Use of a commercial ELISA kit specific for glycoprotein E peptides to indirectly detect Caprine Herpesvirus 1 (CpHV-1) in the state of São Paulo, Brazil / Uso de kit ELISA comercial específico para peptídeos da glicoproteína E para detecção indireta de Herpesvírus Caprino tipo 1 (CpHv-1) no estado de São Paulo, Brasil

Caprine herpesvirus 1 (CpHV-1) infection is associated with clinical manifestations related to animal age, with high mortality in kids and infertility in adults. Given the scarcity of research about the epidemiological situation of this infection in Brazilian flocks, we aimed to conduct a cross-sectional descriptive study to detect antibodies against CpHV-1 in goats in the state of São Paulo, Brazil. Fifty-five male and female goats ­ kids and adult ­ were assessed in this study. Blood serum was analyzed by a commercial ELISA kit to detect antibodies against CpHV-1, which had not been used in Brazil before. No animals were reactive. Brazil lacks information about CpHV-1 infection in goat flocks. Continuing the study is crucial to understand the epidemiological situation of the disease and establish protocols for infection control.(AU)

A infecção pelo Herpesvírus Caprino tipo 1 (CpHv-1) está associada a manifestações clínicas relacionadas à idade dos animais, com alta mortalidade em filhotes e infertilidade em adultos. Diante da escassez de estudos sobre situação epidemiológica dessa infecção nos rebanhos brasileiros, a presente pesquisa teve como objetivo realizar um estudo transversal e descritivo para a detecção de anticorpos anti-Herpesvírus Caprino tipo 1 em caprinos do estado de São Paulo, Brasil. Foram avaliados 55 caprinos machos e fêmeas, filhotes e adultos. O soro sanguíneo foi analisado por um kit ELISA comercial para detecção de anticorpos contra CpHv-1, de utilização inédita no Brasil. Nenhum animal estudado foi sororreagente. O Brasil carece de informações acerca da infecção pelo Herpesvírus Caprino tipo 1 nos rebanhos caprinos do país. A continuidade do estudo é imprescindível para compreender a situação epidemiológica da enfermidade e estabelecer protocolos para controle da infecção.(AU)

First report of antibodies to Neospora spp. in horses from Portugal / Primeira ocorrência de anticorpos anti-Neospora spp. em cavalos de Portugal

Abstract Neospora spp. are intracellular protozoa with worldwide distribution and closely related to Toxoplasma gondii, which can infect a variety of mammals including horses. From September 2013 to June 2014, 185 horses from northern, central and southern parts of mainland Portugal were randomly sampled and tested for detection of immunoglobulin (Ig) G antibodies to Neospora spp. using an indirect multi-species enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) commercial test (ID Screen® Neospora caninum Indirect Multi-species; ID.vet Innovative Diagnostics, Grabels, France). Two horses (1.1%; CI: 0.1-3.8%), one male and one female, were found to be seropositive for Neospora spp. Both seropositive animals were horses housed indoors but with access to outdoors, used for leisure activities and were apparently healthy, with good body condition and with no alterations at physical examination. This was the first serologic survey of antibodies to Neospora spp. carried out in horses from Portugal.

Resumo Neospora spp. são protozoários intracelulares com distribuição mundial e estreitamente relacionados com Toxoplasma gondii, que podem infectar uma variedade de mamíferos, incluindo cavalos. De setembro de 2013 a junho de 2014, 185 cavalos de áreas do Norte, Centro e Sul de Portugal continental foram aleatoriamente amostrados e testados para a detecção de anticorpos imunoglobulinas (Ig) G anti-Neospora spp., utilizando-se um ensaio imunoenzimático (ELISA) indireto multi-espécies comercial (ID Screen® Neospora caninum Indirect Multi-species; ID.vet Innovative Diagnostics, Grabels, France). Dois cavalos (1,1%; IC: 0,1-3,8%), um macho e uma fêmea, foram detectados como seropositivos para Neospora spp. Ambos os animais seropositivos eram cavalos mantidos em cocheiras mas com acesso aos piquetes, eram utilizados para atividades de lazer e estavam aparentemente saudáveis, com boa condição corporal e sem alterações ao exame físico. Essa é o primeiro rastreio de anticorpos para Neospora spp. realizado em cavalos de Portugal.

Inmunoserología y métodos moleculares para el diagnóstico de Chagas: revisión sistemática rápida / Immunoserology and molecular techniques for diagnosis of Chagas´ disease: rapid systematic review / Imunoserologia e métodos moleculares para o diagnóstico de Chagas: revisão sistemática rápida

Con el objetivo de incrementar la precisión diagnóstica, la Organización Mundial de la Salud recomienda la realización de dos o más pruebas inmunoserológicas para el diagnóstico de la enfermedad de Chagas en etapa crónica. El objetivo de este trabajo fue realizar una revisión sistemática rápida acerca del desempeño de las técnicas inmunoserológicas y métodos moleculares en la población general. Se identificaron 178 estudios de los cuales fueron incluidos nueve. Las técnicas de ELISA mostraron la mayor sensibilidad (82-98%) y especificidad (96-100%). Los métodos rápidos mostraron valores de sensibilidad entre 88-93% y especificidad 97- 100%, mientras que los métodos moleculares (PCR) presentaron niveles muy variables de sensibilidad (22-92%) y especificidad (70-100%). Estos resultados muestran que las técnicas de ELISA cuentan con una sensibilidad y especificidad adecuadas. La PCR, al igual que los métodos rápidos, mostró una gran variabilidad en los resultados, debido principalmente a la heterogeneidad de la técnicas y profusión de métodos elaborados de manera in house.

