RESUMO
SUMMARY The use of a “direct PCR” DNA polymerase enables PCR amplification without any prior DNA purification from blood samples due to the enzyme's resistance to inhibitors present in blood components. Such DNA polymerases are now commercially available. We compared the PCR performance of six direct PCR-type DNA polymerases (KOD FX, Mighty Amp, Hemo KlenTaq, Phusion Blood II, KAPA Blood, and BIOTAQ) in dried blood eluted from a filter paper with TE buffer. GoTaq Flexi was used as a standard DNA polymerase. PCR performance was evaluated by a nested PCR technique for detecting Plasmodium falciparum genomic DNA in the presence of the blood components. Although all six DNA polymerases showed resistance to blood components compared to the standard Taq polymerase, the KOD FX and BIOTAQ DNA polymerases were resistant to inhibitory blood components at concentrations of 40%, and their PCR performance was superior to that of other DNA polymerases. When the reaction mixture contained a mild detergent, only KOD FX DNA polymerase retained the original amount of amplified product. These results indicate that KOD FX DNA polymerase is the most resistant to inhibitory blood components and/or detergents. Thus, KOD FX DNA polymerase could be useful in serological studies to simultaneously detect antibodies and DNA in eluents for antibodies. KOD FX DNA polymerase is thus not limited to use in detecting malaria parasites, but could also be employed to detect other blood-borne pathogens. .
RESUMO O propósito deste estudo foi avaliar 6 polimerases de DNA disponíveis comercialmente que são resistentes aos inibidores do PCR para uma amplificação potencial de DNA de amostras de sangue total. O DNA genômico do parasita humano da malária, Plasmodium falciparum, foi analisado sob condições que incluíram os componentes inibidores do sangue extraído de sangue ressacado em papel de filtro. Nossos resultados sugerem que a polimerase KOD FX DNA é superior a outras polimerases. .
Assuntos
Humanos , DNA de Protozoário/genética , DNA Polimerase Dirigida por DNA/genética , Malária Falciparum/diagnóstico , Plasmodium falciparum/genética , Reação em Cadeia da Polimerase/métodos , DNA de Protozoário/sangue , DNA Polimerase Dirigida por DNA/sangue , Kit de Reagentes para Diagnóstico , Reprodutibilidade dos Testes , Sensibilidade e EspecificidadeRESUMO
A detecçäo do genoma do HBV no soro por hibridizaçäo molecular é o mais sensível e específico marcador da replicaçäo e infectividade do HBV, sendo sua utilizaçäo proposta como técnica rotineira no acompanhamento de doenças relacionadas a este vírus. Comparando diferentes técnicas descritas, anteriormente, escolhemos a deposiçäo direta das amostras séricas sobre a membrana de nitrocelulose sob filtraçäo a vácuo, seguida de banhos desnaturantes e neutralisantes como mais prática e simples, com sensibilidade equivalente. O ensaio da DNA polimerase usando ácido fosfonofórmico como inibidor viral específico mostrou 86.8% de concordância com a detecçäo direta do DNA viral, sendo, portanto, uma alternativa viável no acompanhamento de pacientes com hepatite crônica B. Encontramos 19,2% das amostras AgHBe positivos sem outros marcadores de replicaçäo viral. Por outro lado, nenhuma amostra anti-HBe positiva teve HBV-DNA detectável. discordância entre dois sistemas foi extensamente descrita, e confirmamos pela primeira vez este fato em pacientes com hepatite crônica B em nosso país. Técnicas de biologia molecular säo, portanto, fundamentais na determinaçäo da replicaçäo viral em cada paciente
Assuntos
Humanos , DNA Viral/sangue , Genes Virais , Hepatite B/sangue , Vírus da Hepatite B/genética , Antígenos E da Hepatite B/análise , DNA Polimerase Dirigida por DNA/sangue , Vírus da Hepatite B/fisiologia , Vírus da Hepatite B/imunologia , Replicação ViralRESUMO
A study of Kuala Lumpur blood donors for HBsAG, anti-HBc and DNA polymeraes showed that 5.5% in the sample population was positive for HBsAG, 50.1% for anti-HBc and 10.1% for DNA polymerase activity. There was no significant difference of the HBsAG among the Malay, Chinese and Indian groups. However, a significant difference was observed for the anti-HBc and DNA polymerase activity between the Indian and the Malay/Chinese groups. Both analysis were significantly lower in the Indians but there was no significant difference between the Chinese and the Malays.