Quality control in the different stages of producing red blood cell concentrate from dogs / Controle de qualidade nas diferentes etapas de produção do concentrado de hemácias em cães

The objective of this study was to perform a quality control assessment of red blood cells after standardization of the blood production stages. For this purpose, separation of the blood components to obtain red blood cells, the storage of the blood packets and an evaluation of blood quality were performed. The mean (± SD) volume, globular volume, hemoglobin and hemolysis percentage of the red blood cell concentrate were 299.77±30.08mL, 60.87±2.60%, 20.57±0.93g/DL and 0.09±0.07%, respectively. The means (± SD) of the volume, globular volume, total hemoglobin percentage of hemolysis and hemoglobin per unit of packed red blood cells after the storage period (8.83±6.73 days) were 57.55±3.01%, 20.30±0.89 0, 20±0.12%, and 60.90±7.65. The red blood cell packets were within the parameters of quality control established by Health Ministry legislation in humans and allow us to conclude that the standardization of blood production stages involves the selection of donors until the end of storage and is necessary to produce quality red blood cells. Quality control aims to find possible flaws in the procedures to be repaired, increasing transfusion safety.(AU)

O objetivo deste estudo foi realizar o controle de qualidade do concentrado de hemácias após a padronização das etapas de produção do sangue. Para isso, realizou-se separação de hemocomponentes para obtenção de concentrado de hemácias, armazenamento das bolsas de sangue e avaliação da qualidade delas. Os valores médios (± DP) do volume, do volume globular, da hemoglobina e do percentual de hemólise do concentrado de hemácias foram: 299,77±30,08mL, 60,87±2,60%, 20,57±0,93g/DL e 0,09±0,07%, respectivamente. Os valores médios (± DP) do volume globular, da hemoglobina total percentual de hemólise e da hemoglobina por unidade de concentrado de hemácias após o período de armazenamento (8,83±6,73 dias) foram: 57,55±3,01%, 20,30±0,89 0,20±0,12%, 60,90±7,65. As bolsas de concentrado de hemácias ficaram dentro dos parâmetros de controle de qualidade estabelecidos pela legislação do Ministério da Saúde em humanos e possibilitaram concluir que a padronização das etapas de produção do sangue envolve desde a seleção de doadores até o final do armazenamento e é necessária para produzir concentrado de hemácias com qualidade. O controle de qualidade visa encontrar possíveis falhas nos procedimentos para que estas possam ser reparadas, aumentando, assim, a segurança transfusional.(AU)

Study of erythrocytes as a novel drug carrier for the delivery of artemether

Resealed erythrocytes have been explored in various dimensions of drug delivery, owing to their high biocompatibility and inability to initiate immune response. The present research was designed to evaluate the drug delivery potential of erythrocytes by loading a hydrophobic anti-malarial drug, Artemether. Three different loading techniques were applied to achieve maximum optimized drug loading. A HPLC method was validated for drug quantification in erythrocytes. The relatively high loading was achieved using hypotonic treatment was 31.39% as compared to other two methods. These, drug loaded erythrocytes were characterized for membrane integrity via ESR showing higher ESR values for drug loaded cells as compared to normal cells. Moreover, microscopic evaluation was done to observe morphological changes in erythrocytes after successful loading which showed swollen cells with slight rough surface as compared to smooth surface of normal cells. Drug release was studied for 8 h which showed more than 80% release within 3-7 h from erythrocytes treated with different hypotonic methods. Overall, the study revealed a potential application of erythrocytes in delivery of hydrophobic drugs using hypotonic treatment as compared to other methods.

Avaliação "in vitro" do efeito da infusão de Cunila microcephala Benth sobre a atividade da enzima acetilcolinesterase e biomarcadores de estresse oxidativo em eritrócitos de agricultores / Effect of the Cunila microcephala Benth infusion on the activity of Acetilcolinesterase enzyme and on the biomarkers of oxidative stress in farmers erythrocytes

