RESUMO
Objetivo: Evaluar la actividad antibacteriana in vitro veneno de Hadruroides charcasus contra a Pseudomonas aeruginosa y Staphylococcus aureus. Material y métodos. Por estimulación eléctrica se obtuvo el veneno del escorpión H. charcasus y posteriormente fue cuantificado por el método de relación de absorbancias, [mg/mL]=(1,56 x Abs 280nm) (0,76 x Abs 260nm). Se realizó electroforesis, en condiciones desnaturantes (PAGE-SDS),usando un gel del 10 % y 12 % de entrecruzamiento. A través del sistema Amicon® Ultra 0.5, se hizo laconcentración de las fracciones de proteínas y péptidos. Para evaluar la actividad antibacteriana se empleó cepasde P. aeruginosa y S. aureus, se hizo el método de microdilución en microplaca de 96 pozos para determinar laconcentración mínima inhibitoria (CMI). Resultados. La fracción soluble del veneno total presentó unaconcentración de 2,26 mg/mL y por PAGE-SDS, se observaron bandas con un rango peso molecular entre 7,0 9,1kDa. Se obtuvo una CMI de 0,07 mg/mL y de 0,565 mg/mL para P. aeruginosa y S. aureus una CMI de 0,035 mg/mLConclusión. el veneno del escorpión H. charcasus mostró actividad antibacteriana, con una concentración mínimainhibitoria diferente para cepas tanto S. aureus como para P. aeruginosa.
Objetive: To evaluate the in vitro antibacterial activity of Hadruroides charcasus venom against Pseudomonasaeruginosa and Staphylococcus aureus. Material andmethods. The venom of the scorpion H. charcasus wasobtained by electrical stimulation and subsequently it was quantified by the absorbance ratio method, [mg /mL] = (1.56 x Abs 280nm) - (0.76 x Abs 260nm).Electrophoresis was performed under denaturingconditions (PAGE-SDS), using a 10% gel and 12% crosslinking. Through the Amicon® Ultra-0.5 system,the concentration of protein and peptide fractions was made. To evaluate the antibacterial activity, strains of P. aeruginosa and S. aureus were used; the microdilution method was carried out in a 96-well microplate to determine the minimum inhibitory concentration (MIC). Results The soluble fraction of the total venom showed a concentration of 2,26 mg/mL and by PAGESDS, bands with a molecular weight range between 7.0- 9.1 kDa were observed. An MIC of 0,07 mg / mL and 0,565 mg / mL for P. aeruginosa and S. aureus was obtained with a MIC of 0,035 mg/mL. Conclusion. The scorpion venom H. charcasus showed antibacterial activity, with a different minimum inhibitory concentration for both S. aureus and P. aeruginosa strains.
RESUMO
In order to evidence the hematological changes induced by the venom of the scorpion Tityus discrepans, a sublethal dose of Tityus discrepans venom (Tdv, 1 µg/g) in a total volume of 0.1 mL was intraperitoneally injected in BALB/c female mice (20±2 g; n=20). Mice were anesthetized and blood samples were withdrawn by cardiocentesis at 0 h, 3 h, 6 h, and 12 h after Tdv administration. Hematologic analyses were performed by routine procedures. A significant (p<0.05) increase in hematocrit, hemoglobin concentration and total protein concentration was observed at 3 h and 6 h, possibly due to dehydration, splenic contraction and acute-phase protein induction. The red blood cell count in envenomed mice was significantly (p<0.05) higher in comparison with the control only at 12 h. Tityus discrepans venom caused neutrophilia and lymphopenia probably as a result of catecholamine release, without significant (p>0.05) changes in absolute leukocyte count. Neither platelets number nor hematimetric indexes significantly (p>0.05) changed. Altogether, these results suggest that Tdv administration induces alterations in the hematologic profile in mice.
Para evidenciar los cambios hematológicos inducidos por la inyección intraperitoneal de una dosis subletal (1 µg/g) de veneno del escorpión Tityus discrepans (VTd), se usaron ratones hembras de la raza BALB/c con un peso de 20±2g (n=20). Los ratones fueron anestesiados y se obtuvieron muestras de sangre por cardiocentesis a las 0 h, 3 h, 6 h y 12 h después de administrado el VTd. Los análisis hematológicos fueron realizados por procedimientos rutinarios. Se observó un aumento significativo (p<0,05) en el hematocrito, la concentración de hemoglobina y la concentración de proteínas plasmáticas a las 3 h y 6 h, posiblemente debido a deshidratación, contracción esplénica e inducción de proteínas de fase aguda. El conteo de glóbulos rojos en ratones envenenados fue significativamente (p<0,05) mayor en comparación con el control sólo a las 12 h. El VTd causó neutrofilia y linfopenia probablemente debido a la liberación de catecolaminas, sin observarse cambios significativos (p>0,05) en el conteo total de leucocitos. Ni el número de plaquetas ni los índices hematimétricos fueron afectados significativamente (p>0,05) por la administración de VTd. Considerando los hallazgos, la administración de VTd induce alteraciones en el perfil hematológico en ratones.
RESUMO
Mediante cromatografía de intercambio catiónico en CM-Sephadex C-25 (16 x 1,1 cm) con buffer acetato de amonio 0,05 M a pH 7, del veneno del escorpión Brachistosternus ehrenbergii fue aislada una proteína con acción tóxica sobre ratones albinos. En este sistema la toxina interactúa con el gel y es eluida al final luego de usar el mismo buffer conteniendo NaCl 0,6M. La toxina fue denominada Be1 y es una proteína básica que constituye el 8,1% de la proteína total del veneno. La pureza de la toxina fue evaluada por electroforesis en condiciones nativas, de acuerdo al método de Reisfeld, y en condiciones denaturantes por el método de Schägger y von Jagow, determinándose que la toxina es una sola cadena polipeptídica de 6,3 kDa. La inoculación de 60 μg de toxina en ratones albinos, vía intraperitoneal, genera la aparición de algunos signos locales como hipersecreción salival, seguido por afección respiratoria, arrastre de las patas posteriores, hasta finalmente al cabo de 2 horas, producir la muerte. Vía intramuscular (7,6 μg), Be1 produce parálisis temporal de la extremidad inoculada. La toxina no tiene actividades de fosfolipasa, proteasa, acetilcolinesterasa ni actividad inhibidora de acetilcolinesterasa.
By means of cationic exchange chromatography on CM-Sephadex C-25 column (16 x 1,1 cm) with ammonium acetate buffer 0,05 M at pH 7, from Brachistosternus ehrenbergii scorpion venom was isolated a protein with toxic activity on mice. In this system the toxin was ligated to gel and was eluated with buffer and NaCl 0,6M. The toxin denominated Be1 and it characterizes to be a basic protein that constitute 8,1% of venom total protein. Toxin purity was evaluated by electrophoresis in natives conditions, according to Reisfeld-method, and denaturants conditions by the Schägger-and-von Jagow-method, the toxin is a single chain polypeptide of 6,3 kDa has been determined. The inoculation of 60 μg toxin on albino mice, intraperitoneal way, produces some local signals as salival hipersecretion followed by respiratory affection, drags hind feet and finally 2 hours after, death. Intramuscular way (7,6 μg) Be1 produces temporal paralysis of the inoculated limb. The toxin has neither phospholipase, nor protease, nor acetylcholinesterase nor acetylcholinesterase inhibitor activity.