Expression of mesenchymal stem cell phenotype in human nasal respiratory epithelial cells / Expresión del fenotipo de células troncales mesenquimales en células epiteliales nasales humanas

The respiratory epithelium is the first line of contact with the external hazards. Thus it can be damaged and need to be replaced to avoid healing by fibrosis. Tracheal tissue engineering is an alternative promising treatment modality. Mesenchymal stem cell markers are surface proteins, which are responsible for some of these cells unique properties. The objective of this study was to detect the mesenchymal stem cell phenotype among the human nasal respiratory epithelial cells via two immunophenotyping techniques. Respiratory epithelial cells were cultured using co-culture technique, fibroblasts was removed at confluence leaving respiratory epithelial cells, which were passage further to passage 4. Cells were evaluated for mesenchymal stem cell markers that were CD73, CD90, CD105 and the hematopoietic stem cell marker CD45 at passage 1 (P1) and passage 4 (P4) using Flow cytometry and Immunocytochemistry techniques. Respiratory epithelial cells expressed the mesenchymal stem cell markers at P1 and maintain the expression these markers until P4. Using both techniques, to compare the values of mesenchymal stem cell markers expression at P1 to P4 there was no significant difference. This study indicates that respiratory epithelial cells derived from nasal turbinate retain some of mesenchymal stem cells properties even after serial passages. Both methods of Immunophenotyping are comparable.

El epitelio respiratorio es la primera línea de contacto con los peligros externos. Por lo tanto, puede ser dañado y necesita ser reemplazado para evitar uan cicatrización por fibrosis. La ingeniería de tejidos traqueales es una modalidad de tratamiento alternativo prometedora. Los marcadores de células troncales mesenquimales son proteínas de superficie, que son responsables de algunas propiedades únicas de estas células. El objetivo fue detectar el fenotipo de células troncales mesenquimales entre las células epiteliales respiratorias nasales humanas a través de dos técnicas de inmunofenotipaje. Fueron cultivadas las células epiteliales respiratorias utilizando la técnica de co-cultivo; los fibroblastos se eliminaron en la confluencia dejando solo células epiteliales respiratorias, resultantes de los 4 pasajes. Las células fueron evaluadas para encontrar marcadores de células troncales mesenquimales mediante CD73, CD90, CD105 y el marcador de células troncales hematopoyéticas CD45 en el paso 1 (P1) y el paso 4 (P4), usando citometría de flujo y técnicas de inmunocitoquímica. Las células epiteliales respiratorias expresaron los marcadores de células troncales mesenquimales en P1 y mantuvieron la expresión de estos marcadores hasta P4. No hubo diferencias significativas en el uso de ambas técnicas al comparar los valores de los marcadores de células troncales mesenquimales expresadas desde P1 a P4. Este estudio indica que las células epiteliales respiratorias derivadas de la concha nasal retienen algunas de las propiedades de células troncales mesenquimales, incluso después de pases seriados. Ambos métodos de inmunofenotipificación son comparables.

Tinción dual inmunocitoquímica de p16INKa/Ki-67 para la detección de lesiones del cuello uterino asociadas a infección por el virus del papiloma humano / p16INK4a/Ki-67 immunocytochemical dual staining for detection of cervical lesions associated to papillomavirus infection

Este estudio se llevó a cabo para examinar el patrón de inmunoexpresión simultánea de p16INK4a/Ki-67y establecer su posible utilidad clínica para la detección precoz del cáncer de cuello uterino. Las muestras celulares de cuello uterino fueron seleccionadas de la pesquisa de rutina de cáncer cervical. La detección inmunocitoquímica de p16INK4a/Ki-67se realizó con el kit de trabajo CINtec® Plus. Todos los casos tenían una prueba de virus papiloma humano (VPH). Ciento quince muestras citológicas fueron incluidas: 11(9,6%) fueron negativas para lesión intraepitelial o malignidad (NILM), 32(27,8%) presentaron células escamosas con atipias de significado indeterminado (ASC-US), 62(53,9%) mostraron lesión intraepitelial escamosa de bajo grado (LSIL) y 10(8,7%) lesión intraepitelial escamosa de alto grado (HSIL). La prevalencia general de infección por VPH fue de 81,7% (94/115). En 42 casos (45,0%) se identificaron los siguientes genotipos específicos de VPH: VPH16 (26,2%), VPH51 (21,4%), VPH52 (14,3%) y el genotipo VPH66 (7,1%). De 115 muestras celulares, 42(36,5%) fueron positivas para la tinción dual de p16INK4a/Ki-67, siendo ésta muy frecuente en las muestras citológicas con HSIL (70,0%), disminuyendo en las LSIL (44,0%) y existiendo inmunopositividad en una minoría de ASC-US (25,0%). Ningún caso NILM mostró inmunopositividad para p1(6INK4a)/Ki-67 (p<0,001). En 40/115 casos (34,8%) hubo positividad tanto para infección por VPH oncogénico como para la tinción dual p16INK4a/Ki-67, incluyendo 6/32 (18,8%) con ASC-US, 26/62 (42,0%) con LSIL and 8/10 (80,0%) con HSIL. Esta metodología podría ser utilizada para detectar lesiones en cuello uterino que aún no han sido diagnosticadas o han pasado inadvertidas.