RESUMO Tivemos como objetivo avaliar o efeito da infusão de Cunila microcephala Benth sobre a atividade da enzima acetilcolinesterase (AChE) e marcadores de estresse oxidativo em eritrócitos de agricultores. Foram utilizadas amostras provenientes de 16 trabalhadores rurais expostos a pesticidas agrícolas pelo período mínimo de 5 anos e um grupo controle constituído de 16 indivíduos não expostos a agrotóxicos. As hemácias dos agricultores e o grupo A foram expostos “in vitro” à solução salina (NaCl 0,9%). Os demais grupos foram expostos à infusão de poejo nas concentrações de 0; 5; 10; 25 e 50 g/L (Grupos B; C; D e E, respectivamente). Em seguida, foram realizadas as determinações da atividade da AChE e dos níveis de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), proteínas carboniladas (PCs) e glutationa reduzida (GSH). Os resultados mostram que a infusão de poejo 50g/L, aumenta a atividade da enzima AChE e os níveis de GSH. Contudo, os níveis de TBARS e PCs diminuíram após o tratamento com a infusão de poejo 25 e 50 g/L. A infusão de poejo, na concentração de 50 g/L, é capaz de reverter, “in vitro” a inibição da atividade da AChE que ocorre pela exposição a pesticidas, e ainda demonstra um importante potencial antioxidante, tendo em vista que diminuiu danos lipídicos e proteicos e ainda, estimulou a produção do principal antioxidante não enzimático endógeno.

ABSTRACT Evaluating the effect of infusion Cunila microcephala Benth on acetylcholinesterase activity (AChE) enzyme and on biomarkers of oxidative stress in farmers erythrocytes. We used samples from 16 rural workers exposed to pesticides for a minimum of five years, and a control group composed of 16 individuals not exposed to pesticides. The erythrocytes of farmers and from group A were exposed “in vitro” the saline solution (NaCl 0,9%). The other groups were exposed to the infusion of “poejo” at concentrations of 0; 5; 10; 25 and 50 g/L (Groups B, C, D and E, respectively). Then, it was realized the analitical determinations of AChE activity and TBARS, PCs and GSH levels. The results showed that “poejo” infusion 50g/L, increased the AChE activity and GSH levels. However, the TBARS e PCs levels decreased after the treatment with “poejo” infusion 25 e 50 g/L. The “poejo” infusion 50 g/L is able to revert “in vitro” the inhibition of AChE activity that occurs by exposure to pesticides and also demonstrates an important antioxidant potential, given that decreased lipid and protein damage and also it stimulated the production of the main non-enzymatic antioxidant endogenous.

Study of the correlation between blood cholinesterases activity, urinary dialkyl phosphates, and the frequency of micronucleated polychromatic erythrocytes in rats exposed to disulfoton

Organophosphates (OPs) are widely used as pesticides, and its urinary metabolites as well as the blood cholinesterases (ChEs) activity have been reported as possible biomarkers for the assessment of this pesticide exposure. Moreover, the OPs can induce mutagenesis, and the bone marrow micronucleus test is an efficient way to assess this chromosomal damage. This paper reports a study carried out to verify the correlation among the disulfoton exposure, blood ChEs activity, urinary diethyl thiophosphate (DETP), and diethyl dithiophosphate (DEDTP), as well as micronucleated polychromatic erythrocytes (MNPCEs) frequency. Four groups of rats (n=12) were exposed to disulfoton at 0, 2.8, 4.7, and 6.6 mg kg-1 body weight. The blood ChEs activity, urinary DETP and DEDTP concentrations, and MNPCEs frequency were determined. It was observed that the plasmatic and erythrocytary ChEs activity decreased from 2.9% to 0.5% and from 35.9 to 3.3%, respectively, when the disulfoton dose was increased from 0 to 6.6 mg kg-1 (correlation of 0.99). Urinary DETP and DEDTP concentrations, as well as the MNPCEs frequency, increased from 0 to 6.58 µg mL-1, from 0 to 0.04 µg mL-1, and from 0 to 1.4%, respectively, when the disulfoton dose was increased from 0 to 6.58 mg kg-1 body weight.

