Selection of phytotoxin producing rhizobacteria

In order to select phytotoxin producing rhizobacteria to control weed plants, twenty five bacterial strains previously isolated from the rhizospheres of various plants were grown in a liquid medium and, after cell removal by centrifugation, the liquid phases were freeze-dried and the products were extracted with ethyl acetate/methanol. The extracts were concentrated to dryness under vacuum and dissolved in water and sucrose solution to be submitted to in vitro assays of lettuce (Lactuca sativa L.) seed germination and wheat (Triticum aestivum L.) coleoptile growth. Although most samples affected coleoptile growth, only those from four strains reduced lettuce seed germination. Two strains of Bacillus cereus, one strain of B. pumilus and one of Stenotrophoonas altophilia were the most promising microorganisms for producing phytotoxin and, consequently, for the development of new weed control products.

Com o objetivo de selecionar rizobactérias produtoras de fitotoxinas para uso no controle de plantas daninhas, vinte e cinco isolados bacterianos previamente obtidos das rizosferas de diferentes plantas foram cultivados em meio líquido e, após remoção das células por centrifugação, as fases líquidas foram liofilizadas e os resíduos obtidos foram submetidos à extração com acetato de etila/metanol. Os extratos foram concentrados sob vácuo até secura e dissolvidos em água e solução de sacarose para serem submetidos a testes in vitro de germinação de sementes de alface (Lactuca sativa L.) e de crescimento de coleóptilos de trigo (Triticum aestivum L.). Embora a maior parte das amostras tenha desfavorecido o crescimento dos coleóptilos de trigo, somente as provenientes de quatro isolados reduziram a germinação das sementes de alface. Dois isolados de Bacillus cereus, um isolado de B. pumilus e um de Stenotrophomonas maltophilia foram os microrganismos mais promissores para a produção de fitotoxinas, com possibilidade de uso no desenvolvimento de novos produtos para o controle de plantas daninhas.

Diversity of marine gliding bacteria in Thailand and their cytotoxicity

Eighty-four marine gliding bacteria were isolated from specimens collected in the Gulf of Thailand and the Andaman Sea. All exhibited gliding motility and swarm colonies on cultivation plates and they were purified by subculturing and micromanipulator techniques. Their 16S rRNA genes were amplified by the polymerase chain reaction (PCR) technique. The phylogenetic analysis indicated that the represented isolates can be separated into six different clads (gr 1 - gr 6) within the Cytophaga-Flavobacterium-Bacteriodes (CFB) group. Group 1 formed a remote linear, with only 90 percent sequence similarity, from Flavobacteriaceae bacterium which indicated a potentially novel taxonomic group. Groups 2 and 3 were identified as the recently proposed Tenacibaculum mesophilum and Fulvivirga kasyanovii respectively. Groups 4, 5 and 6, consisting of the largest number of the members, were identified as Rapidithrix thailandica, Aureispira marina and Aureispira maritima respectively. The isolates were cultivated in four different cultivation media (Vy/2, RL 1, CY and SK) and the crude extracts were submitted to screen cytotoxicity using a sulphorodamine B (SRB) assay. The results from cytotoxic screening showed that groups 2, 4 and 6 were capable of producing the cytotoxic metabolites against selected human cell lines (breast adenocarcinoma (MCF-7), colon cancer (HT-29), cervical cancer (HeLa) and oral cancer (KB)). However, groups 1, 3 and 5 did not produce metabolites with cytotoxicity when cultivated in the same cultivation media as the previous groups. CY medium was the only cultivation medium which could yield the cytotoxic metabolites against MCF-7.

Differential kinetic patterns for Shiga toxin production by Escherichia coli

El objetivo de este trabajo fue estudiar la cinetica de produccion de los distintos tipos de toxinas Shiga (Stx1; Stx2c) asociadas a Escherichia coli, en cepas de referencia y aisladas de pacientes con Sindrome Uremico Hemolitico (SUH). Las cepas fueron cultivadas en caldo Penassay e incubadas a 37§ con agitacion (200 rpm), tomandose muestras a distintos tiempos (1,5; 3; 9 y 24 horas) para determinar el crecimiento bacteriano y la citotoxicidad libre y asociada a celulas. Para Stx1, a las 3 horas de incubacion, la relacion entre la concentracion intracelular y la extracelular (ic/ec), estuvo comprendida entre 32 y 200 veces. A las 24 horas, ambas concentraciones se igualaron o (ec) resulto 2 veces mayor, dependiendo de la cepa estudiada. Sin embargo, tanto la actividad citotoxica libre como la asociada a celulas presentaron titulos muy bajos. Esto indico una perdida de actividad durante la fase estacionaria que podria deberse al cese de la sintesis de Stx1 o la accion de enzimas proteoliticas. Para Stx2, a las 3 horas (ic) fue igual o 2 veces superior a (ec), a las 34 horas (ec) fue 16 a 32 veces superior a (ic). Para Stx2c, (ec) aumento logaritmicamente con un rendimiento maximo a las 5 horas, permaneciendo luego constante hasta las 24 horas. En ese tiempo (ic) fue dos veces superior a (ec). El estudio de la cinetica de produccion de Stx por cepas de E. coli aisladas de pacientes con SUH demostro que correspondian al tipo Stx2. Estos resultados fueron confirmados por ensayos de citotoxicidad especifica en celulas Vero y por hibridacion con sondas geneticas. El tipo de Stx es considerado uno de los mayores factores de riesgo en la evolucion a SUH en pacientes infectados con E. coli enterohemorragicos. Por lo tanto, la disminucion de la citotoxicidad de Stx1, durante la fase estacionaria de crecimiento, podria explicar la mayor frecuencia de accion entre SUH y cepas de E. coli productoras de Stx2 en distintos paises, incluyendo Argentina

