UMSAgen, método para la extracción simultánea de RNA y DNA para diagnóstico molecular / UMSAgen, the method for simultaneous extraction RNA and DNA for molecular diagnostics

INTRODUCCIÓNEl RNA y el DNA son materiales genéticos de la célula cuya extracción es útil para la medicina moderna. Actualmente existen varios métodosde extracción de RNA y DNA por separado y a costos altos. En este trabajo se describe el método UMSAgen como alternativa para laextracción simultanea de RNA total y DNA genómico para diagnósticos moleculares. MATERIAL Y MÉTODOSSe obtuvieron veinte muestras de médula ósea de pacientes con leucemia mieloide crónica. Los leucocitos fueron separados de los glóbulosrojos con tampón de lisis. Aproximadamente 3 x 106 de células fueron lisadas en guanidio y conservadas a -20 ºC hasta el momento dela extracción del RNA y DNA. Se realizaron extracciones con 3 diferentes métodos: a) El método comercial Quiagen para el RNA total, b) elmétodo clásico fenol-cloroformo para el DNA genómico y c) el método UMSAgen para extracción simultanea de RNA y DNA. RESULTADOSLa pureza del RNA total y DNA genómico extraídos por el método UMSAgen es similar a la extraída con el Kit Quiagen para el RNA y latécnica clásica para el DNA. La evaluación realizada por electroforesis en agarosa y la amplifi cación del daño molecular BCR-ABL y JAK-2V617F, por RT-PCR y PCR respectivamente, fue exitosa. CONCLUSIÓNE: método UMSAgen es una alternativa fácil y económica para la extracción de RNA total y DNA genómico en diagnóstico e investigación molecular...

INTRODUCTION The RNA and the DNA are genetic materials of the cell. The RNA/DNA extraction is necessary in modern medicine. Several RNA/DNA isolation methods exist but they are very expensive and therefore not applicable in our country. In this work, we describe the UMSAgen method as an alternative for simultaneous total RNA and genomic DNA extraction for molecular diagnosis. MATERIAL AND METHODS Twenty bone marrow samples of chronic myeloid leukemia patients were obtained. The leukocytes were separated from the erythrocytes with lyses solution; 3x106 cells were lysed in guanidio solution and conserved at -20ºC until the extraction procedure.The extraction of nucleotide acids was realized by 3 different methods: a) commercial method QuiagenTM for RNA extraction, b) classic method (phenol/chloroform) for DNA extraction and c) UMSAgen method for simultaneous RNA/DNA extraction. The two fi rst methods were used as a control test for UMSAgen.RESULTS The quality and quantity of total RNA and genomic DNA obtained by the UMSAgen method were similar to that of the QuiagenTM Kit and the classic method, respectively. The ABL-BCR and JAK-2V617F amplifi cation by RT-PCR and PCR were successful. CONCLUSIONS The UMSAgen is an easy and inexpensive altrernative method for total RNA and genomic DNA extraction in diagnostic and biomolecular research.

DNA-UMSAgen, extracción de DNA genómica para diagnóstico molecular: método rápido y económico / UMSAgen DNA, genomic DNA extraction for molecular diagnosis: rapid and economical method

Introducción. El estudio del ácido desoxirribunocleico (DNA) es imprescindible para la medicina moderna; por ello, se ha diseñado diferentes técnicas para su extracción, cuyos costos son altos y de tiempo prolongado. En este trabajo se describe un método modificado de extracción de DNA (DNA-UMSAgen) basado en la técnica de Miller. Métodos. Las células mononucleares fueron obtenidas de sangre venosa periférica de un sujeto voluntario, para realizar 40 extracciones de DNA; 20 con el método modificado DNA_UMSAgen y otros 20 con el método clásico. Posteriormente se evaluó la concentración, calidad y utilidad de estos DNA extraidos. Resultados. La pureza del DNA extraido por el método DNA-UMSAgen es de 1,88 similar al de la técnica clásica 1,91, las concentraciones obtenidas son 20,4 ug/106 cel y 56ug/106 cel respectivamente. La evaluación por electroforesis en agarosa y la amplificación del exon 12 del gen JAK2 por PCR fue satisfactoria. Conclusión. El método DNA-UMSAgen es una alternativa de extracción de DNA genómico, rápido y económico, adecuado para paises en vias de desarrollo.

INTRODUCTIONDNA is the genetic material of the cell. Actually for its study, laboratory techniques are available that require its extraction free of impurities. This paper describes the DNA-UMSAgen method as an alternative for DNA extraction which is based on the Miller technique.METHODSThe mononuclear cells were obtained of venous peripheral blood of a voluntary subject, for to realize 40 DNA's extractions; 20 with the modified method DNA-UMSAgen and other 20 with the classic method. Later there was evaluated the concentration, quality and utility of these extracted DNA.RESULTSThe DNA purity extracted by the DNA-UMSAgen method is 1,88 similar to the classic technique 1,91, the concentration obtained were 20,4 ug/106 cells and 56ug/106 cells respectively. The evaluation by agarose gel electrophoresis and the amplification of the exon 12 of the JAK2 gen by PCR was successful.CONCLUSIONThe DNA-UMSAgen extraction method is a very acceptable fast, easy and inexpensive alternative method for underdeveloped countries for DNA extraction.