Os organofosforados (OPs) são amplamente usados como praguicidas e a atividade da colinesterase sanguínea bem como os metabólitos urinários desses praguicidas têm sido reportados como biomarcadores eficazes para avaliar casos de exposição. Além disso, os OPs podem induzir mutagênese e o teste de micronúcleo de medula óssea é uma boa alternativa para avaliar os danos cromossômicos. Esse artigo reporta um estudo sobre a correlação entre a exposição a dissulfoton, a atividade da colinesterase sanguínea, a excreção urinária de dietil tiofosfato e dietil ditiofosfato e a frequência de micronúcleos em eritrócitos policromáticos. Quatro grupos de ratos (n=12) foram expostos a dissulfotom nas doses de 0, 2,8, 4,7, e 6,6 mg kg-1 de peso corpóreo. A atividade da colinesterase sanguínea as concentrações urinárias de dietil tiofosfato e dietil ditiofosfato e a frequência de micronúcleos foram determinadas. Os resultados demonstraram que as atividades da colinesterase plasmática e eritrocitária diminuíram de 2,9 para 0,5% e de 35,9 para 3,3% , respectivamente, quando a dose de dissulfoton foi aumentada de 0 para 6,6 mg kg-1 (correlação de 0,99). As concentrações urinárias de dietil tiofosfato e dietil ditiofosfato bem como a frequência de micronúcleos aumentaram de 0 a 6,56 µg mL-1, 0 a 0.04 µg mL-1 e de 0 a 1.4%, respectivamente, quando a dose de dissulfotom foi aumentada de 0 a 6,58 mg kg-1.

Modulation of the oxidative stress in malaria infection by clotrimazole

Antimycotic clotrimazole (CTZ) has demonstrated remarkable activity against Plasmodium falciparum in vitro and in vivo. Hemoglobin degradation by Plasmodium parasites makes amino acids available for protein synthesis, inducing oxidative stress in infected cells and producing free heme. These events represent biochemical targets for potential antimalarials. In this study, we have tested the ability of CTZ to modify the oxidative status in Plasmodium berghei-infected erythrocytes. After hemolysis, activities of superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), glutathione cycle and NADPH+H+-producing dehydrogenases were investigated using UV-visible spectrophotometry. Thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) were evaluated as a marker of lipid damage. Results showed that CTZ significantly decreased the overall activity of 6-phosphagluconate dehydrogenase (6PGD) compared to infected and non-treated cells; consequently, the glutathione cycle was inhibited, leaving the parasite vulnerable to the oxidative stress originating from hemoglobin degradation. As a compensatory response, CTZ prevented some loss of SOD and CAT activities in infected cells. The infection triggered lipid peroxidation in erythrocytes, which was decreased by CTZ. These results suggest the presence of a redox unbalance in cells treated with CTZ, discussing a possible effect of this compound disturbing the oxidative status in a Plasmodium berghei-infection.

O antifúngico clotrimazol (CTZ) tem demonstrado notável atividade contra Plasmodium falciparum. A degradação da hemoglobina por Plasmodium para a obtenção dos aminoácidos necessários à síntese protéica induz estresse oxidativo em eritrócitos devido à liberação de hemos oxidantes. Estes eventos representam alvos bioquímicos para a produção de antimaláricos potenciais. Neste estudo, testamos a capacidade do CTZ para modificar o estado oxidativo em eritrócitos infectados com Plasmodium berghei. Depois da hemólise, as atividades da superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT), desidrogenases produtoras de NADPH+H+ e do ciclo de glutationa (GSH) foram investigados. A produção das espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) foi avaliada como marcador de dano lipídico. Os resultados mostraram que o CTZ diminuiu a atividade da 6-fosfogliconato desidrogenase (6PGD), em comparação com eritrócitos infectados e não tratados. Consequentemente, o ciclo da GSH foi inibido, tornando os parasitas vulneráveis ao estresse oxidativo resultante da degradação da hemoglobina. Como resposta compensatória, CTZ impediu a perda de atividade da SOD e CAT nas células infectadas. A infecção induz peroxidação lipídica nos eritrócitos, sendo esta diminuída pelo CTZ. Estes resultados sugerem a existência de desequilíbrio redox nas células tratadas com CTZ, interferindo, assim, com o estado oxidativo verificado durante a infecção malárica.

Ginkgo biloba extract (EGb 761) attenuates oxidative stress induction in erythrocytes of sickle cell disease patients

Sickle cell disease promotes hemolytic anemia and occlusion of small blood vessels due to the presence of high concentrations of hemoglobin S, resulting in increased production of reactive oxygen species and decreased antioxidant defense capacity. The aim of this study was to evaluate the protective action of a standardized extract of Ginkgo biloba (EGb 761), selected due to its high content of flavonoids and terpenoids, in erythrocytes of patients with sickle cell anemia (HbSS, SS erythrocytes) subjected to oxidative stress using tert-butylhydroperoxide or 2,2-azobis-(amidinepropane)-dihydrochloride, in vitro. Hemolysis indexes, reduced glutathione, methemoglobin concentrations, lipid peroxidation, and intracellular reactive oxygen species were determined. SS erythrocytes displayed increased rates of oxidation of hemoglobin and membrane lipid peroxidation compared to normal erythrocytes (HbAA, AA erythrocytes), and the concentration of EGb 761 necessary to achieve the same antioxidant effect in SS erythrocytes was at least two times higher than in normal ones, inhibiting the formation of intracellular reactive oxygen species (IC50 of 13.6 µg/mL), partially preventing lipid peroxidation (IC50 of 242.5 µg/mL) and preventing hemolysis (IC50 of 10.5 µg/mL). Thus, EGb 761 has a beneficial effect on the oxidative status of SS erythrocytes. Moreover, EGb 761 failed to prevent oxidation of hemoglobin and reduced glutathione at the concentrations examined.