In order to increase diagnostic accuracy, the World Health Organization recommends performing two or more immunoserological tests for the diagnosis of Chagas disease in chronic stage. The aim of this work was to make a rapid systematic review of the performance of immunoserological techniques and molecular methods in the general population. A total of 178 studies were identified, nine ofwhich were included. ELISA techniques showed the highest sensitivity (82-98%) and specificity (96-100%). Rapid methods presented values of sensitivity between 88-93% and 97-100% of specificity, while the molecular methods (PCR) showed highly variable levels of sensitivity (22-92%) and specificity (70-100%). These results indicate that ELISA techniques have adequate sensitivity and specificity. PCR, as well as rapid methods, showed great variability in the results, mainly due to the heterogeneity of the techniques and abundance of "in-house" methods.

Visando a aumentar a precisão do diagnóstico, a Organização Mundial da Saúde recomenda executar dois ou mais testes imunoserológicos para o diagnóstico na fase crônica da doença de Chagas. O objetivo deste trabalho foi fazer uma revisão sistemática rápida sobre o desempenho de técnicas imunoserológicas e métodos moleculares na população em geral. Foram identificados 178 estudos dos quais se incluíram nove. Técnicas de ELISA mostraram a maior sensibilidade (82-98%) e especificidade (96-100%). Métodos rápidos apresentaram valores de sensibilidade e especificidade de 88-93% e 97-100%, respectivamente enquanto que os métodos moleculares (PCR) tinham níveis extremamente variáveis de sensibilidade (22-92%) e especificidade (70-100%). Estes resultados mostram que as técnicas de ELISA possuem sensibilidade e especificidade adequadas. A PCR, bem como os métodos rápidos, mostrou grande variabilidade nos resultados, principalmente devido à heterogeneidade das técnicas e profusão de métodos desenvolvidos de modo in house.

Characterization of an IgM-like immunoglobulin from silver catfish (Rhamdia quelen) serum and its use for the production of polyclonal antibodies and development of immunoassays / Caracterização de imunoglobulina similar a IgM em soros de jundiás (Rhamdia quelen) e sua utilização para a produção de soro policlonal e desenvolvimento de imunoensaios

Knowledge on fish immunoglobulin (Ig) characteristics and the availability of monoclonal or polyclonal antibodies to fish Igs are essential to evaluate the humoral immune response and the Ig distribution on leukocyte cells. We demonstrated that silver catfish serum Ig is composed of one immunodominant H chain with approximately 75k Da and one L chain with approximately 28 kDa, similar to human IgM. Rabbit polyclonal antibodies to the catfish IgM-like Ig recognized both the H and L chain and were useful in developing an indirect ELISA to measure the production of antibodies in fish immunized with bovine serum albumin. Dot blot and western blot cross-reactivity studies indicated a wide degree of epitope sharing amongst Ig from several Siluriformes and Characiformes fish indigenous to Brazilian rivers. In these fish species, polyclonal antibodies reacted mostly with the H chain. The results presented here are central to the development of tools and strategies to investigate the antibody production to inoculated antigens and tissue distribution of Ig molecules in native fish species. Furthermore, because of the wide range of cross-reactivity, polyclonal antibodies to silver catfish IgM-like Ig might be used to develop immunoassays to measure the humoral immune response in other fish species.(AU)

Informações sobre as características das imunoglobulinas (Ig) de peixes e a disponibilidade de anticorpos mono ou policlonais são essenciais para avaliar a resposta imune humoral e a distribuição leucocitária de Igs. Nesse trabalho nós demonstramos que a Ig do soro de jundiás é composta por uma cadeia pesada (H) imunodominante, de aproximadamente 75kDA e de uma cadeia leve (L) de aproximadamente 28 kDa, similar à IgM humana. Anticorpos policlonais produzidos contra a Ig do jundiá reconheceram a cadeia H e L e permitiram o desenvolvimento de um ELISA indireto para mensurar a produção de anticorpos em peixes imunizados com albumina sérica bovina. Estudos de reatividade cruzada, por meio de Dot blot e western blot, indicaram um alto grau de compartilhamento de epitopos entre as Igs de diversos peixes Siluriformes e Caraciformes nativos do Brazil. Nestas espécies de peixes, os anticorpos policlonais reconheceram principalmente a cadeia H. Os resultados deste estudo são fundamentais para o desenvolvimento de ferramentas e estratégias para investigar a produção de anticorpos subsequente à imunização e a distribuição tecidual de Igs em peixes nativos. Além disso, devido ao compartilhamento de epitopos entre as espécies de peixes avaliadas, os anticorpos policlonais anti Ig do jundiá poderão ser usados para desenvolver ensaios imunoenzimáticos para avaliar a resposta imune humoral nestas espécies.(AU)

Biomarcadores de risco cardiovascular em pacientes HIV positivos tratados e não tratados com terapia antirretroviral / Biomarkers of cardiovascular risk in HIV-positive patients treated and untreated with antiretroviral therapy