Identification and characterization of receptor for dengue virus-induced macrophage cytotoxin.

The present study was undertaken to identify the receptor for dengue virus type 2 (DV) induced macrophage cytotoxin (CF2) on mouse peritoneal macrophages (MPhi). The binding of 125I-labelled CF2 to MPhi was saturable (15 nM), reversible, temperature, pH- and time-dependent. The saturation concentration was similar to that causing cell death. Scatchard analysis showed the presence of intermediate type of affinity receptor and the number of receptor sites was 1.1 x 10(6) per cell with dissociation constant of 14.28 nM.

La importancia clínica de Helicobacter pylori y el diagnóstico de laboratorio de las enfermedades que ocasiona al humano / The importance of clinic diagnostic of Helicobacter pylory and diseases cause

H. pylori es una bacteria curva o helicoidal que se establece y multiplica en la mucosa gástrica ÄÄbasándose en algunos de sus diversos factores de patogenicidadÄÄ y, aunque no invade los tejidos, provoca la progresiva degradación de la capa de moco que protege al epitelio estomacal, exponiéndolo a la acción lesiva del ácido clorhídrico, aún cuando éste no alcanza las concentraciones comunes, ya que el microorganismo también afecta a las células parietales (que son las responsables de la liberación del HCI). De esa manera, H. pylori promueve la ocurrencia de las gastritis y las úlceras gástricas, aunque también se acepta que desempeña un importante papel en las úlceras duodenales, e inclusive, se le relaciona con la aparición de adenocarcinoma gástrico. El diagnóstico de laboratorio de las gastritis y las úlcera gástricas contempla métodos invasivos y no invasivos, considerando que, en el caso de los primeros, las muestras apropiadas son las biopsias obtenidas mediante endoscopía, en tanto que, los segundos, se basan en la detección-cuantificativa de anticuerpos séricos anti-H. pylory

Exotoxin profiles of Campylobacters isolated in Malaysia.

Approximately 57% of clinical and 33% of poultry isolates examined produced a cytotoxin. Cytotoxic activity was detected in 25 (50%) isolates of Campylobacter of which 12 were isolated from bloody diarrhea and 9 from watery stools. The cytotoxin titers were low, ranging from 2 to 16. The crude filtrates from 50 Campylobacter isolates showed no cytotoxic effect in Vero cells, no fluid accumulation in suckling mice and no hemolytic activity.

Incidence of Aeromonas isolated from diarrhoeal children and study of some virulence factors in the isolates.

Stool samples from 305 children with diarrhoea and equal number of age and sex matched non-diarrhoeal control children, less than 5 years of age, were examined during the period from Sept 1988 to April 1989. Aeromonas spp. were isolated from 37 (12.1%) diarrhoeal and 05 (1.6%) control cases. Out of 37 diarrhoeal isolates 13 (35.1%) were A. hydrophila, 19 (51.1%) A. sobria and 05 (13.5%) A. caviae. All the isolated strains were tested for haem agglutination property and haemolysin production. Seventeen diarrhoeal and 05 control isolates were tested for cytotoxin production in He La cell line and enterotoxin production in rat ileal loop model and suckling mouse model. Chinese hamster ovary cell (CHO) assay and Gm-1 ELISA methods were also employed. Cytotoxin production was found in 82.5% of diarrhoeal and 40% of control isolates. Haemagglutination was found in 62.1% of Aeromonas isolated from diarrhoeal children and 20% from control children. Enterotoxin production was detected in 58.8% diarrhoeal and none of the control isolates by either of the methods. Of the virulence factors enterotoxin production was found to correlate well with enteropathogenicity but haemolysin, cytotoxin and haemagglutinin did not.

