Effect of cryoprotectant on the motility, viability, fertilization, and DNA integrity of naleh fish Barbonymus sp. (Cyprinidae) sperm / Efeito do crioprotetor na motilidade, viabilidade, fertilização e integridade do DNA no sêmen de peixes naleh Barbonymus sp. (Cyprinidae)

Naleh fish Barbonymus sp. is a commercial freshwater fish, which is indigenous to Aceh, Indonesia. The population of this species has declined over the years as a result of habitat perturbations and overfishing. Hence, the crucial need to develop a cryopreservation method to support breeding programs. This involved the use of a cryoprotectant as an important component. The objective of this study, therefore, was to explore the best cryoprotectant for naleh fish spermatozoa, and a total of five types were tested. These include the DMSO, Methanol, Ethanol, Glycerol, and Ethylene Glycol at a similar concentration of 10%, which were individually combined with 15% egg yolk, and every treatment was performed in three replications. Conversely, Ringer's solution was adopted as an extender, and the sperm was cryopreserved in liquid nitrogen for 15 days. The results showed significant influence on sperm motility and viability, as well as egg fertility of naleh fish (P <0.05), although the DMSO provided the best outcome, compared to others at 47.17%, 50.13%, and 45.67%, respectively. Furthermore, DNA fragmentation had not occurred in the fresh and cryopreserved sperm samples, indicating the protective effect of tested cryoprotectants. It is concluded that the 10% DMSO and 15% egg yolk is the best cryoprotectant for naleh fish spermatozoa.(AU)

O peixe naleh Barbonymus sp. é um peixe comercial de água doce, originário de Aceh, Indonésia. Durante vários anos, as perturbações provocadas no seu habitat e a pesca predatória determinaram o declínio da sua população, cuja preservação deve apoiar-se em um programa de reprodução controlada, com o emprego de espermatozoides criopreservados. O presente trabalho realizou um estudo comparativo de cinco crioprotetores: dimetilsultóxido, metanol, etanol, glicerol e etileno glicol. Todos os crioprotetores foram testados na concentração de 10%, combinados a 15% de gema de ovo. Cada tratamento foi efetuado em triplicatas. A solução de ringer foi utilizada como extensor e o esperma foi criopreservado em nitrogênio líquido por 15 dias. Os resultados obtidos revelaram a existência de influência significante (P<0,05) na viabilidade e motilidade espermática bem como na fertilidade dos ovos do peixe naleh, em que o dimetilsulfóxido apresentou o melhor resultado com os valores de 47,17%, 50,13% e 45,67%, respectivamente. Por outro lado, a fragmentação do DNA não ocorreu nas amostras de esperma fresco e criopreservado, indicando o efeito protetor dos crioprotetores testados. A conclusão obtida foi que o dimetilsulfóxido e 15% de gema de ovo foram o melhor crioprotetor para os espermatozoides do peixe naleh.(AU)

Freeze-drying of ampicillin solid lipid nanoparticles using mannitol as cryoprotectant

abstract Solid lipid nanoparticles (SLNs) are interesting colloidal drug-delivery systems, since they have all the advantages of the lipid and polymeric nanoparticles. Freeze-drying is a widely used process for improving the stability of SLNs. Cryoprotectants have been used to decrease SLN aggregations during freeze-drying. In this study Ampicillin was chosen to be loaded in a cholesterol carrier with nano size range. To support the stability of SLNs, freeze-drying was done using mannitol. Particle size, drug release profile and antibacterial effects were studied after freeze-drying in comparison with primary SLNs. Preparations with 5% mannitol showed the least particle size enlargement. The average particle size was 150 and 187 nm before and after freeze-drying, respectively. Freeze-drying did not affect the release profile of drug loaded nanopartilces. Also our study showed that lyophilization did not change the antimicrobial effect of ampicillin SLNs. DSC analysis showed probability of chemical interaction between ampicillin and cholesterol.