No advento dos antirretrovirais potentes, os indivíduos infectados pelo vírus da imunodeficiência humana (HIV) começaram a apresentar risco maior para o desenvolvimento de doença cardiovascular (DCV). Este aumento do risco cardiovascular pode ser associado tanto à infecção viral quanto ao tratamento antirretroviral (TARV), que provocam mudanças pró-aterogênicas como o aumento do colesterol total e da lipoproteína de baixa densidade (LDL), além da diminuição da lipoproteína de alta densidade (HDL). A ativação imune e as alterações lipídicas são mecanismos associados com a infecção pelo HIV e com o risco de DCV. Este trabalho utilizou ensaios imunoenzimáticos para a determinação plasmática de biomarcadores emergentes de risco cardiovascular relacionados com modificações da lipoproteína de baixa densidade, a saber: LDL eletronegativa [LDL(-)] e formas oxidadas da LDL, ou seja, LDL-oxi (resíduos lisina da apolipoproteína B100 modificados com malondialdeído), LDL-HNE (resíduos lisina da ApoB100 modificados com 4-hidroxinonenal) e LDL-CML (resíduos lisina da ApoB100 modificados por carboximetila), além de biomarcadores relacionados com a resposta imune-inflamatória, ou seja, autoanticorpos IgG e IgM anti-LDL(-), imunocomplexo de LDL(-) [IC-LDL(-)], proteína amiloide sérica A (SAA) e mieloperoxidase (MPO). Também foram determinadas as concentrações séricas dos biomarcadores de risco relacionados às apolipoproteínas: apolipoproteína A-I (ApoA-I), apolipoproteína B (ApoB) e apolipoproteína E (ApoE). A população estudada incluiu indivíduos com infecção pelo HIV, tratados (HIV-TARV) e não tratados (HIV-NT) com terapia antirretroviral e indivíduos sem infecção pelo HIV (controle). Não foram identificadas diferenças para as concentrações de LDL(-), IC-LDL(-), anti- LDL(-)-IgM, SAA, ApoA-I, ApoB e ApoE entre os grupos estudados (HIV-TARV, HIV-NT e controle). A ApoA-I correlacionou-se positivamente com ApoB e ApoE (rs= 0,418 e rs= 0,347, Spearman, p<0,01) e a ApoB com a ApoE (rs= 0,286, Spearman, p<0,01). Verificou-se correlação inversa entre as concentrações de LDL(-) e IC-LDL(-) (rs= -0,214, Spearman, p<0,05). Os níveis de anti-LDL(-)-IgG correlacionaram-se positivamente com IC-LDL(-) e anti-LDL(-)-IgM (rs= 0,240, Spearman, p<0,05 e rs= 0,348, Spearman, p<0,01). As concentrações de LDL-CML correlacionaram-se positivamente com LDL(-), LDL-oxi, LDL-HNE e IC-LDL(-) (rs= 0,212, Spearman, p<0,05; rs= 0,214, Spearman, p<0,05; rs= 0,573, Spearman, p<0,01 e rs= 0,219, Spearman, p<0,05). O grupo HIV-NT apresentou níveis mais elevados de anticorpos anti-LDL(-)-IgG comparado ao grupo controle (Kruskal-Wallis, p<0,01). Em contraste, observou-se no grupo HIV-NT diminuição das concentrações de MPO, LDL-HNE e LDL-CML em relação ao grupo controle (Kruskal-Wallis, p<0,01). A comparação dos grupos HIV-NT e HIV-TARV demonstrou que o TARV promoveu diminuição das concentrações dos anticorpos anti-LDL(-)-IgG e aumentou os níveis de LDL-oxi (Kruskal-Wallis, p<0,01). O grupo HIV-TARV apresentou aumento das concentrações de LDL-oxi e diminuição dos níveis de MPO, LDL-HNE e LDL-CML em relação ao controle (Kruskal-Wallis, p<0,01). Em conclusão, a infecção pelo HIV modificou o biomarcador de inflamação MPO e o perfil de biomarcadores relacionados às modificações da LDL (menor formação de LDL-HNE e LDL-CML), além aumentar a resposta imune-humoral à LDL eletronegativa [anti-LDL(-)-IgG], enquanto o tratamento com antirretrovirais inibiu esta resposta. Os outros biomarcadores estudados não foram modificados pela infecção viral ou pelo tratamento antirretroviral

