Validation of high performance liquid chromatography method for determination of meloxicam loaded PEGylated nanocapsules

abstract A method to ensure that an analytical method will produce reliable and interpretable information about the sample must first be validated, making sure that the results can be trusted and traced. In this study, we propose to validate an analytical high performance liquid chromatography (HPLC) method for the quantitation of meloxicam loaded PEGylated nanocapsules(M-PEGNC). We performed a validation study, evaluated parameters including specificity, linearity, quantification limit, detection limit, accuracy, precision and robustness. PEGylated nanocapsules were prepared by interfacial deposition of preformed polymer, and the particle size, polydispersity index, zeta potential, pH value and encapsulation efficiency were characterized. The proposed HPLC method provides selective, linear results in the range of 1.0-40.0 μg/mL; quantification and detection limits were 1.78 μg/mL and 0.59 μg/mL, respectively; relative standard deviation for repeatability was 1.35% and intermediate precision was 0.41% and 0.61% for analyst 1 and analyst 2, respectively; accuracy between 99.23 and 101.79%; robustness between 97.13 and 98.45% for the quantification of M-PEGNC. Mean particle diameters were 261 ± 13 nm and 249 ± 20 nm, polydispersity index was 0.15 ± 0.07 and 0.17 ± 0.06, pH values were 5.0 ± 0.2 and 5.2 ± 0.1, and zeta-potential values were -37.9 ± 3.2 mV e -31.8 ± 2.8 mV for M-PEGNC and placebo(B-PEGNC), respectively. In conclusion, the proposed analytical method is suitable for the quality control of M-PEGNC. Moreover, suspensions showed monomodal size distributions and low polydispersity index indicating high homogeneity of formulations with narrow size distributions, and appropriate pH and zeta potential. The extraction process was efficient for release of meloxicam from nanostructured systems.

resumo Para se assegurar que um método analítico produzirá informação confiável e interpretável sobre a amostra este deve ser inicialmente validado, tornando claro que os resultados podem ser confiados e rastreados. Neste estudo, propomos validar um método de cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) para a quantificação do meloxicam encapsulado em nanocápsulas PEGuiladas (M-PEGNC). Efetuamos a validação, avaliando parâmetros de especificidade, linearidade, limite de quantificação, limite de detecção, exatidão, precisão e robustez. As nanocápsulas PEGuiladas foram preparadas por deposição interfacial do polímero pré-formado e caracterizaram-se o tamanho da partícula, índice de polidispersão, potencial zeta, pH e eficiência de encapsulação. O método de CLAE proposto fornece resultados seletivos e lineares na faixa de 1,0-40,0 mg/mL; limites de quantificação e detecção de 1,78 mg/mL e 0,59 mg/mL, respectivamente; desvio padrão relativo para a repetibilidade de 1,35% e precisão intermediária de 0,41% e 0,61% para o analista 1 e analista 2, respectivamente; exatidão entre 99,23 e 101,79%; robustez entre 97,13 e 98,45% para a quantificação de M-PEGNC. Os diâmetros médios das partículas foram 261 ± 13 nm e 249 ± 20 nm; índice de polidispersão de 0,15 ± 0,07 e 0,17 ± 0,06, valores de pH de 5,0 ± 0,2 e 5,2 ± 0,1 e valores do potencial zeta de -37,9 ± 3,2 mV e -31,8 ± 2,8 mV para o M-PEGNC e o placebo(B-PEGNC), respectivamente. Concluindo, o método analítico proposto é adequado para o controle de qualidade do M-PEGNC. Além disso, suspensões mostraram distribuição de tamanho monomodal e baixo índice de polidispersão, indicando alta homogeneidade das formulações com distribuição estreita de tamanho, pH e potencial zeta apropriados. O processo de extração foi eficiente para a liberação do meloxicam dos sistemas nanoestruturados.

