Histopathological characterization of the reproductive organs of heifers experimentally infected with Campylobacter fetus venerealis / Caracterización histopatológica de los órganos reproductivos de vaquillonas experimentalmente infectadas con Campylobacter fetus venerealis / Caracterização histopatológica em órgãos reprodutores de novilhas infetadas no modo experimental com Campylobacter fetus venerealis

Abstract Background: Bovine campylobacteriosis is a venereal disease due to infection with Campylobacter fetus venerealis. It causes mainly reproductive failures that lead to considerable economic losses. Objective: To perform a histopathological description of the mucosa from reproductive organs of heifers experimentally infected with Campylobacter fetus venerealis. Methods: Twelve 15-18-months-old Aberdeen Angus heifers were treated for estrous synchronization and exposed to natural breeding. They were then randomly divided into two groups: group A (n=9) was inoculated with C. fetus venerealis; group B (n=3, control) was inoculated with a placebo. Ultrasonography was performed at days 29, 38, and 42 post-breeding, and plasmatic progesterone levels were quantified using ELISA to confirm pregnancies. Animals in group A with plasma progesterone levels below 1 ng/mL and/or diagnosed as non-pregnant were further divided into three subgroups: A1 (n=4), euthanized at day 30 post-breeding; A2 (n=3), euthanized at day 40 post-breeding and A3 (n=2), euthanized at day 55 post-breeding. Heifers from group B, all diagnosed as pregnant, were euthanized each at day 30, 40, and 55 days post-breeding as well. Histological sections from every group were taken from oviducts, uterus, and vagina. Results: Lymphocytic inflammation was the most common lesion in all infected heifers. Trophoblast cells were found in the non-pregnant heifers euthanized at days 40, and 55 post-breeding. The inflammatory process with the presence of lymphoid cells probably altered the balance in the activity of maternal lymphoid cells, as well as gene expression of the trophoblast, finally affecting the embryo survival. Conclusion: This work contributes to the understanding of the histopathological process involved in post-mating infection of Campylobacter fetus bovine.

Resumen Antecedentes: La campilobacteriosis bovina es una enfermedad venérea causada por el Campylobacter fetus venerealis, que produce principalmente fallas reproductivas ocasionando grandes pérdidas económicas Objetivo: Describir las características histopatológicas de la mucosa de órganos reproductores de vaquillonas infectadas experimentalmente con Campylobacter fetus venerealis. Métodos: Doce vaquillonas Aberdeen Angus (15 a 18 meses de edad) con celo sincronizado, recibieron servicio natural, e inmediatamente se dividieron aleatoriamente en dos grupos: A (n=9), inoculadas con Campylobacter fetus venerealis; B (n=3; control), inoculadas con placebo. El diagnóstico de preñez se realizó por ultrasonografía a los 29, 38 y 42 días post-servicio; los niveles plasmáticos de progesterona fueron determinados por ELISA. Las vaquillonas del grupo A con niveles de progesterona plasmáticos menores a 1 ng/mL y/o diagnosticadas no preñadas, fueron consideradas para eutanasia y divididas en tres subgrupos: A1-eutanasia día 30 (n=4); A2-día 40 (n=3); y A3-día 55 (n=2) post-servicio. Las vaquillonas del grupo B, diagnosticadas preñadas, fueron eutanasiadas a los 30, 40 y 55 días. Se tomaron muestras de oviductos, útero y vagina. Resultados: Se observó inflamación linfocitaria en la totalidad de muestras del grupo A. Células trofoblásticas fueron encontradas en muestras correspondientes a los grupos A2 y A3. Probablemente, el proceso inflamatorio alteró el equilibrio de las células linfoides maternas y la expresión génica del trofoblasto, afectando la supervivencia embrionaria. Conclusión: Este trabajo contribuye a la comprensión del proceso histopatológico involucrado en la infección poscoital por Campylobacter fetus bovino.