In the advent of potent antiretroviral therapy, individuals infected with human immunodeficiency virus (HIV) have showed an increased risk for developing cardiovascular disease (DCV). Studies have discussed that the increased risk may be related to both the disease and antiretroviral treatment (TARV), that produced pro-atherogenic changes such as increased of total cholesterol and low density lipoprotein (LDL) and decreased high density lipoprotein. The immune activation and the lipid modifications are well known mechanisms related to HIV infection and the risk of DCV. This study used immunoassays for plasma quantification for emerging biomarkers of cardiovascular risk related to modification of low density lipoprotein: electronegative LDL [LDL(-)] and oxidized forms of LDL, LDL-oxi (lysine residues of apolipoprotein B100 modified by malondialdehyde), LDL-HNE (lysine residues of ApoB100 modified by 4-hydroxynonenal) and LDL-CML (lysine residues of ApoB100 modified by carboxymethyl) and biomarkers associated to immune and inflammatory responses, IgG and IgM autoantibodies anti-LDL(-) and immunecomplexe of LDL(-) [IC-LDL(-)], serum amyloid A protein (SAA) and myeloperoxidase (MPO). Also, were determined serum concentrations of risk biomarkers related to apolipoproteins: apolipoprotein A-I (ApoA-I), apolipoprotein B (ApoB) and apolipoprotein E (ApoE). The studied population included patients with HIV infection, treated (HIV-TARV) and untreated (HIV-NT) with antiretroviral therapy and individuals without HIV infection (controle). No differences were identified for concentrations of LDL(-), ICLDL(-), anti-LDL(-)-IgM, SAA, ApoA-I, ApoB and ApoE between studied groups (HIV-TARV, HIV-NT and controle). The ApoA-I was positively correlated to ApoB and ApoE (rs= 0,418 e rs= 0,347, Spearman, p<0,01) and ApoB to ApoE (rs= 0,286, Spearman, p<0,01). There was an inverted correlation between LDL(-) and IC-LDL(-) (rs= -0.214, Spearman, p<0,05). The levels of anti-LDL(-)-IgG were positively correlated to IC-LDL(-) and antibodies anti-LDL(-)-IgM (rs= 0.240; Spearman; p <0.05 and rs= 0.348; Spearman; p <0.01). The concentrations of LDL-CML were positively correlated to LDL(-), LDL-oxi, LDL-HNE e IC-LDL(-) (rs= 0,212, Spearman, p<0,05; rs= 0,214, Spearman, p<0,05; rs= 0,573, Spearman, p<0,01 e rs= 0,219, Spearman, p<0,05). The HIV-NT group showed higher levels of anti-LDL(-)-IgG compared to Control group (Kruskal-Wallis, p<0,01). In contrast, was observed lower levels for HIV-NT group to MPO, LDL-HNE and LDL-CML when compared to Control group (Kruskal-Wallis, p<0,01). The comparison of HIV-NT and HIV-TARV groups demonstrated that TARV caused a decrease of concentrations of anti-LDL(-)-IgG antibodies and an increased of LDL-oxi levels (Kruskal-Wallis, p <0.01). The HIV-TARV group showed increased LDL-oxi concentrations and decreased at levels of MPO, LDL-HNE e LDL-CML when compared to Control (Kruskal-Wallis, p<0,01). In conclusion, the HIV infection changed the biomarker of inflammation MPO and the profile of biomarkers related to modifications of LDL (lower concentrations of LDL-HNE and LDL-CML), as well as increased the humoral-immune response to electronegative LDL [anti-LDL(-)-IgG], while treatment with antiretroviral therapy inhibited this response. The other studied biomarkers were not modified either by viral infection or antiretroviral treatment

Presence of IgG antibodies against reproductive infections in breeding bulls of Magdalena Medio, Colombia / Presencia de anticuerpos tipo IgG contra infecciones reproductivas en toros reproductores de la región del Magdalena Medio, Colombia / Presença de anticorpos IgG contra infecções reprodutivas de touros reprodutores do Magdalena Médio, Colômbia

Background: cattle farming is an important economic activity in several regions of Colombia. However, farmers are unaware of their cattle health status, and particularly of bacterial, parasitic, and viral diseases, which affect reproduction and profitability. Objective: to assess the presence of IgG antibodies against infectious bovine rhinotracheitis (IBR), bovine viral diarrhea (BVD), bovine leukosis, leptospirosis, brucellosis, and Neospora caninum in breeding bulls in the Magdalena Medio of Colombia, according to age, breed, and origin. Methods: a descriptive, cross-sectional study was conducted with 174 male breeding cattle from several subspecies. Animals were above 18 months of age and belonged to dual-purpose farms in the Magdalena Medio region. Presence of IgG anti-IBR, BVD, brucellosis, neosporosis, and leukosis antibodies were determined with an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). A sample of 156 males was assessed for leptospirosis using a microscopic agglutination test (MAT) in a dark field. Results: IgG anti-IBR antibodies were found in 92.5% of the animals, anti-BVD in 62.6%, anti-Neospora caninum in 79.3%, anti-Brucella abortus in 4.02%, anti-Leptospira pomona in 8.33%, and anti-L. hardjo in 15.38%, with >1:100 titres. Besides, 64.94% prevalence was observed for bovine leukosis. Conclusions: a high prevalence of IgG anti-IBR, IgG anti-BVD, IgG anti- Neospora caninum, IgG anti-leukosis, and IgG anti-lepstospirosis antibodies were observed in Magdalena Medio bulls. With respect to B. abortus, confirmatory and competitive ELISA test should be performed and sanitary standards need to be established. Detection of IgG antibodies among bulls reveals poor sanitary conditions, absent of protective-vaccination antibodies and an urgent need for health control measurements.

