to control the human disease.Trypanosoma caninum is a parasite recently described in domestic dogs indifferent endemic areas of LV. Considering the importance of the dog to thecycle of transmission of L. chagasi and the possibility of this new parasite toconfuse the diagnosis for leishmaniasis, this study aimed to investigate theserological status of animals infected by T. caninum and to evaluate the crossreactivityin serologic tests employed to the routine control of the LV in Brazil. Aset of 117 serum samples of dogs divided into 3 groups had been analyzed - Tcgroup (animals infected by T. caninum), Lc group (animals infected by L.chagasi) and Co group (healthy controls) - with kits available for the healthpublic services - indirect imunofluorescence test (IFI-LVC), ELISA (EIE-LVC)and immunocromatographic test (DPP) - and with in house tests using T.caninum (IIF-Tc and ELISA-Tc) and L. chagasi (IIF-Lc and ELISA-Lc) antigens. Dogs infected by T. caninum had reacted to IIF-Tc and ELISA-Tc with sensitivityof 64.1 percent and 94.9 percent , and specificity of 23.1 percent and 35.9 percent , respectively. Forcommercial tests IFI-LVC, EIE-LVC and DPP, sensitivity were of 100 percent andspecificity of 70.5 percent , 68 percent and 97,5 percent respectively...

Ocorrência de leishmania chagasi e outros tripanosomatídeos em câes de Cuiabá, Mato Grosso: Avaliação clinica e uso de diferentes métodos de diagnóstico laboratorial / Occurrence of Leishmania chagasi in dogs and other trypanosomatids in Cuiabá, Mato Grosso: Clinical evaluation and use of different methods of laboratory diagnosis

Na cidade de Cuiabá, o conhecimento de aspectos da leishmaniose visceral canina (LVC) é ainda muito escasso, apesar de casos humanos serem relatados nessa cidade. Este estudo objetivou avaliar clinicamente e por diferentes métodos laboratoriais cães domésticos domiciliados em áreas urbana e rural, no município de Cuiabá, Mato Grosso. Os animais foram selecionados por meio de busca ativa em cinco bairros e por demanda espontânea durante atendimento no hospital veterinário da UFMT. Os cães foram avaliados por ferramentas sorológicas, parasitológicas e moleculares, empregando diferentes amostras biológicas. Dos 430 cães obtidos por busca ativa, 95 (22,1 por cento) foram reatores pela imunofluorescência indireta. Esse dado foi considerado para análise dos fatores de risco e, tanto aspectos relacionados ao hábito dos animais (livre acesso à rua e função de guarda), assim como do ambiente (rural e presença de plantações) foram considerados como fatores de risco importantes para a aquisição da infecção canina. A cultura parasitológica, utilizando amostras dos 430 cães oriundos do inquérito epidemiológico e 52 do atendimento no HOVET-UFMT, permitiu o isolamento de L. chagasi em 54 (11,2 por cento) cães...

A pele intacta foi a melhor amostra biológica de isolamento do parasito em cães sintomáticos, porém nos cães assintomáticos, a melhor amostra para isolamento foi a medula óssea. Por PCR, utilizando apenas os cães da busca ativa, DNA de L. chagasi foi detectada em diferentes amostras biológicas, diagnosticando 63 (14,6 por cento) dos cães. O aspirado de linfonodo foi a melhor amostra para diagnosticar leishmaniose, pela PCR, independente do status clínico dos animais. O protozoário Trypanosoma caninum foi isolado exclusivamente de pele integra em 14 cães, demonstrando a presença desta espécie pela primeira vez em Cuiabá. Nossos resultados sugerem que a infecção por esse parasito, possa ser transitória e curse sem sinais clínicos específicos. Além de T. caninum, a infecção por T. cruzi em um cão foi também descrita na cidade de Cuiabá. Os resultados apresentados neste estudo contribuem para o conhecimento de aspectos da LVC em Cuiabá. Esta cidade possui características propícias para a instalação da leishmaniose visceral, sendo necessária inclusão de ações educacionais e sanitárias. Com relação ao diagnóstico canino, enfatizamos que a utilização de diferentes amostras clínicas, associadas a diferentes técnicas laboratoriais, proporcionam um diagnóstico acurado da LVC e auxiliam o diagnóstico diferencial com outros agentes que estejam circulando nesses animais. A infecção por L. chagasi, T. caninum e T. cruzi diagnosticados em cães domiciliados em Cuiabá demonstram a sobreposição de tais agentes, constituindo dados importantes para a vigilância epidemiológica nessa região...