Production of enterotoxin and cytotoxin by aeromonas veronii

Fourteen strains of Aeromonas veronii were isolated from salt and fresh water in Rio de Janeiro and investigated for the presence of birulence factors. Eleven (79%) A. veronii strains were positive for enterotoxin by the suckling-mouse test and thirteen (93%) produced hemolysin. Of the 13 A. veronii strains that produced hemolysin, seven were investigated for cytotoxin production using Vero cells as indicator cells and all of them were positive

Atividades citotóxica e hemolítica em Escherichia coli uropatogênicas / Citotoxic and hemolytic activities of uropathogenic Escherichia coli

Estudamos 59 Escherichia coli uropatogênicas (ECUP) obtidas de pacientes com infecçäo urinária e 30 E. coli originárias das fezes de indivíduos normais. Cada amostra originou-se de um paciente ou controle. Verificamos que 44% e 3,3% respectivamente eram hemolíticas em meio sólido segundo a origem. Apenas 15% das ECUP hemolíticas produziram alfa-hemolisina, isoladamente ou em associaçäo com ß-hemolisina. A alfa-hemolisina correspondeu a 92% das amostras com atividade hemolítica. Näo encontramos correlaçäo entre títulos de alfa-hemolisina e o sítio de origem das ECUP (infecçäo alta ou baixa). Em 71% das ECUP e 30% das E. coli fecais detectamos a produçäo de citotoxina com açäo citocida para linhagens celulares epitelióides como Vero, He-La e Hep-2 e pouco ativa para fibroblastos de embriäo de galinha. A produçäo desta citotoxina näo apresenta correlaçäo com a síntese de hemolisinas. Näo verificamos associaçäo entre títulos citotóxicos e origem das ECUP. Certas características biológicas desta citotoxina como a resposta morfológica que determina nas células, o aumento dos títulos citotóxicos com o tempo, sua atividade citocida irreversível e sua termolabilidade sugerem analogia com a Verotoxina (VT) de E. coli. As células afetadas pela citoxina inicialmente mostram aspecto estrelado, tornam-se arredondadas e finalmente desprendem-se do seu suporte. É sugerido que a produçäo de citotoxina por E. coli aderidas às mucosas do trato urinário possa contribuir para a agressäo ao uroepitélio

Producción de citotoxina tipo shiga (SLT) 1 en cepas de Escherichia coli aisladas de niños con diarrea en una comunidad rural / Production of shiga like toxin (SLT) 1 in strains of Escherichia coli isolated from infants with diarrhoea in arural community

Se estudió la producción de citotoxina tipo shiga-1 (SLT) por la prueba de neutralización descrita por O'Brien y col. en 1,006 cepas de Escherichia coli aisladas de 52 niños con diarrea y de 52 controles apareados por edad, sexo y vecindad, pertenecientes todos a una cohorte de niños rurales, la cual ha sido seguida longitudinalmente durante los primeros dos años de vida a partir del nacimiento. Se buscó la producción de enterotoxinas estable y lábil al calentamiento y la presencia de factores de colonización I, II y E8775 en las mismas bacterias, así como la habilidad para adherirse a células HEp-2 y de aglutinar contra antisueros pertenecientes a los serogrupos enteropatógenos de Escherichia coli, incluyendo 0142 y 0157. Los niños con diarrea presentaron aislamiento significativamente mayor de cepas productoras de citotoxina en cantidades moderadas y altas (p < 0.01). No se encontró relación entre producción de citotoxina y otras características de patogenicidad en cepas aisladas en ambos grupos. El 30% de las bacterias productoras de cantidades moderadas de citotoxina y el 80% de las productoras de cantidades moderadas elevadas pertenecieron al serotipo 0157:H7. En tres niños con diarrea y dos sin diarrea se aislaron cepas productoras de otra citotoxina cuyo efecto no fue neutralizable con un antisuero específico contra SLT-1. Estas cepas han sido confirmadas como productoras de SLT-2. Escherichia coli enterohemorrágica, citotoxina tipo Shiga; diarrea; colitis hemorrágica afebril

Posible producción de dos citotoxinas por una cepa de Escherichia coli / Possible production of 2 cytotoxins by a strain of Escherichia coli

Las citotoxinas VT y "Shiga-like" juegan un papel importante en la diarrea provocada por algunas cepas enteropatógenas de E. coli. Existe confusión acerca de que si estas dos actividades se deben a una sola toxina. Se empleó la cepa H30 de E. coli perteneciente al grupo 026 en la cual se describieron las dos actividades mediante una cinética de crecimiento tomando muestras a diferentes intervalos para observar su correlación con la actividad citotóxica, tanto en sobrenadante de cultivo como en lisado celular, probándola en cultivos de tejidos de células Hela y fibroblastos de ratón. Encontramos que en el sobrenadante la actividad citotóxica aparece en la fase logarítmica de crecimiento, mientras que la actividad en el lisado aparece hasta la fase estacionaria. Pensamos que se trata de dos citotoxinas diferentes producidas por la misma cepa, aunque es necesario profundizar en esta línea de trabajo