Antecedentes: la ganadería bovina es una importante actividad económica desarrollada en varias regiones del país, sin embargo, los ganaderos desconocen el estado sanitario de los bovinos con respecto a enfermedades bacterianas, parasitarias y virales, lo que afecta la reproducción y la rentabilidad. Objetivo: evidenciar la presencia de anticuerpos tipo IgG anti-rinotraqueitis infecciosa bovina (IBR), diarrea viral bovina (BVD), leucosis bovina, leptospirosis, brucelosis y Neospora caninum en los toros reproductores del Magdalena Medio colombiano, en asociación con variables de edad, raza y procedencia. Métodos: se realizó un estudio descriptivo de corte transversal en un grupo poblacional de 174 machos reproductores bovinos de diferentes subespecies. Los animales eran mayores de 18 meses en fincas destinadas a ganadería doble propósito ubicadas en la región del Magdalena Medio. Mediante un ensayo de inmunoabsorción enzimática (ELISA) se determinó la presencia de anticuerpos tipo IgG anti-IBR, BVD, brucelosis, neosporosis y leucosis. Para el caso de la leptospirosis, a 156 de los machos se les realizó la prueba de microaglutinación en campo oscuro (MAT). Resultados: se hallaron anticuerpos tipo IgG anti-IBR en un 92,5%, anti-BVD en el 62,6%, anti-Neospora caninum 79,3%, anti-Brucella abortus 4,02%, anti-Leptospira pomona 8,33% y anti-L. hardjo 15,38%, con títulos >1:100. Además, para leucosis bovina se obtuvo una prevalencia del 64,94%. Conclusión: se observaron altos porcentajes de casos con presencia de anticuerpos IgG anti-IBR, BVD, N. caninum, leucosis y lepstospirosis en el ganado bovino del Magdalena Medio colombiano. Para B. abortus debe realizarse la prueba confirmativa ELISA competitiva y aplicar la norma sanitaria. La determinación de anticuerpos tipo IgG permitió conocer el delicado estado sanitario de los reproductores bovinos, teniendo en cuenta que no han recibido ningún esquema de vacunación y se hace necesario un adecuado control sanitario.

Antecedentes: a pecuária é uma atividade econômica importante em várias regiões do país, no entanto, os agricultores não têm conhecimento do estado de saúde do gado em relação adoenças bacterianas, parasitárias e virais. É por esta razão que as perdas econômicas aumentam e diminuem a qualidade de reprodução. Objetivo: demonstrar a presença de anticorpos IgG para rinotraqueíte-viral bovina (IBR), diarréia viral bovina (BVD), leucose bovina, leptospirose, brucelose e Neospora caninum. Nos machos reprodutores do Magdalena Medio tendo em conta as variáveis idade, raça e origens. Métodos: i foi realizada estudo descritivo transversal em duas populações de 174 machos reprodutores de diferentes subespécies de gado com mais de 18 meses de edad procedentes de fazendas utilizadas para a pecuária de duplo propósito, localizadas na região do Madalena Médio. Para detectar a presença de anticorpos IgG anti-IBR, BVD, brucelose, e enzoótica, neosporose foi determinada pela técnica de ensaio imunoenzimático (ELISA). Para o caso de leptospirose foi realizado teste de microaglutinação em campo escuro (MAT). Resultados: anticorpos IgG anti-IBR foram encontrados em 92,5%, anti-BVD num 62,6%, anti-Neospora caninum num 79,3%, anti-Brucella abortus 4,02%, anti-Leptospira pomona num 8,33% e anti-L. hardjo 15,38% com títulos > 1:100. Para leucose bovina, uma percentagem de 64,94%, foi obtido. Conclusão: foram observados altos percentagens de casos na presença de anticorpos IgG anti-IBR, BVD, N. caninum, lepstospirosis e leucose nos bovinos do Madalena Médio colombiano, o teste confirmatorio ELISA competitivo. Para a determinação de B. abortus deve ser realizado e dar cumplimento a normatividade sanitaria. A determinação de anticorpos IgG tem permitido conhecer o delicado estado sanitario dos reprodutores bovinos, considerando que eles não receberam qualquer vacinação é necessário um adequado controle de saúde.

Screening of fecal samples from asymptomatic children, for norovirus detection, using a third generation enzyme immunoassay commercial kit

Norovirus is the leading cause of non-bacterial acute gastroenteritis outbreaks worldwide. Recently, third generation Enzyme Immunoassay (EIA) commercial kits have been developed, and controversial results have been obtained by different studies regarding the sensitivity and specificity of these assays. Therefore, the aim of this study was to test 60 fecal samples, previously tested as positive by RT-PCR for caliciviruses (40 norovirus-positive and 20 sapovirus-positive samples), for qualitative determination of genogroup I and II noroviruses by a commercial EIA kit (RIDASCREEN® Norovirus (C1401) 3rd Generation, R-Biopharm, Darmstadt, Germany). The samples were obtained from 30 children aged less than five years, mostly asymptomatic, who attend a day-care center in Goiânia, Goiás, Brazil. The results conferred a positivity rate for NoV of 35 percentand a specificity rate of 100 percent for the EIA, when compared to the RT-PCR. The test also failed to detect samples that were positive for GI.1 and GI.4 norovirus. The presumably lower viral load of asymptomatic children might be related to the poor sensitivity. Our results reinforce the notion that screening of samples by molecular assays, especially of samples that might have a low number of viral particles such as those obtained from asymptomatic patients, should not be replaced by the use of EIA kits...

