Pathogenic potential of Brucella ovis field isolates with different genotypic profile and protection provided by the vaccine strain B. ovis ΔabcBA against B. ovis field isolates in mice / Vacina viva atenuada Brucella ovis Δ abcBA encapsulada protege camundongos frente a desafios de B. ovis isoladas de campo

Brucella ovis causes economic and reproductive losses in sheep herds. The goal of this study was to characterize infection with B. ovis field isolates in a murine model, and to evaluate protection induced by the candidate vaccine strain B. ovis ΔabcBA in mice challenged with these field isolates. B. ovis field strains were able to colonize and cause lesions in the liver and spleen of infected mice. After an initial screening, two strains were selected for further characterization (B. ovis 94 AV and B. ovis 266 L). Both strains had in vitro growth kinetics that was similar to that of the reference strain B. ovis ATCC 25840. Vaccination with B. ovis ΔabcBA encapsulated with 1% alginate was protective against the challenge with field strains, with the following protection indexes: 0.751, 1.736, and 2.746, for mice challenged with B. ovis ATCC25840, B. ovis 94 AV, and B. ovis 266 L, respectively. In conclusion, these results demonstrated that B. ovis field strains were capable of infecting and inducing lesions in experimentally infected mice. The attenuated vaccine strain B. ovis ΔabcBA induced protection in mice challenged with different B. ovis field isolates, resulting in higher protection indexes against more pathogenic strains.(AU)

Brucella ovis é responsável por perdas econômicas e reprodutivas em rebanhos ovinos. O objetivo deste trabalho foi caracterizar a infecção com as cepas isoladas de campo de B. ovis em modelo murino e avaliar a eficiência vacinal da mutante B. ovis ΔabcAB para proteção contra desafio com as cepas isoladas de campo. Foram utilizadas sete cepas isoladas de campo foram capazes de colonizar e provocar lesões no fígado e no baço de camundongos após sete dias pós-infecção. Após triagem, duas cepas foram selecionadas para a melhor caracterização (B. ovis 94 AV and B. ovis 266L). Ambas apresentaram crescimento em placa de cultivo semelhante ao da cepa de referência B. ovis ATCC 25840. A vacinação com a cepa de Brucella ovis ΔabcBA encapsulada com alginato a 1% foi capaz de proteger camundongos desafiados com as cepas isoladas de campo, com os seguintes índices de proteção: 0,751, 1,736 e 2,746, para camundongos desafiados com B. ovis ATCC 25840, B. ovis 94 AV e B. ovis 266 L, respectivamente. Estes resultados demonstraram que as cepas isoladas de campo de B. ovis são capazes de infectar e induzir lesão em camundongos experimentalmente infectados. O uso da cepa mutante atenuada B. ovis ΔabcBA para vacinação de fêmeas C57BL/6 desafiados com diferentes cepas de B. ovis induziu proteção nos camundongos desafiados com diferentes cepas de B. ovis. Deste modo, mostrando-se eficiente na proteção das cepas de campo de B. ovis.(AU)

Real-time PCR for detection of Brucella ovis and Histophilus somni in ovine urine and semen / PCR em tempo real para detecção de Brucella ovis e Histophilus somni em urina e sêmen ovino

A epididimite infecciosa ovina é uma das principais enfermidades reprodutivas de carneiros. O presente estudo teve por objetivo desenvolver protocolos de PCR em tempo real para B. ovis e H. somni e avaliar sua aplicabilidade em amostras de sêmen e urina de carneiros. Delinearam-se primers e sondas espécie-específicos para cada agente. As sondas foram delineadas com o sistema TaqMan incorporando um marcador FAM para B. ovis e Cy5 para H. somni na extremidade 5' e um quencher na extremidade 3'. A PCR em tempo real para B. ovis e H. somni foi altamente sensível, uma vez que a amplificação de DNA ocorreu com até 0,2ng de DNA/reação. A especificidade dos iniciadores e sondas foi avaliada com amostras de DNA de outros agentes causadores de epididimite ovina e nenhuma amplificação inespecífica foi observada. A aplicabilidade da técnica em amostras biológicas também foi confirmada, pois não houve perda de eficácia (P>0,05) quando comparada à PCR convencional com amostras de sêmen e urina de carneiros experimentalmente infectados.