Resumo Antecedentes: A campilobacteriose bovina é uma doença venérea originada pelo Campylobacter fetus venerealis, quem produz principalmente falha reprodutiva e porém grandes perdas económicas. Objetivo: Descrever as características histopatológicas da mucosa dos órgãos reprodutores de novilhas infetadas no modo experimental com Campylobacter fetus venerealis. Métodos: Doze novilhas Aberdeen Angus de 15 até 18 meses com cio sincronizado, receberam serviço natural. Logo após, foram aleatóreamente separados em grupos: A (n=9) inoculados com Campylobacter fetus venerealis e grupo B (n=3; controle) inoculadas com um placebo. O diagnóstico da gestação foi realizado por ultrasom nos dias 29, 38 y 42 pós-serviço. Os níveis plasmáticos da progesterona foram determinados por ELISA. As novilhas do grupo A, com níveis plasmáticos de progesterona menores a 1 ng/mL e/ou diagnosticadas não grávidas, foram consideradas para eutanásia e foram divididas em três subgrupos: A1-eutanásia aos 30 dias pós- serviço (n=4); A2-dia 40 (n=3); A3-dia 55 (n=2). Foram realizada eutanásia ás novilhas do grupo B diagnosticadas prenhadas, aos 30, 40 e 55 dias e a amostragem de ovidutos, útero e vagina. Resultados: A presença de inflamação linfocitária foi observada na totalidade das amostras do grupo A. Foram achadas células trofoblásticas nas amostras correspondente aos grupos A2 e A3. Provavelmente, pelo processo inflamatório tenha sido alterado o equilíbrio das células linfoides maternas, assim também como a expressão gênica do trofoblasto, afetando a supervivência embrionária. Conclusão: Este trabalho contribue á compreensão do processo histopatologico na infecção com Campylobacter fetus bovino pós-acasalamento.

Segment­ specific expression of MMP/TIMP in the oviduct of llama (Lama glama) and gelatinolytic activity in the oviductal fluid / Expresión segmento específica de MMP/TIMP en el oviducto de llama (Lama glama) y actividad gelatinolítica en el fluido oviductal

Oviductal molecules have the potential to improve the reproductive biotechnologies. In camelids, knowledge and assessment of the oviductal environment are necessary to successfully develop species-specific reproductive technologies, especially because of the camelids reproductive particularities. Among the oviductal factors, the matrix metalloproteinases/tissue inhibitor of matrix metalloproteinases system (MMPs/TIMPs) should be investigated more thoroughly due to their participation in reproductive processes. Consequently, the current study assayed gene and protein expression of MMPs throughout the llama oviduct. MMPs zymogen and active forms in the oviductal fluid were also characterized. MMP2 and MMP9 transcripts were detected in ampulla, isthmus, utero-tubal junction and papilla, being MMP2 and MMP9 2.15 and 1.10 folds higher in papilla than in ampulla, respectively. In addition, differences in immunolocalization of MMP2 and MMP9 between the epithelial mucosa layers of the oviductal segments were observed. The presence of MMPs in the epithelium suggests their secretion into the oviductal lumen. Coincidently, bands of 62 and 94 kDa, corresponding to MMP2 and MMP9 were detected by zymography in the oviductal fluid. Treatment with an exogenous activator (APMA) suggests that they are present as proMMPs. TIMP2 and TIMP1, the specific inhibitors of MMP2 and MMP9, respectively, were expressed in each oviductal segment, indicating a well-regulated control of MMP proteolytic activity in the oviduct. These findings prove that the llama oviduct produces and secretes MMPs into the oviductal lumen, suggesting that these enzymes may have an unknown role in the preparation of the oviductal environment for gametes, fertilization and early embryo development in camelids.

Las moléculas oviductales tienen el potencial para mejorar las biotecnologías reproductivas. En los camélidos, debido a sus peculiares características reproductivas, el conocimiento del ambiente oviductal constituye una herramienta útil para el desarrollo de tecnologías reproductivas específicas para estas especies. Entre los factores oviductales de interés se encuentran las metaloproteasas de matriz (MMPs) y sus inhibidores específicos (TIMPs), los cuales han sido involucrados en diferentes procesos reproductivos. Por estas razones, en este trabajo se caracterizó la expresión génica y proteica de MMP2 y MMP9 en el oviducto de llama. Además, se analizó la presencia de las formas activas e inactivas (zimógenos) de estas enzimas en el fluido oviductal. Se observó que todos los segmentos oviductales, ámpula, istmo, unión útero-tubal y papila, expresan MMP2 y MMP9, siendo los niveles de expresión de MMP2 y MMP9 más elevados en papila respecto a ámpula; 2,15 y 1,10 veces respectivamente. Asimismo, se observaron diferencias en la distribución de las MMPs a nivel de la mucosa entre los segmentos oviductales. Consecuentemente, bandas con actividad gelatinolítica de 62 y 94 kDa, se detectaron en el fluido oviductal, las cuales corresponderían a las formas inactivas de la MMP2 y la MMP9, respectivamente. Los inhibidores específicos de MMP2 y MMP9; TIMP2 y TIMP1, también se detectaron en los segmentos oviductales, indicando su probable participación en la regulación de la actividad proteolítica de las MMPs en el oviducto de llama. En conjunto, los datos de este trabajo demuestran que el oviducto de la llama produce y secreta MMPs al lumen oviductal; sugiriendo que estas enzimas pueden participar en la preparación del ambiente oviductal para la recepción de los gametos, la fecundación y el desarrollo embrionario temprano en camélidos.