Triagem de amostras fecais de crianças assintomáticas utilizando-se um kit comercial de Elisa 3a geração determinação qualitativa de norovírus dos genogrupos I e II por meio de kit comercial de EIE (RIDASCREEN® Norovirus (C1401) 3rd Generation, R-Biopharm, Darmstadt, Germany). Previamente testadas, elas se mostraram positivas para calicivírus por RT-PCR (40 positivas para norovirus e 20 positivas para sapovirus). As amostras foram obtidas de 30 crianças menores de 5 anos de idade, predominantemente assintomáticas, que frequentavam uma creche em Goiânia, Goiás, Brasil. Os resultados revelaram índices de 35 porcento de positividade para os norovírus e de 100 porcento de especificidade para o EIE quando comparado a RT-PCR. O teste também falhou em detectar amostras que eram positivas para norovírus GI.1 e GI.4. A carga viral, presumidamente mais baixa, das crianças assintomáticas pode estar relacionada com a baixa sensibilidade. Os resultados reforçam o entendimento de que a triagem de amostras por ensaios moleculares não deve ser substituída pelo uso de kits de EIE, especialmente quando se tratar de amostras que, presumidamente, apresentem um baixo número de partículas virais como as obtidas de pacientes assintomáticos...

Seroepidemiological aspects of Leishmania spp in dogs in the Itaguai micro-region, Rio de Janeiro, Brazil / Aspectos soroepidemiológicos de Leishmania spp em cães na microrregião de Itaguaí, Rio de Janeiro, Brasil

This study evaluated factors associated with the frequency ofLeishmania spp. antibodies in dogs residing in the Itaguai micro-region, State of Rio de Janeiro, Brazil. Blood samples were collected from 524 dogs. The serum samples were submitted to indirect fluorescent antibody test (IFAT) and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) forLeishmania spp. The frequency of seropositive dogs was 28.24% (n = 148) in the micro-region, and among the three municipalities within that region, the highest frequency (p < 0.05) was observed in Seropedica (59.46%), followed by Itaguai (29.05%) and Mangaratiba (11.49%). Regarding factors associated with the host, mongrel dogs and those over the age of two presented higher frequency of antibodies to Leishmaniaspp. (p < 0.05). Concerning factors related to the environment and habits of the animal, dogs residing in rural areas (FR = 1.67, p = 0.0002), living outside the residence (FR = 1.42, p = 0.0197), with access to forest, streams and pastures (FR = 2.81, p = 0.0007), remaining loose (FR = 1.66, p = 0.0073), and those that had no shelter (FR = 2.16, p < 0.0001) were more likely to be seropositive. Canine leishmaniasis is a disease with high occurrence in the Itaguai micro-region, and aspects such as the definition of breed, age, habits and care by owners showed significant association in this micro-region.

Este estudo avaliou os fatores associados à frequência de anticorpos específicos para Leishmania spp. em cães domiciliados na microrregião de Itaguaí, Rio de Janeiro. Foram colhidas amostras de sangue de 524 cães. As amostras de soro foram submetidas a reação de imunofluorescência indireta (RIFI) e ensaio imunoenzimático indireto (ELISA-teste) para Leishmania spp. A frequência de cães soropositivos foi de 28,24% (n = 148) na microrregião e, entre os três municípios avaliados, a maior frequência (p < 0,05) foi observada em Seropédica (59,46%), seguida de Itaguaí (29,05%) e Mangaratiba (11,49%). Em relação aos fatores associados ao hospedeiro, observou-se que cães sem raça definida e aqueles com idade acima de dois anos apresentaram maior frequência de anticorpos para Leishmania spp. (p < 0,05). Em relação aos fatores relacionados ao ambiente e ao hábito do animal, os cães residentes em áreas rurais (RF = 1,67, p = 0,0002), animais que vivem fora da residência (RF = 1,42, p = 0,0197), com acesso à mata, córregos e pastagens (FR = 2,81, p = 0,0007), que permanecem soltos (RF = 1,66, p = 0,0073), e aqueles que não possuem abrigo (RF = 2,16, p < 0,0001) apresentaram maior chance de serem soropositivos. A leishmaniose canina é uma enfermidade com elevada ocorrência na microrregião de Itaguai, e aspectos como definição racial, idade, hábitos e cuidados estabelecidos pelo proprietário mostraram associação significativa nessa microrregião.

Padronização e uso de um método imunoenzimático que utiliza células infectadas como antígeno no diagnóstico rotineiro do dengue / Standardization and use of an immunoenzymatic method using infected cells as antigens in routine diagnosing of dengue

INTRODUÇÃO: Este trabalho mostra a padronização e o uso do método imunoenzimático utilizando células infectadas como antígeno (EIA-ICC) no diagnóstico sorológico rotineiro do dengue. MÉTODOS: Na otimização do teste, com a dose de 1.000 TCID50 de vírus do dengue tipo 3 (DENV-3), foram utilizadas 100.000 células C636 infectadas 1000 TCID50 (DENV-3). RESULTADOS: Os resultados obtidos com EIA-ICC foram comparados com o kit comercial de dengue HUMAN. Os resultados foram altamente coincidentes; o EIA-ICC mostrou-se moderadamente sensível e com alta especificidade. O teste foi usado no diagnóstico sorológico de 1.797 amostras sorológicas de casos suspeitos de dengue durante a epidemia de Ribeirão Preto, em 2006. Na avaliação sorológica, 228 amostras foram positivas para IgM contra DENV-3, e 235 amostras foram positivas para IgG contra DEV-3, e em 35 amostras detectou-se positividade para IgM e IgG. CONCLUSÕES: O EIA-ICC mostrou-se confiável e simples sendo adequado ao diagnóstico sorológico do dengue.