Ocorrência de anticorpos anti-Brucella ovis em ovinos com histórico de distúrbios reprodutivos no estado de São Paulo, Brasil / Occurrence of antibodies anti-Brucella ovis in ovine with history of reproductive disorders in São Paulo, Brazil

Com base no histórico de distúrbios reprodutivos, foram realizados inquéritos sorológicos e tentativas de isolamento de Brucella ovis em 28 propriedades do estado de São Paulo, totalizando 294 ovinos. Os soros colhidos por ocasião das visitas aos estabelecimentos rurais foram submetidos ao teste de fixação do complemento. Durante os exames clínicos, também foram colhidas amostras de materiais biológicos suspeitos para posterior cultivo bacteriológico em meio Brucella ágar, num total de 16 fetos abortados, um útero, seis secundinas, 13 secreções uterinas, seis zaragatoas de muco vaginal, 17 amostras de sêmen e três zaragatoas prepuciais. A proporção de ovinos com histórico de distúrbios reprodutivos e sororreativos para B. ovis foi de 1,7% (5/294), sendo um macho e quatro fêmeas, com títulos variando de 800 UI a 1.600 UI. Quatro rebanhos dos 28 pesquisados apresentaram animais sororreagentes (14,3%). Todos os cultivos das amostras biológicas foram negativos, inclusive sêmen e órgãos reprodutivos de carneiro da raça Texel, positivo em dois testes de fixação de complemento com intervalo de seis meses. Nos rebanhos de ovinos do estado de São Paulo examinados, não foi possível relacionar os distúrbios reprodutivos à sorologia positiva para B. ovis. No entanto, foi detectada presença de focos, fator de risco para a disseminação da bactéria nos rebanhos.(AU)

Based upon a history of reproductive disorders, a serological survey and attempts to isolate Brucella ovis were performed in 28 farms in the State of São Paulo, in a total of 294 sheep. The sera sampled on the occasion of the visit to the farms were subject to complement fixation. During clinical examination, samples of several suspicious biological materials were collected for further bacterial culture in Brucella agar medium, in a total of 16 aborted foetuses, one uterus, one placenta, 13 uterine discharge, six vaginal swabs, 17 semen samples and three preputial swabs. The proportion of sheep with a history of reproductive disorders and serum reactive for B. ovis was of 1.7% (5/294), including one ram and four ewes, with titres ranging from 800 IU to 1600 IU. Four of the 28 sheep herds surveyed had serum reactive animals (14,3%). All cultures of biological samples were negative, including semen and swabs from the reproductive organs of a Texel ram, positive in two complement fixation tests, six months apart. In the sheep herds surveyed in the State of São Paulo, it was not possible to relate the reproductive disorders to the positive serology for B. ovis, however, foci were detected, representing a risk factor for bacterial dissemination in the herds.(AU)

Caracterização epidemiológica e fatores de risco associados à infecção por Brucella ovis em ovinos deslanados do semiárido paraibano / Epidemiological characterization and risk factors associated with Brucella ovis infection in sheep in the Brazilian semiarid

Este trabalho teve como objetivo determinar a prevalência de rebanhos ovinos positivos (focos) e de animais soropositivos para Brucella ovis na mesorregião do Sertão, Estado da Paraíba, Nordeste do Brasil, bem como identificar fatores de risco. Foram colhidas amostras de sangue de 1.134 animais procedentes de 103 rebanhos em 17 municípios. Para o diagnóstico sorológico da infecção por B. ovis foi utilizado o teste de imunodifusão em gel de ágar (IDGA). Um rebanho foi considerado positivo quando apresentou pelo menos um animal soropositivo. Das 103 propriedades utilizadas 21 (20,39%) apresentaram pelo menos um animal soropositivo e dos 1.134 animais, 59 (5,20%) foram soropositivos. Realizar higiene nas instalações com periodicidade anual (odds ratio = 7,13; IC 95% = 1,56-32,47; p=0,011) e aquisição de animais (odds ratio = 6,06; IC 95% = 1,39-26,48; p=0,017) foram identificados como fatores de risco. Com base na análise de fatores de risco, recomenda-se a realização de diagnóstico da infecção por B. ovis previamente à aquisição de animais e realização periódica de higienização das instalações.