A doença falciforme promove anemia hemolítica e oclusão dos pequenos vasos, causados pela presença de altas concentrações de hemoglobina S, cujas consequências incluem a produção aumentada de espécies reativas de oxigênio e diminuição da capacidade de defesa antioxidante. O objetivo desse estudo foi avaliar a ação protetora de um extrato padronizado de Ginkgo biloba (EGb 761), selecionado devido ao seu alto conteúdo de flavonóides e terpenóides, em eritrócitos de pacientes com anemia falciforme (HbSS, eritrócitos SS) submetidos ao estresse oxidativo usando terc-butil-hidroperóxido e 2,2-azobis-(amidinopropano)-diidrocloreto, in vitro. Índices de hemólise, glutationa reduzida, concentração de metemoglobina, peroxidação lipídica e espécies reativas de oxigênio foram determinados. Eritrócitos de pacientes com anemia falciforme apresentaram taxas aumentadas de oxidação da hemoglobina e peroxidação lipídica e a concentração de EGb 761 necessária para atingir o mesmo efeito antioxidante foi pelo menos duas vezes maior em relação aos eritrócitos normais (HbAA, eritrócitos AA), inibindo a formação de espécies reativas de oxigênio (IC50 de 13.6 µg/mL), prevenindo parcialmente a peroxidação lipídica (IC50 de 242.5 µg/mL) e prevenindo a hemólise (IC50 de 10.5 µg/mL). Portanto, EGb 761 possui um efeito benéfico no estado oxidativo dos eritrócitos SS. Entretanto, o EGb 761 não preveniu a oxidação da hemoglobina e da glutationa reduzida, nas concentrações examinadas.

Utilidad clínica del extendido de sangre periférica: los eritrocitos / Extended clinical utility of peripheral blood: red blood cells

A pesar de los grandes avances tecnológicos relacionados con el hemograma, y en particular los derivados de los autoanalizadores de hematología, cada vez más sofisticados y completos, el extendido de sangre periférica continúa siendo el “estándar de oro” del diagnóstico de hematología. De acuerdo con las buenas prácticas de hematología, el extendido de sangre periférica está indicado en todos los hemogramas que muestren alguna desviación en los recuentos directos, indirectos o calculados, o cuando se sospeche clínicamente de una enfermedad de origen hematológico o de origen no hematológico con manifestaciones hematológicas, aun con parámetros entre rangos esperados para la edad y el género. En el extendido de sangre periférica es posible observar alteraciones relacionadas con la morfología de los eritrocitos, leucocitos y las plaquetas. En este módulo se analizarán los aspectos más importantes de la morfología de los eritrocitos, teniendo en cuenta las interacciones entre ellos como el fenómeno de rouleaux y la hemaglutinación, y los conceptos de anisocitosis, poiquilocitosis, anisocromasia y dimorfismo; variaciones en el tamaño, en particular la macrocitosis y la microcitosis; variaciones en la forma de los eritrocitos tales como los dianocitos, estomatocitos, dacriocitos, drepanocitos, ovalocitos, esferocitos, células en champiñón, células espiculadas, queratocitos y esquistocitos; inclusiones eritrocitarias como eritroblastos circulantes, punteado basófilo, cuerpos de Howell-Jolly; y variaciones de la hemoglobina, en particular la hipocromía y la policromatofilia. Se analizan con detalle las características específicas de cada uno de los elementos y se hace una correlación clínica con las enfermedades asociadas. Este primer módulo, dedicado al análisis de la morfología de los eritrocitos en el extendido de sangre periférica, provee al profesional de laboratorio elementos que le permiten identificar adecuadamente las diferentes alteraciones de los eritrocitos, en tanto que al médico le proporciona información para que relacione los hallazgos en la morfología de estas células con la clínica.