INTRODUCTION: This paper show the standardization and use of the immunoenzymatic method using infected cells as antigens (EIA-ICC) for routine serological diagnosing of dengue. METHODS: In optimizing the test, a dose of 1,000 TCID50 of dengue type 3 virus (DENV-3) was used, and 100,000 C636 cells infected with 1,000 TCID50 (DENV-3) were used. RESULTS: The results obtained with EIA-ICC were compared with the HUMAN commercial dengue kit. The results were highly concordant. The EIA-ICC showed moderate sensitivity and high specificity. The test was used for serologically diagnosing 1,797 blood samples from suspected dengue cases during the 2006 epidemic in Ribeirao Preto. From the serological evaluation, 228 samples were positive for IgM against DENV-3; 235 samples were positive for IgG against DENV-3; and 35 samples were positive for both IgG and IgM. CONCLUSIONS: EIA-ICC was shown to be reliable and simple, and suitable for serologically diagnosing dengue.

Falha na implantação de um novo algoritmo de testes laboratoriais para o diagnóstico de infecção por HTLV-1 e HTLV-2 em população de risco / Lack in introducing a new algorithm of laboratorial tests for detecting HTLV-1 and HTLV-2 infections in at-risk population

Em vista dos problemas detectados no diagnóstico de infecção pelos vírus linfotrópicos de células T humanas dos tipos 1 e -2 (HTLV-1 e HTLV-2) em casuística encaminhada ao Instituto Adolfo Lutz de São Paulo, foi proposto um novo algoritmo de testes laboratoriais que utiliza duas amostras de sangue seqüenciais. Na primeira o sangue é coletado em tubo seco e feita triagem sorológica com dois ensaios imunoenzimáticos (EIAs). Na segunda, o sangue é coletado em tubo contendo o anticoagulante ácido etilenodiamino tetra acético (EDTA) para a repetição dos EIAs e para os testes confirmatórios de Western blot (WB) e reação em cadeia da polimerase (PCR). Os resultados obtidos com 313 amostras de sangue mostraram ineficiência do algoritmo, pois nos casos EIA reagentes, apenas 25% tiveram uma segunda amostra de sangue coletada e destas, apenas três em EDTA. Portanto, não foi possível comparar o desempenho da PCR em relação ao WB. Um algoritmo simples, de coleta única de sangue em tubo contendo EDTA foi proposto e vem sendo utilizado para a triagem e para os testes confirmatórios.

Diagnóstico de infecção por vírus linfotrópicos de células T humanas dos tipos 1 (HTLV-1) e -2 (HTLV-2) em população de risco: passado, presente e futuro / Diagnosis of human T-cell lymphotropic virus type 1 (HTLV-1) and type 2(HTLV-2) infection in at-risk populations: past, present and future

O Brasil é o país com o maior número de pessoas infectadas pelos vírus linfotrópicos de células T humanas dos tipos 1e -2 (HTLV-1 e HTLV–2) com mais de 2,5 milhões de indivíduos infectados. Em 1993, a realização de testes sorológicos específicos tornou-se obrigatória em Bancos de Sangue. O HTLV-1 causa leucemia/linfoma de células T do adulto e mielopatia associada ao HTLV-1/paraparesia espástica tropical além de outras doenças, enquanto o HTLV-2 pode causar alguns quadros neurológicos e alterar a evolução de HIV/Aids. Os testes sorológicos que identificam anticorpos específicos disponíveis no mercado têm falhado no diagnóstico, principalmente de infecção por HTLV-2. Vários algoritmos de testes de triagem e confirmatórios têm sido propostos, mas nenhum deles se mostrou 100% eficiente com casuística de alto risco. Muitos soros resultam em padrão indeterminado no Western blot, e os isolados virais utilizados na composição dos kits podem ser a causa desses resultados. As técnicas de biologia molecular têm sido descritas como testes confirmatórios, mas não têm sido empregadas na rotina. Desde 1991, a Seção de Imunologia do Instituto Adolfo Lutz tem estudado a infecção por HTLV-1/2, contribuindo para o diagnóstico sorológico e molecular, e tem como desafio implantar um teste laboratorial capaz de detectar infecção causada por cepas brasileiras de HTLV-2.

An enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the detection of IgM antibodies against Leishmania chagasi in dogs / Ensaio imunoenziático (ELISA) para detecção de anticorpos IgM contra Leishmania chagasi em cães

Visceral leishmaniasis is an emergent zoonosis with an increasing number of new cases in Brazil where the domestic dog is an important parasite reservoir in the infectious cycle of Leishmania chagasi. An enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), based upon the use of a total soluble antigenic preparation of L. chagasi, was adapted for the detection of IgM antibodies in the serum of infected dogs. Optimal dilutions of the antigen, using positive and negative reference sera, were determined by checkboard titrations. The specificity and sensitivity of the ELISA were 100 percent. A total of 110 serum samples were taken from dogs in Belo Horizonte, Minas Gerais, Brazil, and examined for anti-L. chagasi IgM antibody by ELISA and indirect fluorescent antibody test (IFAT). About 25 percent (n=27) of all the dogs tested were found serologically positive for L. chagasi by IFAT, while 89.09 percent (n=98) were seropositive by ELISA. The results obtained by ELISA and IFAT were significantly different (P<0.01). The combined use of ELISA and IFAT is recommended in order to enable veterinary services to more efficiently detect canine visceral leishmaniasis.