Vitrificação de embriões Mus domesticus domesticus contidos em volumes diferentes de 9, 0 M de etileno glicol / Vitrification of Mus domesticus domesticus embryos exposed to differents volumes of 9.0 M ethylene glycol solution

Os experimentos tiveram como objetivo determinar a taxa de eclosão dos embriões vitrificados em volumes diferentes de 9,0M de etileno glicol. Simultaneamente, testaram-se dois procedimentos de estocagem dos fios de teflon, denominados caixade aço inoxidável e globete/raque. No experimento I, os 881 embriões coletados foram distribuídos em 4 tratamentos: tratamento1 (T1 = controle): 307 embriões foram cultivados in vitro em meio PBSm, acrescido de 0,4 por cento de BSA; tratamento 2 (T2): 292embriões foram expostos à solução de glicerol 10 por cento acrescida de 0,4 por cento de BSA, envasados em palhetas de 0,25 mL esubmetidos ao congelamento pelo método rápido em Biocool®; tratamento 3 (T3): 138 embriões foram expostos durante 2minutos à solução de desidratação (10 por cento de EG + 6 por cento BSA em PBSm) e então transferidos para a solução de vitrificação (50 por centode EG + 6 por cento de BSA em PBSm), onde permaneceram por 30 segundos sendo após transferidos para o volume de 1 µL nointerior de um fio de teflon, medindo 0,4mm de diâmetro, 2,0cm de comprimento e 0,05mm de espessura. Os fios foramacondicionados em uma caixa de aço inoxidável para serem armazenados em nitrogênio líquido; tratamento 4 (T4): 144 embriõesforam expostos à solução de desidratação (10 por cento de EG + 6 por cento BSA em PBSm) e após 2 minutos, foram transferidos para asolução de vitrificação (50 por cento de EG + 6 por cento BSA em PBSm), onde permaneceram por 30 segundos e foram colocados em volumede 1 µL no interior do fio de teflon. Os fios de teflon foram estocados em globetes unidos às raques e mantidos em nitrogêniolíquido. Após o aquecimento, os embriões foram cultivados em PBSm suplementado com 0,4 por cento de BSA. As taxas de eclosãoembrionária observadas foram: T1=79,80 por cento (245/307); T2=40,07 por cento (117/292); T3=39,13 por cento (54/138) e T4=25,69 por cento (37/144).No segundo experimento 747 embriões foram distribuídos em 3 tratamentos: tratamento 1 (T1= controle): 80 embriões foram...

This work was performed with Mus domesticus domesticus embryos to verify the in vitro viability of vitrified embryos usingdifferents volumes of ethylene glycol-based solution. The experiment I consisted of four treatments. The 881 collected embryoswere arranged as follows: treatment 1 (control): 307 fresh embryos were cultured in vitro in PBSm + 0.4 percent BSA without beingexposed to either dehydration or cryoprotectants agents; treatment 2: 292 embryos were loaded into 0.25 mL french strawscontaining 10 percent glycerol + 0.4 percent BSA in PBSm and after 10 minutes the straws were submitted to the rapid-freezing procedure(Biocool@, controlled freezer); treatment 3:138 embryos were exposed during 2 minutes to a dehydration solution (10 percent ethyleneglycol + 6 percent BSA in PBSm) and then transferred to the vitrification solution (50 percent ethylene glycol + 6 percent BSA in PBSm) in teflon wirewith 0.4 mm diameter, 2cm length and 0.05 mm thickness containing the drop of 1 µL volume, and placed into stainless steelbox for the storage in LN2; treatment 4: 144 embryos were exposed to a dehydration solution (10 percent éthylene glycol + 6 percent BSA inPBSm) and after 2 minutes were transferred to the teflon wire, that was previousily loaded with 1 µL of the vitrification solution (50 percent ethylene glycol + 6 percent BSA in PBSm). Finally, the teflon wires were placed into plastic globets attached to aluminum canesand maintained in LN2. After thawing, the embryos were serially washed in PBSm, and then cultured in PBSm supplementedwith 0.4 percent BSA. The hatched blastocyst rates observed in the treatments were: T1 =79,80 percent (245/307); T2=40,07 percent (117/292);T3=39,13 percent (54/138) and T4=25,69 percent (37/144). In the second experiment, 747 embryos were arranged as follows: treatment 1(control): consisted of 80 fresh embryos cultured in...