Observaciones sobre la Morfología del Oviducto del Coipo (Myocastor coypus) / Observations on Oviduct Morphology of the Coypu (Myocastor coypus)

Se efectuaron los análisis anatómico e histoarquitectónico del oviducto del coipo (Myocastor coypus) en la madurez sexual. Se trabajó con 34 oviductos que fueron segmentados en infundíbulo, ampolla, unión ámpulo-ístmica, istmo cefálico, medio y caudal y procesados con técnicas histológicas de rutina. Los oviductos se observaron como órganos tubulares y tortuosos, con amplia superficie infundibular, marcada flexura en la unión con los cuernos uterinos y el desarrollo de un colículo en la unión útero-tubárica. La mucosa presentó plegamientos que disminuyeron en número, grado de ramificación y altura desde la ampolla hasta los comienzos de la unión útero-tubárica. El epitelio de revestimiento estuvo compuesto por células ciliadas y células secretoras. En el infundíbulo y el istmo fue cilíndrico simple, en tanto que en la ampolla fue seudoestratificado cilíndrico. En las regiones caudales del istmo se observaron criptas revestidas por un epitelio cilíndrico de aspecto secretor. La lámina propia fue de tejido conectivo laxo y muy vascularizado. La túnica muscular incrementó su grosor y complejidad desde el infundíbulo a la unión útero-tubárica.

Anatomical and histoachitectonic analyses of coypu (Myocastor coypus) oviduct were performed at sexual maturity. Thirty-four oviducts were segmented into: infundibulum, ampulla, cephalic istmus, middle and caudal. Routine histological techniques were used. Oviducts were observed as tubular and tortuous organs with a wide infundibular surface, a pronounce flexure at junction of the uterine horns and with a colliculus at the utero-tubaric junction. The oviductal wall was composed of the mucosal, muscular and serosal tunics. The mucosal tunic showed foldings that diminished in number, ramification and height from the ampulla to the beginning of the utero-tubaric junction. The lining epithelium was composed of ciliated cells as well as secretory cells. In the infundibulum and isthmus, it was simple and cylindrical, while in the ampoule it was cylindrical pseudo-stratified. In the caudal regions of the isthmus, crypts covered by a cylindrical epithelium with secretroy aspect were observed. The lamina propria was composed of highly vascularized lax connective tissue. The muscular tunic increased its thickness and complexity from the infundibulum to the utero-tubaric junction.

HISTOLOGICAL DESCRIPTION OF THE REPRODUCTIVE SYSTEM OF MALE AND FEMALE HATCHLINGS OF THE MAGDALENA RIVER TURTLE (Podocnemis lewyana) / Descripción histológica del sistema reproductivo de machos y hembras de la tortuga del Río Magdalena (Podocnemis lewyana)

In this study we described the macroscopic and microscopic histology of the reproductive system of male and female Podocnemis lewyana neonates (3.5 months old). We found macroscopic differences in the morphology of the gonads between the sexes, with ovaries being twice as long as testes, and testes being twice as wide as ovaries. Microscopically, we identified several immature elements, such as the lack of a muscle layer in the oviduct of females, and simple epithelia instead of pseudostratified epithelia in the oviduct and epididymis described in reptile adults. We also found a black pigment observed macroscopically in the mesovarium, and macroscopically and histologically in the epididymis. This pigment is consistent with the center of melano-macrophages described in other vertebrates. Finally we described a supporting mesenchymal structure, the appendage of the oviduct, which was much longer than what has been described in other Podocnemis species.