A leishmaniose visceral é uma zoonose emergente, com elevado número de novos casos no Brasil, onde o cão doméstico é um importante reservatório do parasito no ciclo infeccioso da Leishmania chagasi. Um ensaio de imunoadsorção enzimática (ELISA) baseado em antígeno bruto de L. chagasi foi adaptado para a detecção de anticorpos IgM em soros de cães infectados. As diluições ótimas do antígeno e dos soros controles positivo e negativo foram determinadas através de titulação em bloco. A sensibilidade e especificidade do ELISA teste foram de 100 por cento. Um total de 110 amostras de soros foram obtidas de cães oriundos de Belo Horizonte, Minas Gerais, Brasil, e avaliadas pelo ELISA e pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI) para anticorpos IgM anti-L. chagasi. Aproximadamente 25 por cento (n=27) dos cães testados foram sorologicamente positivos para L. chagasi pela RIFI, enquanto 89.09 por cento foram soropositivos pelo ELISA. Os resultados obtidos pelo ELISA e pela RIFI foram significativamente diferentes (P<0.01). A associação do ELISA e da RIFI deve ser recomendada a fim de permitir a detecção mais eficiente da leishmaniose visceral canina pelos serviços veterinários.

Detecção de sífilis por ensaios de ELISA e VDRL em doadores de sangue do Hemonúcleo de Guarapuava, Estado do Paraná / Syphilis detection using ELISA and VDRL tests on blood donors at the blood center of Guarapuava, State of Paraná

O objetivo desse estudo foi avaliar a soroprevalência de sífilis em 5.752 doadores de sangue atendidos no Hemonúcleo de Guarapuava-PR, em 2006. As taxas de positividade foram de 2,1 por cento pelo teste de ensaio imunoenzimático e 0,2 por cento pelo Veneral Disease Research Laboratory, mostrando baixa prevalência de sífilis nos indivíduos que procuraram este banco de sangue.

The aim of this study was to evaluate the syphilis seroprevalence among 5,752 blood donors who were attended at the blood center of Guarapuava, State of Paraná, in 2006. The seropositivity rates were 2.1 percent for enzyme Linked Immuno Sorbent Assay and 0.2 percent for Veneral Disease Research Laboratory, thus showing low prevalence of syphilis among the individuals who came to this blood bank.

Comparação de quatro métodos laboratoriais para diagnóstico da Giardia lamblia em fezes de crianças residentes em Belém, Pará / Comparison of 4 techniques for the diagnosis of Giardia lamblia in stool of children from Belém city, Pará State, Brazil

We report the evaluation of four techniques for Giardia lamblia diagnosis in children's stool. The Iron haematoxilin staining and direct examination with lugol showed lower positivity, while the method of Faust et al. Continues to be a good option for G. lamblia diagnosis and Immunoenzymatic assay increases the detection of this parasite.

Relatamos a comparação de quatro metodologias para o diagnóstico da Giardia lamblia em material fecal de crianças, Belém/PA. A Hematoxilina Férrica e o método direto apresentaram menor positividade, enquanto que o Método de Faust continua uma boa escolha para o diagnóstico e o Ensaio imunoenzimático melhora a qualidade da detecção deste parasito.

Comparação entre três metodologias: ELISA, hematoaglutinação passiva e imunofluorescência indireta para detecção de anticorpos anti-Trypanosoma cruzi em soro humano em amostragempopulacional de regiões endêmica e não endêmica: avaliação da frequência da positividade da sorologia para doença de Chagas em diferentes grupos etários de região endêmica / Comparison among three methodologies: enzime immunoassay, passive hemagglutination and indirect immunofluorescence for the detection of IgG antibodies to Trypanosoma cruzi in human sera from endemic and nonendemic regions

Os autores comparam três métodos laboratoriais largamente empregados para a dosagem de anticorpos IgG anti-Trypanosoma cruzi em soro humano: Hemaglutinação Passiv (Chagasteste Trilab), Imunofluorescência Indireta (Suspensão Liofilizada de Trypanosoma cruzi Trilab, Conjugado anti-IgG Difco) e Ensaio Imuno Enzimático (Gull Laboratories); também efetuam a pesquisa de IgM Trypanosoma Cruzi por Imunofluorescência (Suspensão Liofilizada de Trypanosoma cruzi Trilab, Conjugado anti-IgM Difco). Analisam 300 amostras de soro, sendo 150 de moradores da região endêmica de Joaquim Távora e Santo Antônio de Platina, PR. A pesquisa de anticorpos IgM foi negativa em todas as amostras. A avaliação dos anticorpos IgG apresentou três amostras com resultados positivos por Hemaglutinação e Imunofluorescência, e negativos por Elisa. Os resultados sugerem bons níveis de correlação entre as três metodologias e os resultados discrepantes são analisados. As amostras provenientes de região endêmica foram divididas em três grupos de acordo com a idade: A (<13 anos), B (13-50 anos) e C (> 50 anos). A incidência de positividade de Imunofluorescência –igG para Doença de Chagas foi significantemente maior nos grupos B e C quando comparadas com a do grupo A (p<0,001).