resumo Nanoparticulas lipídicas sólidas (NLSs) são sistemas coloidais de liberação interessantes, uma vez que reúnem todas as vantagens de nanopartículas lipídicas e poliméricas. A liofilização é um processo amplamente utilizado para melhorar a estabilidade das NLSs e os crioprotetores têm sido usados para diminuir a agregação destas durante esse processo. Neste estudo, a ampicilina foi escolhida para ser encapsulada em um carreador de colesterol de escala nanométrica. Para manter a estabilidade das NLSs, a liofilização foi realizada utilizando-se manitol. O tamanho de partícula, o perfil de liberação do fármaco e os efeitos antibacterianos foram estudados após a liofilização em comparação com a NLSs primária. De acordo com os resultados, as preparações que contêm 5% de manitol mostraram o menor aumento do tamanho de partícula. Os resultados de tamanhos médio foram de 150 e 187 nm antes e depois da liofilização, respectivamente. O perfil de liberação prolongada, bem como o efeito antimicrobiano da ampicilina NLSs não foram alterados após a liofilização. A análise por DSC evidenciou provável interação entre a ampicilina e o colesterol.

Aloe vera na criopreservação do sêmen de tambaqui (Colossoma macropomum) / Aloe vera in the cryopreservation of tambaqui (Colossoma macropomum) sperm

This study aimed to evaluate the extract of Aloe vera (AV) associated or not with 10% Dimethylsulfoxide (DMSO) in cryopreservation of tambaqui semen. For the formation of the pools (n= 14), 30 males were hormonally induced twice. Each pool had the objective motility, curvilinear velocity, straight-line velocity, average path velocity and morphology analyzed before and after cryopreservation of semen. The means for cryopreservation were constituted of Powder Coconut Water-104 diluent added DMSO and/or AV (5 or 10%). After cryopreservation, motility, velocities and morphology were reduced significantly when compared to fresh semen. For sperm motility the best treatment was that using only DMSO (20,86±8,31) and DMSO + 5% AV (15.71±9.77). For the velocities, the worse treatment was DMSO+10% AV. Treatment with only the addition of DMSO had a significantly higher effect than others on percentage of morphologically normal sperm. The mean correlation found was between motilityand the rate of morphologically normal sperm (r = 0.687). In conclusion, the addition of AV does not provide greater protection for spermatozoa during cryopreservation.

Avaliação de crioprotetores na produção de material de referência para enumeração de coliformes em leite em pó a ser utilizado em ensaio de proficiência / Evaluation of cryoprotectants in the production of reference material for coliforms counting in milk powder to be used for proficiency testing

O desafio na produção de materiais de referência (MR) destinados a ensaios microbiológicos é ainstabilidade natural dos micro-organismos. A liofilização é indicada para criopreservação de culturasbacterianas quando o número de células deve ser resguardado. Agentes protetores podem ser adicionadosantes do congelamento para aumentar a estabilidade do material. Neste trabalho foram avaliados oscrioprotetores na produção de MR liofilizados a serem utilizados em ensaio de proficiência para contagemde coliformes. Foram produzidos quatro lotes utilizando-se diferentes crioprotetores: solução de leitedesnatado a 10 % (EC1), a mesma solução contendo glicerol (EC2), sacarose (EC3) e trealose (EC4). Umacepa de Escherichia coli foi empregada no preparo dos materiais. A homogeneidade foi avaliada conforme oProtocolo Internacional Harmonizado. A estabilidade foi estudada durante quatro meses à ≤ -70 ºC (longaduração) e às temperaturas de -20 ºC, 4 ºC, 25 ºC e 35 ºC durante cinco dias (curta duração), segundo aISO/GUIDE 35. Apenas EC1 foi considerado não homogêneo. Os lotes permaneceram estáveis à ≤ -70 ºCdurante quatro meses. EC2 apresentou resultados insatisfatórios na estabilidade de curta duração. EC3 eEC4 foram homogêneos e estáveis nas temperaturas estudadas. A sacarose e a trealose foram consideradascrioprotetores adequados para o preparo do MR em questão.