En este estudio se realizó una descripción macro y microscópica del sistema reproductivo de tortugas machos y hembras de neonatos de Podocnemis lewyana de 3,5 meses de edad. Se hallaron diferencias macroscópicas en las gónadas, esto es, el ovario fue el doble de largo relativo al testículo, pero el testículo fue el doble de ancho relativo al ovario. Microscópicamente se identificaron varios elementos inmaduros tales como la ausencia de una capa muscular reportada en el oviducto de hembras de reptiles adultas, y epitelios simples en lugar de epitelios pseudoestratificados en oviducto y epidídimo en reptiles adultos. También se describe un pigmento negro observado macroscópicamente en el mesoovario de las hembras, y macroscópica e histológicamente en el epidídimo de los machos. Este pigmento es compatible con los centros de melanomacrófagos reportados en otros vertebrados. Finalmente, se describe también una estructura mesenquimatosa de soporte que identificamos como el apéndice del oviducto, la cual fue mucho más larga que las descritas en otras especies de Podocnemis.

Efectos en el tracto reproductivo, digestivo y pérdida de pesocorporal del ave semipesada sometida a descanso ovárico / Efeitos no trato reprodutivo, digestivo e perda do peso de aves semi-pesadossubmetidas a descanso ovárico / The effects on the reproductive and digestive tract and loss of body weight of the Brown egg layers submitted to ovarian rest

Esta investigación evaluó la aplicación del descanso ovárico (DO) en aves semipesadas y el efecto quetienen la edad y la duración del ayuno sobre el tracto reproductivo y gastrointestinal. Se utilizaron 840ponedoras de la línea Hy-Line Brown® con 64 semanas de edad, se evaluaron tres edades de inducciónal DO (65, 70 y 75 semanas) y tres períodos de ayuno (cinco, diez y quince días), en un modelo estadísticocompletamente aleatorizado, anidado, efecto fijo y balanceado. Se sacrificaron aves para evaluar el pesocorporal, peso del tracto digestivo, peso del tracto reproductivo (ovario y oviducto), porcentaje de folículoscon diámetro igual o superior a diez mm (LYF) y el porcentaje de pérdida de peso del ave. El modelo fuesignificativo (p<0.05) para todas las variables evaluadas; la edad presentó efecto significativo (p<0.05) enel peso del ovario y el porcentaje de folículos (LYF), mientras que la duración del ayuno anidado en laedad presentó efecto significativo (p<0.05) en todas las variables, lo que indica un mayor efecto del períodode ayuno en contraste con la edad de aplicación del DO sobre las variables evaluadas. El peso del ovario(edad 65:15.87 ±15.11; edad 70: 7.92 ± 5.46; y edad 75: 7.54 ± 4.96) y porcentaje de folículos (LYF) (edad65: 43.75 ± 21.54; la edad 70 18.05 ± 8.72 y edad 75: 8.33 ± 6.85), mostraron tendencia en la disminucióna medida que aumenta la edad, comportamiento que está asociado con la disminución gradual del númerode folículos y la ampliación del tiempo entre la maduración de una onda folicular y la siguiente normaldel ave a medida que envejece (Kim y Donalson, 2000; North y Bell, 1990). Los porcentajes de pérdida de peso (edad 65: 24.24 ± 8.53%; edad 70: 20.91 ± 5.50% y edad 75: 20.88 ± 7.15%), fueron menores encomparación con los reportes en líneas livianas, posiblemente debido al contenido de reservas lipídicas,lo que ofrece al ave semipesada la capacidad de tolerar el ayuno.