The aim of this investigation was to determine the seroprevalence of Brucella ovis in sheep flocks and individual sheep in the Sertão mesorregion, Paraíba state, Northeastern Brazil, as well as to identify risk factors. Blood samples were collected from 1,134 sheep from 103 flocks in 17 counties. For the serological diagnosis of B. ovis infection the agar gel immunodiffusion test (AGID) was carried out. A flock was considered positive when there was at least one seropositive animal. Of the 103 flocks used, 21 (20.39%) presented at least one seropositive sheep, and of the 1,134 sheep examined 59 (5.20%) seropositive animals were diagnosed. Cleaning of facilities (odds ratio = 7.13; 95% CI=1.56-32.47; p=0.011) and purchase of animals (odds ratio = 6.06; 95% CI=1.39-26.48; p=0.017) were identified as risk factors. Based on the risk factor analysis, it is recommended the diagnosis of B. ovis infection prior to purchase of sheep and the periodic cleaning of the facilities on the farm.

Detection of brucella ovis in ovine from Paraíba state, in the northeast region of Brazil

To determine the presence of Brucella ovis in ovine from Paraíba State, in the Northeast region of Brazil, 80 animals slaughtered in the public slaughterhouse of Patos city were used. Before slaughter, blood samples were collected by jugular venopuncture from each animal, and after slaughter, testicles, epidydimus and uterus were aseptically collected. For the serological diagnosis of B. ovis and B. abortus infections, the agar gel immunodiffusion (AGID) and Rose Bengal (RBT) tests were carried out, respectively. In addition, microbiological culture and polymerase chain reaction (PCR) were performed on testicle, epidydimus and uterus samples. Six animals (7.5 percent) tested positive for the presence of B. ovis antibodies and all animals tested negative for the presence of B. abortus antibodies. One AGID-positive animal tested positive at uterine swab culture. PCR was able to amplify DNA of Brucella spp. from the pool of testicle, epidydimus and uterus samples from AGID-positive animals. This is the first report of isolation and detection of B. ovis DNA by PCR in ovine from the Northeast region of Brazil.

Inquérito soro-epidemiológico e fatores de risco associados à infecção por Brucella ovis em carneiros deslanados do semi-árido da Paraíba / Sero-epidemiological survey and risk factors for Brucella ovis infection in rams of the semiarid region of Paraíba, northeastern Brazil

Foi realizado um levantamento soro-epidemiológico da brucelose por Brucella ovis em reprodutores ovinos deslanados na Paraíba com os objetivos de verificar a prevalência e distribuição da infecção por B. ovis em propriedades rurais e analisar os possíveis fatores de risco associados à infecção. Foram investigadas 283 propriedades criadoras de ovinos, das quais foram colhidas 498 amostras de soro sanguíneo de carneiros, a partir de oito meses de idade, nas mesorregiões do Sertão Paraibano e Borborema. Todos os soros foram examinados pela IDGA (teste de triagem) e RFC (teste confirmatório). De acordo com as análises, 8,59 por cento (I.C.95 por cento = 5,83 por cento-12,48 por cento) das propriedades apresentaram evidência sorológica de infecção por B. ovis, com uma prevalência de 5,57 por cento (I.C.95 por cento = 3,86 por cento-7,97 por cento) de reprodutores sororreagentes. Nas propriedades que higienizavam suas instalações com maior freqüência, a soropositividade foi estatisticamente inferior (p < 0,05).

A sero-epidemiological survey was conducted to determine the prevalence and distribution of Brucella ovis infection in rams in the state of Paraíba, northeastern Brazil. The risk factors for the infection were also verified. Serum samples from 498 rams, 8 months of age or older, of 283 sheep herds in the Sertão Paraibano and Borborema mesoregions were investigated. All sera were examined by AGID test (screening test) and CFT (confirmatory test). From the total of examined herds, 8.59 percent (95 percent CI = 5.83 percent-12.48 percent) were seropositive for Brucella ovis. The prevalence of seropositive rams was 5.57 percent (95 percent CI = 3.86 percent-7.97 percent). The seropositivity was lower in herds where cleanliness was frequently made (p< 0.05).