Effect of freeze drying process on some properties of Streptococcus thermophilus isolated from dairy products

The present investigation represents the effect of freeze drying on some properties as acid and bile tolerance of Streptococcus thermophilus MTCC 1938 culture isolated from dairy products. The cell paste obtained from milk based medium was freeze dried with a pressure of 50-100 mtorr for 24h at -40ºC. Acid and bile tolerance test exhibited 3.8-4.9 and 3.2-3.8 log counts reduction after freeze drying respectively.

Tiempo de supervivencia in vivo y criopreservación de Trypanosoma vivax / In vivo survival time and cryopreservation of Trypanosoma vivax

Uno de los problemas más comunes del trabajo con Trypanosoma vivax, es la supervivencia y criopreservación de este protozoario, lo cual origina pérdida de aislados de campo y errores en exámenes parasitológicos. Se propone evaluar la supervivencia in vivo en condiciones de campo y criopreservación de T. vivax. Para determinar la supervivencia, la sangre se sometió a temperatura ambiente y refrigeración a 4°C, luego se determinó la sobrevivencia en el tiempo. Para el estudio de criopreservación, se emplearon dos crioprotectores de diferente naturaleza química: glicerol 10 por ciento y DMSO 5 por ciento de concentración final. Además, la criopreservación se realizó bajo tres condiciones de almacenamiento en nitrógeno líquido: 1) fase gaseosa 2) líquida y 3) combinación de ambas. Durante la evaluación de la supervivencia, se observó que la sobrevivencia de T. vivax en sangre refrigerada disminuyó significativamente (P<0,01), en comparación con aquellas sometidas a temperatura ambiente. Sin embargo, la sobrevivencia de éstos últimos comienza a disminuir luego de 6 horas, aunque algunos hemoparásitos permanecieron viables hasta 24 horas post-recolección. Para evaluar la criopreservación, al cabo de dos semanas, se descongelaron los crioviales, se determinó la sobrevivencia, resultando negativas las muestras sometidas a congelamiento directo en fase líquida. Los otros dos métodos empleados, resultaron similares (estadísticamente no significativos), el glicerol 10 por ciento resultó con mayor número de parásitos viables. En conclusión, se determinó que, las muestras infectadas con T. vivax deben evaluarse antes de 8 horas post-recolección y mantenerlas a temperatura ambiente. Por otra parte, el congelamiento debe realizarse en primera instancia en fase gaseosa o combinación gaseosa/líquida, empleando glicerol 10 por ciento. Estos resultados, permiten sugerir la mejor metodología a ser empleada para la supervivencia de los parásitos antes de exámenes parasitológicos...

One of the common problems working with Trypanosoma vivax is its survival and cryopreservation, which originates loss of field isolates and parasitological examinations mistakes. The aim of this paper was to study the best methodologies for in vivo survival under field conditions and cryopreservation of the T. vivax. In order to study complete blood survival of T. vivax, two surviving conditions were tested at: room temperature and refrigeration at 4°C. The result shows that surviving in cooled sampled diminished significantly (P<0.01) compare with room temperature. Nevertheless, surviving of room temperature parasite begins to diminish after 6 hours, although some parasites remained viable up to 24 hours post-harvesting. Cryopreservation studies were made under three liquid nitrogen storage conditions: 1) gaseous phase 2) liquid and 3) gaseous/ liquid phase combination (glycerol 10 percent and DMSO 5 percent, were used as cryoprotectants). After two weeks and defrost the survive of T. vivax from cryovials determined. The result show that: a) direct freezing in liquid phase samples were negative and b) the other two methodology were positive and statistically similar, glycerol 10 percent resulted with the greatest number of viable parasites. In conclusion, these results suggest that the best methodologies for conservation under field conditions, were that the samples infected with T. vivax must be evaluated before 8 hours post-harvesting at room temperature and cryopreservation condition of the T. vivax, must be made in gaseous phase or gaseous/liquid phase combination.