Avaliação clínica e laboratorial de cães Sororreatores para Leishmania provenientes de inquérito sorológico realizado no município do Rio de Janeiro / Clinical and laboratory evaluation of dogs to Leishmania Sororreatores from serological survey conducted in the city of Rio de Janeiro

As leishmanioses, na sua forma tegumentar (LT) e visceral (LV), são doenças complexas em diferentes aspectos, cujas ações de controle devem ser adequadas ao contexto epidemiológico para que possam ser efetivas. Em áreas de LV, o cão doméstico constitui a principal fonte de infecção para os insetos vetores, fato que tem direcionado esforços na identificação e eliminação dos animais soropositivos. No município do Rio de Janeiro, embora casos humanos de LV sejam raros, tem-se observado, nos últimos anos, um aumento gradual dos índices de soroprevalência canina. No ano de 2008, o programa de controle de leishmaniose identificou, nesse município, 168 cães com títulos ≥40 pela técnica de imunofluorescência indireta (IFI) em sangue dessecado em papel filtro. Com o objetivo de confirmar a infecção por Leishmania, este estudo avaliou esse grupo de cães, os quais foram submetidos à eutanásia e coleta de espécimes clínicos. Coletaram-se sangue e fragmentos teciduais (pele íntegra, lesões cutâneas e de baço). O sangue foi processado e submetido às técnicas de IFI, ensaio imunoenzimático (EIE) e o teste imunocromatográfico dual pack platform (DPP). Os fragmentos teciduais foram processados para isolamento parasitário em meio de cultura e identificação por isoenzimas e fragmentos de pele íntegra para pesquisa de DNA de Leishmania através da reação em cadeia pela polimerase (PCR)...

Dos 168 animais identificados no inquérito, 155 foram estudados. Dos animais, 48% eram machos e 52% fêmeas oriundos de diferentes localidades. Desse grupo, 6% eram sintomáticos, 54% oligossintomáticos e 40% eram assintomáticos para LV. Na reavaliação sorológica com amostras de soro de 144 animais, no momento da eutanásia, 28% e 10% foram positivos com sensibilidade de 73% e 60%, à IFI quando antígenos de Leishmania major-like e Leishmania Leishmania chagasi foram, respectivamente, utilizados nos ensaios. No teste imunoenzimático EIE com antígeno de L. major-like e L.(L.)chagasi, 22% e 17% foram positivos com sensibilidade de 93% e 100%, respectivamente. O teste DPP demonstrou que 17% dos animais foram positivos, com sensibilidade de 93%, com amostras de soro. Trinta e nove por cento (56/144) dos animais foram positivos a sorologia independente das técnicas ou antígenos empregados...

O isolamento parasitário foi obtido em 29 animais, dos quais L.(L.) chagasi foi isolada de 14 e Leishmania (Viannia)braziliensis de 5 cães, este último exclusivamente em fragmentos de lesões cutâneas. Um animal apresentou infecção mista, com isolamento simultâneo de L. (V.)braziliensis e L.(L.)chagasi e de sete animais isolou-se Trypanosoma caninum exclusivamente de pele íntegra. Em dois animais, promastigotas isoladas em fragmentos de baço, foram perdidas e não puderam ser identificadas. Pela PCR, 17 animais foram positivos. Os resultados considerando todas as técnicas empregadas (cultura, IFI, EIE, DPP e PCR), demonstraram que 59% (91/155) dos animais avaliados foram negativos. Dessa forma, esse estudo alerta para as particularidades do município do Rio de Janeiro que devem ser consideradas junto ao programa de controle da leishmaniose visceral...

Caracterização de flagelados do gênero trypanosoma, Gruby 1843, em cães domésticos (canis familiares) no município do Rio de Janeiro / Characterization of the trypanosome flagellum gender Gruby 1843, in domestic dogs (canis family) in the municipality of Rio de Janeiro

O envolvimento do cão doméstico com diferentes membros da família Trypanosomatidae tem sido foco de inúmeros estudos, principalmente pela relação de proximidade que este animal possui com o ser humano. Recentemente foi descrito, no município do Rio de Janeiro, uma nova espécie do gênero Trypanosoma (T. caninum) infectando esse animal. A princípio, acreditou-se tratar-se de um achado ocasional, entretanto, outros isolados, similares à espécie inicialmente descrita, foram posteriormente obtidos de outros 20 animais. Este estudo objetivou a identificação de 19 novos isolados do gênero Trypanosoma, além da avaliação dos animais e do seu ambiente. Todas as amostras foram isoladas a partir de cultivo de pele íntegra e analisadas morfologicamente, por ensaios bioquímicos através da eletroforese de isoenzimas e moleculares por PCR, utilizando primers D75/76 (genérico para família Trypanosomatidae); primers D71/72 e 121/122 (específico para T. cruzi) e primers R1/R2 (específico para T. rangeli). Os animais foram avaliados quanto à presença de anticorpos anti-Leishmania sp. através da IFI e, avaliados pela hemocultura e xenodiagnóstico...

Através das ferramentas aplicadas neste estudo, todas as 19 amostras de parasitas isoladas foram identificadas como Trypanosoma caninum. A avaliação dos animais demonstrou que 90 por cento deles estavam em bom estado geral e que 50 por cento (10) apresentaram reatividade sorológica para Leishmaniose com títulos que variaram de 1:40 - 1:320. Todas as hemoculturas foram negativas, assim como o exame dos triatomíneos. A hipótese da circulação deste protozoário entre cães no município do Rio de Janeiro deve ser considerada. Discute-se a importância de se estabelecer um diagnóstico correto nesses animais e as possíveis conseqüências deste achado em áreas de ocorrência da Leishmaniose Visceral...