RESUMO
Dermatophagoides farinae (Der f), one of the main species of house dust mites, produces more than 30 allergens. A recently identified allergen belonging to the alpha-tubulin protein family, Der f 33, has not been characterized in detail. In this study, we used bioinformatics tools to construct the secondary and tertiary structures and predict the B and T cell epitopes of Der f 33. First, protein attribution, protein patterns, and physicochemical properties were predicted. Then, a reasonable tertiary structure was constructed by homology modeling. In addition, six B cell epitopes (amino acid positions 34-45, 63-67, 103-108, 224-230, 308-316, and 365-377) and four T cell epitopes (positions 178-186, 241-249, 335-343, and 402-410) were predicted. These results established a theoretical basis for further studies and eventual epitope-based vaccine design against Der f 33.
Assuntos
Animais , Tubulina (Proteína)/química , Alérgenos/química , Epitopos de Linfócito T/química , Epitopos de Linfócito B/química , Dermatophagoides farinae/química , Antígenos de Dermatophagoides/química , Tubulina (Proteína)/genética , Tubulina (Proteína)/imunologia , Alérgenos/genética , Alérgenos/imunologia , Estrutura Molecular , Estrutura Terciária de Proteína , Mapeamento de Epitopos , Epitopos de Linfócito T/genética , Epitopos de Linfócito B/genética , Biologia Computacional , Análise de Sequência de Proteína , Dermatophagoides farinae/genética , Dermatophagoides farinae/imunologia , Antígenos de Dermatophagoides/genética , Antígenos de Dermatophagoides/imunologiaRESUMO
To obtain the recombinant group 2 allergen product of Dermatophagoides farinae (Der f 2), the Der f 2 gene was synthesized by RT-PCR. The full-length cDNA comprised 441 nucleotides and was 99.3 percent identical to the reference sequence (GenBank AB195580). The cDNA was bound to vector pET28a to construct plasmid pET28a(+)-Der f 2, which was transformed into E. coli BL21 and induced by IPTG. SDS-PAGE showed a specific band of about 14kDa in the hole cell lysate. s estiated by chroatography, about 3.86 g of the recobinant product as obtained, which conjugated with serum IgE from asthmatic children. The protein had a signal peptide of 17 amino acids. Its secondary structure comprised an alpha helix (19.86 percent), an extended strand (30.82 percent), and a random coil (49.32 percent). The subcellular localization of this allergen was predicted to be at mitochondria. Furthermore, its function was shown to be associated with an MD-2-related lipid-recognition (ML) domain. The results of this study provide a solid foundation for large-scale production of the allergen for clinical diagnosis and treatent of allergic disorders.
Com a finalidade de obter o produto recombinante do alergeno grupo 2 do Dermatophagoides farinae (Der f2), o gene Der f2 foi sintetizado por RT-PCR. O cDNA continha 441 nucleotídeos e era idêntico em 99,3 por cento à sequência de referência (GenBank AB195580). O cDNA foi ligado ao vetor pET28a para construir o plasmídeo pET28a(+)-Der f2, o qual foi introduzido por transformação em E. coli BL21 e induzido por IPTG. Em SDS-PAGE foi vista mia banda específica de 14 kDa no lisado celular. Conforme estimado por cromatografia, cerca de 3,86 mg do produto recombinante foi obtido, que reagia com IgE sérica de crianças asmáticas. A proteína continha um peptídeo sinal de 17 amino ácidos. Sua estrutura secundária consistia de uma alfa hélice (19,86 por cento), uma fita estendida (30,82 por cento), e uma sequência randômica (49,32 por cento). A localização subcelular desse alergeno foi predita ocorrer nas mitocôndrias. Sua função foi associada com o domínio de reconhecimento lipídico (ML) relacionado a MD-2. Os resultados desse estudo permitem a produção em larga escala do alergeno para o diagnóstico clínico e tratamento das doenças alérgicas.