The effects on the reproductive and digestive tract and loss of body weight of the Brown egg layerssubmitted to ovarian rest. This research evaluated the application of the ovarian rest (OR) on brown egglayers and the effect the age and duration of feed withdrawal have over the reproductive and gastrointestinaltract. 840 Hy-Line Brown ® layers were used at 64 weeks of age in which three ages of induction to theOR (65.70 and 75 weeks) and three feed withdrawal periods (five, ten and fifteen days) in a completelyrandomized statistical model, nested, of balanced and fixed effect. Sacrifices were carried out in order toevaluate body weight, weight of the digestive and reproductive tract (ovary and oviduct), follicle percentagewith a diameter equal to or higher than ten mm (LYF) and the percentage of the bird’s weight loss. Themodel was significant (p<0.05) for all the variables evaluated; the age presented a significant effect(p<0.05) over the ovary weight and the follicle percentage (LYF), while the duration of the feed withdrawalrelated to the age had a significant effect (p<0.05) on all the variables, which indicates a greater effect ofthe feed withdrawal period contrasted to the age of the application of the OR upon the variables evaluated.The ovary’s weight (age 65:15.87 to ± 15.11; age 70: 7.92b ± 5.46; and age 75: 7.54b ± 4.96) and thefollicle percentage (65: 43.75 to ± 21.54; age 70 18.05b ± 8.72 and age 75: 8.33b ± 6.85) showed a loweringtendency as the age increased. This type of behavior is associated with the gradual decrease in the numberof follicles and the extended time between the maturation of one follicular wave and the next as the layerages (Kim, Donalson, 2006; North, Bell, 1990). The weight loss percentages (age 65: 24.24 ± 8.53%; age70: 20.91 ± 5.50% and age 75: 20.88 ± 7.15%) were low compared to the reports on white egg layers,possibly due to the content of lipidic reserves which offers the brown egg...

Foi avaliado o descanso ovárico (DO) em galinhas semipesadas e o efeito da idade e a duração do jejumsobre o trato reprodutivo e gastrointestinal. Foram utilizadas 840 galinhas poedoras da linha Hy-LineBrown® com 64 semanas de idade, foram avaliadas três idades de indução ao DO (65, 70 e 75 semanas) etrês períodos de jejum (cinco, dez e quinze dias), utilizando um modelo desenho completamente aleatório,aninhado , efeito fixo e balanceado. As aves foram sacrificadas para avaliar o peso corporal, peso do tratodigestivo, peso do trato reprodutivo (ovário e oviduto), porcentagem de folículos com diâmetro igual ousuperior a dez mm (LYF) e a porcentagem da perdida de peso da ave. O modelo foi significativo (p<0.05)para todas as variáveis avaliadas; a idade foi significativa (p<0.05) no peso do ovário e a LYF e a duraçãodo jejum aninhado na idade apresentou efeito significativo (p<0.05) em todas as variáveis, o que indicouum maior efeito do período de jejum do que a idade sobre as variáveis avaliadas. O peso do ovário (idade65:15.87 ±15.11; idade 70: 7.92 ± 5.46; e idade 75: 7.54 ± 4.96) e percentagem de folículos (idade 65: 43.75± 21.54; idade: 70: 18.05 ± 8.72 e idade 75: 8.33 ± 6.85), mostraram tendência na diminuição à medidaque aumenta a idade. As percentagens de perda de peso (idade 65: 24.24 ± 8.53%; idade 70: 20.91 ± 5.50%e idade 75: 20.88 ± 7.15%) e as três idades apresentaram uma relação direta entre a duração dos períodosde jejum e o efeito na atrofia reprodutiva e perda de peso, permitindo determinar que não é necessáriosubmeter a jejuns superiores a dez dias.

Morphology and histological annual changes of the oviduct of chaetophractus villosus (Mammalia, Xenarthra, Dasypodidae) / Morfología y cambios histológicos anuales del oviducto de Chaetophractus villosus (Mammalia, Xenarthra, Dasypodidae)

The morphological features of the oviduct in the armadillo Chaetophractus villosus (Desmarest, 1804) were studied. In the simple columnar epithelium, ciliated cells, secretory cells, and cells of the bottom of the folds are described. The most remarkable findings are the increase in number of ciliated cells, when present, from the fimbriae to the uterus, being the isthmus practically lined by ciliated cells, and that secretory cells are more abundant in the apical zone of the ampulla and fimbriae, than in the isthmus. Morphological changes along the year in the different portions are described.

Se estudiaron las características morfológicas del oviducto del armadillo Chaetophractus villosus (Desmarest, 1804). En el epitelio, columnar simple, se describen células ciliadas, secretoras y células del fondo de los pliegues. Las células ciliadas, cuando están presentes, aumentan en número desde las fimbrias hacia el útero, estando el istmo prácticamente tapizado por células ciliadas, las células secretoras son más abundantes en la zona apical de la ampolla y en las fimbrias, que en el istmo. Se describen los cambios morfológicos en las diferentes porciones a lo largo del año.

