Pharmacological characterization of the relaxant effect induced by adrenomedullin in rat cavernosal smooth muscle

The aim of the present study was to determine the mechanisms underlying the relaxant effect of adrenomedullin (AM) in rat cavernosal smooth muscle (CSM) and the expression of AM system components in this tissue. Functional assays using standard muscle bath procedures were performed in CSM isolated from male Wistar rats. Protein and mRNA levels of pre-pro-AM, calcitonin receptor-like receptor (CRLR), and Subtypes 1, 2 and 3 of the receptor activity-modifying protein (RAMP) family were assessed by Western immunoblotting and quantitative real-time polymerase chain reaction, respectively. Nitrate and 6-keto-prostaglandin F1α (6-keto-PGF1α; a stable product of prostacyclin) levels were determined using commercially available kits. Protein and mRNA of AM, CRLR, and RAMP 1, -2, and -3 were detected in rat CSM. Immunohistochemical assays demonstrated that AM and CRLR were expressed in rat CSM. AM relaxed CSM strips in a concentration-dependent manner. AM22-52, a selective antagonist for AM receptors, reduced the relaxation induced by AM. Conversely, CGRP8-37, a selective antagonist for calcitonin gene-related peptide receptors, did not affect AM-induced relaxation. Preincubation of CSM strips with NG-nitro-L-arginine-methyl-ester (L-NAME, nitric oxide synthase inhibitor), 1H-(1,2,4)oxadiazolo[4,3-a]quinoxalin-1-one (ODQ, quanylyl cyclase inhibitor), Rp-8-Br-PET-cGMPS (cGMP-dependent protein kinase inhibitor), SC560 [5-(4-chlorophenyl)-1-(4-methoxyphenyl)-3-trifluoromethyl pyrazole, selective cyclooxygenase-1 inhibitor], and 4-aminopyridine (voltage-dependent K+ channel blocker) reduced AM-induced relaxation. On the other hand, 7-nitroindazole (selective neuronal nitric oxide synthase inhibitor), wortmannin (phosphatidylinositol 3-kinase inhibitor), H89 (protein kinase A inhibitor), SQ22536 [9-(tetrahydro-2-furanyl)-9H-purin-6-amine, adenylate cyclase inhibitor], glibenclamide (selective blocker of ATP-sensitive K+ channels), and apamin (Ca2+-activated channel blocker) did not affect AM-induced relaxation. AM increased nitrate levels and 6-keto-PGF1α in rat CSM. The major new contribution of this research is that it demonstrated expression of AM and its receptor in rat CSM. Moreover, we provided evidence that AM-induced relaxation in this tissue is mediated by AM receptors by a mechanism that involves the nitric oxide-cGMP pathway, a vasodilator prostanoid, and the opening of voltage-dependent K+ channels.

Nitric oxide levels are not changed in saliva of patients infected with hepatitis C virus

O objetivo desta investigacão foi avaliar os níveis de metabólitos do óxido nítrico na saliva de pacientes anti-vírus da hepatite C positivos na tentativa de correlacionar os níveis desses metabólitos com a presenca do VHC na saliva. Foram estudados 39 pacientes anti-VHC positivos (9 com enzimas hepáticas normais, 16 com hepatite crônica e 14 com cirrose hepática) e em 13 controles saudáveis, sem sinais ou sintomas de doenca hepática.O RNA do VHC foi identificado no soro e na saliva através de técnica de RT-PCR e os níveis de óxido nítrico foram avaliados pela quantificacão dos seus metabólitos estáveis, nitratos e nitritos. Os resultados demonstraram que os níveis de nitrito na saliva não diferiram significativamente no grupo anti-VHC positivo em relacão ao grupo controle, nem entre os grupo com presenca ou ausência do RNA do VHC na saliva. Os níveis de nitrito foram mais elevados no grupo com cirrose hepática do que nos grupos controle e anti-VHC positivos, sem cirrose hepática, mas as diferencas não foram estatisticamente significativas. A não observacão de níveis elevados de nitrito na saliva dos pacientes anti-VHC positivos é uma indicacão indireta de que a sialoadenite não deve ser freqüente nesses pacientes ou, se existe, é de intensidade não suficiente para modificar os níves de óxido nítrico na secrecão salivar.

Nitric oxide derivative in bronchoalveolar lavage fluid from patients with idiopathic pulmonary fibrosis.

Idiopathic pulmonary fibrosis is a chronic inflammatory disorder of unknown aetiology with a number of inflammatory cells playing a role in its pathogenesis. In this study, we have attempted to find out the possible role of nitric oxide in its pathogenesis by way of measuring the nitrite and nitrate levels in the bronchoalveolar lavage fluid. Ten patients of histologically proved idiopathic pulmonary fibrosis and 10 controls (5 with normal chest skiagrams and 5 with sarcoidosis) were included in the study Bronchoalveolar lavage was carried out in these cases. The levels of nitrates and nitrites were increased in cases of idiopathic pulmonary fibrosis (0.77+/- 0.36 and 8.93 +/- 2.63 nmol/mg of protein) compared to those in controls (0.38 +/- 0.06 and 3.80 +/- 1.11, respectively for sarcoidosis patients); (0.39 +/- 0.13 and 6.56 +/- 1.61 for subjects with normal chest skiagrams). These differences were statistically significant (p < 0.05 to 0.01). These findings suggest a possible role of nitric oxide in the pathogenesis of idiopathic pulmonary fibrosis.

Estudo da participação do óxido nítrico na transmissão neuromuscular

A acetilcolina (Ac), mediador químico responsável pela transmissão neuromuscular está armazenada em vesiculas no terminal nervoso motor (TNM), onde se distribuem em dois compartimentos principais. Um, denominado fração imediatamente utilizável (FIU), localiza-se na região próxima da face interna da membrana pré-sináptica, e o outro disperso no citoplasma forma a chamada fração de depósito (FD), que pode ser mobilizada para o FIU. Segundo esse modelo, sempre que vesículas da FIU liberam seu conteúdo para a fenda sináptica, vesículas da FD seriam deslocadas para a periferia de modo a repor o conteúdo gasto. A liberação da Ac presente na FIU ocorre quando o potencial de ação propagado, ao atingir o TNM, determina a abertura de canais que permitem a entrada de íons cálcio para o interior do TNM [...] O objetivo do presente trabalho foi verificar a participação do NO na transmissão neuromuscular. Três parâmetros foram observados. 1. Ações pré e pós-sináptica do NO na junção neuromuscular; 2. Envolvimento da via NO-GMPc e 3. Efeitos do NO no processo de fadiga muscular. Para tanto, utilizou-se preparações nervo frênico-diafragma isolado de ratos estimuladas com baixas freqüências e preparações nervo ciático-tibial anterior de gatos para estudos com alta freqüência de estimulação neuronal (estímulos tetanizantes). L-arg (NO endógeno) e NO sintetizado a partir de nitrito de sódio (NO exógeno) foram utilizados como fonte de NO. Nas preparações nervo frênico-diafragma isolado de ratos, NO (endógeno e exógeno) atuando pré-sinapticamente, induziu um aumento na amplitude das contrações musculares (ACM), que foi antagonizado pelo inibidor da GC, azul de metileno. [...] A adição prévia de azul de metileno antagonizou apenas o aumento inicial da ACM observado com NO exógeno. NO acentuou fadiga muscular observada quando estímulos tetanizantes foram aplicados no TNM das preparações nervo ciático-tibial anterior de gatos, sendo este efeito também antagonizado pela prévia admini