Assuntos
Animais , Pré-Escolar , Humanos , Alérgenos/genética , Antígenos de Dermatophagoides/genética , Dermatophagoides farinae/genética , Escherichia coli/genética , Sequência de Aminoácidos , Alérgenos/química , Alérgenos/farmacologia , Antígenos de Dermatophagoides/química , Western Blotting , Clonagem Molecular , DNA Complementar/genética , Escherichia coli/metabolismo , Dados de Sequência Molecular , Reação em Cadeia da PolimeraseAssuntos
Alérgenos/biossíntese , Alérgenos/fisiologia , Alérgenos/genética , Dermatite Alérgica de Contato/complicações , Dermatite Alérgica de Contato/diagnóstico , Dermatite Alérgica de Contato/fisiopatologia , Dermatite Alérgica de Contato/imunologia , Hipersensibilidade/fisiopatologia , Hipersensibilidade/genéticaRESUMO
Aspergillus fumigatus (Af) is ubiquitous saprophytic fungus associated with a broad spectrum of diseases in humans. These diseases range from benign colonization of the lung to life threatening diseases such as allergic bronchopulmonary aspergillosis (ABPA) and invasive aspergillosis. Af is the etiologic agent identified in most of the Aspergillus related human diseases and is therefore of particular clinical importance. Af induced obstructive airway diseases may be due to transient exposure to fungal spores resulting in a T helper 2 response. The IgE mediated inflammatory reaction could be due to colonization of bronchial airway epithelium by Af. Early and precise diagnosis of Aspergillus induced respiratory allergy is essential for preventing irreversible lung damages. The major problems in the diagnosis of A. fumigatus induced diseases are due to the lack of standardized and well characterized fungal extracts. The advent of molecular cloning technology and the development of phage surface display technology for cloning genes have facilitated the isolation of more relevant recombinant allergens. Using these techniques, a panel of different Af allergens having distinct IgE binding with various groups of Af sensitized patients have been cloned and characterized. These allergens can be categorized functionally as secreted and cytoplasmic proteins. The distinct IgE binding property of these purified and well characterized recombinant Af allergens may be useful for the differential diagnosis of Af related pulmonary complications.
Assuntos
Alérgenos/genética , Aspergilose Broncopulmonar Alérgica/imunologia , Aspergillus fumigatus/imunologia , Humanos , Imunoglobulina E/sangue , ImunoterapiaRESUMO
Clinical cases of type-1 hypersensitive reaction to rice (Oryza sativa) have been reported in western countries as well as in Japan. Among rice proteins, 14-16 kD globulin proteins encoded by multiple gene family have been identified as major rice allergens. In this study, a rice cDNA library was constructed using lambda UniZap vector and screened with a rat anti-16 kD globulin protein polyclonal antibody in order to isolate Korean rice allergenic cDNA clones. Five independent cDNA clones, termed RAK1-5, were obtained after second rounds of plaque assay and immunoblot analysis. These clones encoded 13-19 kD recombinant proteins upon IPTG induction, which were identified by the polyclonal antibody in immunoblot analysis. DNA sequencing analysis showed that RAK1-4 have 99% sequence homology with RA5b, and RAK5 is closely related with RA14c. This result indicated that RA5b gene is widely distributed in our cDNA library among other possible rice allergenic genes, and more study is needed to isolate heterogeneous or novel rice allergen genes. Copyright 2000 Academic Press.
Assuntos
Feminino , Ratos , Alérgenos/imunologia , Alérgenos/genética , Sequência de Aminoácidos , Animais , Anticorpos/imunologia , Especificidade de Anticorpos , Clonagem Molecular , Reações Cruzadas , DNA Complementar , Biblioteca Gênica , Vetores Genéticos , Immunoblotting/métodos , Dados de Sequência Molecular , Proteínas de Plantas/imunologia , Proteínas de Plantas/genética , Ratos Endogâmicos , Oryza/genética , Análise de Sequência de DNARESUMO
Los estudios clonales son los que definen la secuencia proteíca de varios alergenos y permiten la recombinación de los mismos para extractos de inmunoterapia. Ha sido factible clonar los receptores para IgE en mastocitos y basófilos y dilucidar sus mecanismos de regulación. En un futuro será posible diseñar moléculas recombinantes para la inhibición específica de síntesis y receptores de IgE e impedir la transmisión de señales y liberación de mediadores. El Diagnóstico de muchas enfermedades se basa en técnicas moleculares, inclusive in útero. En inmunología los genes para múltiples enfermedades se han clonado, se han usado recombinaciones con interferón gamma como tratamiento para pacientes con dermatitis atópica y enfermedad granulomatosa crónica
Assuntos
Alérgenos/genética , Alérgenos/imunologia , Clonagem Molecular , Biologia MolecularRESUMO
Revisión retrospectiva de 308 expedientes clínicos de pacientes que acuden al servicio de alergia e inmunología clínica del Centro Médico 20 de Noviembre del ISSSTE por cursar con padecimientos alérgicos, realizada para determinar la frecuencia de sensibilización a aeroalergenos (mediante intradermorreacciones) y su relación con la zona en que habitaban. Los pacientes fueron más sensibles al polvo y dermatofagoides (75 y 40 por ciento respectivamente). Otros aeroalergenos que causaron sensibilización en los pacientes fueron Capriola dactylon (37.6 por ciento), Ambrosia elatior (33 por ciento), Cándida (21.4 por ciento), Penicillium (18.1 por ciento), Mucor y Rizopus (17.8 por ciento cada uno)