We aimed to explore the expression pattern of p16INK4a/Ki-67 immunocytochemical dual-staining and to establish the potential clinical utility for early detection of cervical lesions. Liquid-based cytologies of cervical specimens of cervical cancer screening were processed for p16INK4a/Ki-67 immunocytochemical dual-staining using the CINtec® Plus Kit. HPV testing was performed with the INNO-LiPA HPV genotyping Extra Reverse Hybridization Line Probe Assay kit. One hundred and fifteen cervical cytologies were analyzed with the following results: 11(9.6%) were negative for intraepithelial lesions or malignancy (NILM); 32(27.8%) presented atypical squamous cells of undetermined significance (ASC-US); 62(53.9%) exhibited low grade squamous intraepithelial lesions (LSIL) and 10(8.7%) showed high grade squamous intraepithelial lesions (HSIL). No cases of cervical cancer were detected. The overall prevalence of DNA HPV detection was 81.7% (94/115). The following specific HPV genotypes were identified in 42 (45.0%) cases: HPV16 (26.2%), HPV51 (21.4%), HPV52 (14.3%) and HPV66 (7.1%). Viral sequences of an unknown single HPV were detected in 23.8%of the cases. A total of 42/115 (36.5%) were p16INK4a/Ki-67 dual-staining-positive, being more frequent in HSIL (70.0%), decreasing in LSIL (44.0%), detected in a minority of ASC-US (25.0%) and negative in NILM cases (p<0.001). 40/115 cases (34.8%) were positive for both oncogenic HPV and p16INK4a/Ki-67 dual-staining, including 6/32 (18.8%) ASC-US, 26/62 (42.0%) LSIL and 8/10 (80.0%) HSIL, which represent a strong association between positivity for HPV, p16INK4a/Ki-67 staining and severe cytological abnormalities (p<0.001). This methodology could be used to detect unnoticed cervical lesions.

Expresión inmunohistoquímica de PCNA, Ki-67 y ciclina D1 en ameloblastomas multiquísticos / Immunohistochemical expression of PCNA, Ki-67 and cyclin D1 in solid ameloblastomas

Introducción: el ameloblastoma es un tumor odontogénico benigno, localmente agresivo, que debe su origen a partir de estructuras epiteliales involucradas en la odontogénesis. El objetivo del presente trabajo es identificar, por medio de técnicas inmunohistoquímicas, aspectos de los mecanismos regulatorios de proliferación celular y la relación de los diferentes subtipos histológicos con el comportamiento biológico de estos tumores. Materiales y métodos: se seleccionaron 10 ameloblastomas multiquísticos en los cuales se realizó inmunotinción con los marcadores PCNA, Ki-67 y Ciclina D1. La interpretación de las tinciones se basó en la intensidad, localización y los subtipos celulares. La valoración utilizada para contabilizar el número de células fue baja (menos del 10 por ciento), media (hasta el 50 por ciento) y alta (más del 50 por ciento). Resultados: la tinción fue positiva en 6 casos para PCNA, en 3 para Ki-67 y en 5 para ciclina D1, en las células basales periféricas, en los patrones foliculares y plexiformes, en las del esbozo del retículo estrellado y fue negativa en los patrones quísticos y acantomatosos. Conclusión: en base a los hallazgos se puede asumir que las células basales y parabasales de los patrones foliculares y plexiformes presentan mayor actividad proliferativa que otros patrones y determinarían la evolución y tratamiento