Morphology of an infundibulum of the oviduct of the sexually mature hens

Studied functional morphology of an infundibulum oviduct of the hens in an age interval 150-540 days. As indicators of development the following parameters served: length, weight, diameter of a infundibulum, sizes epithelial cells, height and width folds of a tunica mucosa, histological structure of a wall of a infundibulum. The results show dynamical increase of investigated parameters with 150- till 360-day's age, with their subsequent decrease to 540-day's age.

Se estudió la morfología funcional del infundibulum del oviducto de gallinas en un intervalo de edad de 150-540 días. Sirvieron como indicadores de desarrollo los siguientes parámetros: longitud, peso, diámetro del infundibulum, tamaño de las células epiteliales, altura y ancho de los pliegues de la túnica mucosa y estructura histológica de la pared del infundibulum. Los resultados muestran incrementos dinámicos de los parámetros investigados con 150 días hasta 360 días de edad, con su posterior disminución a los 540 días de edad.

Desarrollo de Embriones Caprinos In Vitro: Efecto del Co-Cultivo con Células Epiteliales de Oviducto / In Vitro Development of Goat Embryos: Effect of Co-culture with Oviductal Epithelial Cells

El desarrollo de sistemas de cultivo in vitro que permitan obtener altos porcentajes de embriones viables es de gran importancia para la implementación de biotecnologías como el clonado y la transferencia de genes. Estudios tendientes a mejorar la eficiencia de los sistemas de cultivo embrionario son especialmente importantes en ganado caprino por el escaso desarrollo de estos métodos en dicha especie. El objetivo del presente estudio fue comparar el desarrollo de embriones caprinos fecundados in vivo cultivados: a) con células epiteliales de oviducto caprino (CEO), b) en fluido sintético de oviducto (SOF; del Inglés: synthetic oviduct fluid) o c) en medio condicionado por células epiteliales de oviducto caprino (MC). Embriones de 1-8 células colectados del oviducto de cabras superovuladas se cultivaron in vitro durante 4-5 días en los diferentes tratamientos. Al término del cultivo se estableció el estadio de desarrollo embrionario alcanzado y el número de células por embrión a partir de embriones teñidos con lacmoid. Un mayor porcentaje de embriones se desarrollaron hasta el estado de mórula/blastocisto en cocultivo comparado con los cultivados en SOF (75% vs. 41% respectivamente; P < 0,05) o MC (5,5%); mientras que el SOF resultó superior al MC para sustentar el desarrollo de los embriones caprinos hasta mórula/blastocisto. Los embriones producidos en cocultivo con CEO tenían más células que los cultivados en SOF (15,3 vs. 8,1 células/embrión; P < 0,05) y estos últimos más que los cultivados en MC. La viabilidad de los embriones generados en SOF se confirmó mediante transferencia a una cabra receptora, seguido por el nacimiento de 2 cabritos. En conclusión el cocultivo con CEO brinda mejores condiciones para sustentar el desarrollo in vitro de embriones caprinos en relación con los otros dos sistemas estudiados.

Development of reliable in vitro culture systems to produce high percentages of viable embryos is instrumental in the application of biotechnologies such as cloning and transgenesis. This is especially true for caprine species in which in vitro technology for embryo culture has been poorly developed. The objective of this study was to compare in vitro development of in vivo fertilized caprine embryos in: a) coculture with caprine oviductal epithelial cells (OEC), b) synthetic oviduct fluid (SOF), or c) medium conditioned by oviductal epithelial cells (CM). In vivo fertilized 1-8 cell caprine embryos collected by oviductal flushing were allocated to treatments and cultured for 4-5 days in vitro. At the end of the culture period, embryonic development was recorded and the number of cells per embryo was determined in lacmoid-stained embryos. A significantly higher percentage of embryos reached the morula/blastocyst stage in coculture compared with those cultured in SOF (75% vs. 41% respectively; P < 0.05) or CM (5.5%); SOF was superior to CM to supporting goat embryo development. Likewise, embryos grown in coculture with OEC had more cells than those cultured in SOF (15.3 vs. 8.1 cells/embryo; P < 0.05). Cell counts were higher in embryos cultured in SOF than those originated from CM. In conclusion, coculture of goat embryos with OEC provided superior conditions to support in vitro development of early-stage goat embryos compared with the other treatments studied.