La senescencia del Eritrocito humano y su relación con el trasporte de calcio y potasio / The senesces of human erythrocyte ant its relation with Calcium and Potassium transport

Los eritrocitos humanos poseen una vida media de 120 días, y es ampliamente aceptado que su concentración de Ca2+ aumenta con el proceso de la senescencia. El control de este mecanismo es desconocido en estas células no nucleadas. Así, la investigación en busca del reloj biológico de estas células tiene más de cuarenta años y se ha propuesto que los cambios cíclicos asociados al paso por el lecho capilar son buenos candidatos, en especial el estrés mecánico que se genera sobre sus membranas. En este ensayo se rediscuten antiguos datos de otros investigadores y resultados de nuestro laboratorio al respecto de dos nuevos mecanismos de transporte, que permiten una reinterpretación de la hipótesis del reloj biológico. Así, proponemos una nueva hipótesis en la que se plantea que es el potasio y no el calcio y sus permeabilidades, el factor principal que guía el proceso de senescencia.

Human erythrocyte has a mean life time of 120 days, and it is generally accepted that Ca2+ concentration rice withthe senesces process. The control of this mechanism it is not known in these non nucleated cells. The search for a mechanism beneath the biological clock of erythrocytes has more than forty years. It has been proposed that cyclic changes because of the pass thru the capillary can be involved, specially the mechanical stress on the membrane. Here we revisited data from other researchers and from our laboratory regarding two novels transport mechanisms, which permits a reinterpretation of the biological clock. We propose a novel hypothesis in which is potassium instead of calcium and there permeability, the one who leads the senescence process.

A influência do tratamento periodontal não cirúrgico sobre células sangüíneas, perfil lipídico e glicemia de pacientes portadores de periodontite crônica / The influence of non-surgical periodontal treatment over the elements of the blood, lipidic profile and glycemia of patients suffering from chronic periodontitis

O objetivo do presente estudo foi verificar se o tratamento periodontal não cirúrgico exercia influência sobre os elementos celulares do sangue, perfil lipídico e glicose de pacientes com periodontite crônica. Dez pacientes (49,7 ± 8,8 anos) foram submetidos, previamente ao tratamento periodontal e, trinta dias após o mesmo, à coleta de 10ml de sangue periférico, através dos quais foram avaliados elementos celulares das séries branca e vermelha, número de plaquetas, VHS, lipidograma e glicose. Os parâmetros clínicos utilizados foram: Índice de Placa (IP) de Silness e L÷e (1964), Índice Gengival (IG) de Loe (1967), Sangramento à Sondagem (SS), Profundidade de Bolsa à Sondagem (PBS) e Nível de Inserção à Sondagem (NI). Trinta dias após a conclusão do tratamento periodontal não cirúrgico, foi realizada reavaliação e constatada melhora significativa (P<0,001) de todos os parâmetros clínicos supracitados. A hemoglobina (P=0,03) e a glicose (P=0,02) sofreram redução significativa, enquanto o número de hemácias (P=0,06) e o hematócrito (P=0,08), apesar de reduzidos, não sofreram mudanças estatisticamente significativas. O colesterol total e o LDL apresentaram aumento, porém não significativo, após o tratamento (P=0,09 e P=0,06, respectivamente), enquanto os demais parâmetros não sofreram alterações significativas (P>0,1). Através destes resultados, concluiu-se que o tratamento periodontal não cirúrgico foi bem sucedido no controle da periodontite crônica, e que, após o mesmo, a hemoglobina e a glicose sofreram redução estatisticamente significativa, as hemßcias e o hematócrito apresentaram uma tendência à redução e o colesterol total e o LDL, uma tendência ao aumento.

Frecuencia de la variante aint del antígeno A / Frecuency of aint antigen

Se definen como A intermedio (Aint) los hematíes que comparten caracteres con A1 y A2. Existen diferencias cualitativas y cuantitativas en los epitopes A. Los hematíes A, son aglutinados por la lectina de Dolichus biflorus (anti-A1), los A2 por la lectina Ulex europaeus (anti-H), en tanto los hematíes Aint son variablemente aglutinados por ambas de manera inesperada. Se realizó una búsqueda de individuos Aint en una población hospitalaria de acuerdo con la reacción con las lectinas mencionadas evaluando el proceso de aglutinación producida mediante una técnica cinética. Se caracterizó la actividad aglutinante de la lectina de Amaranthus hypochondriacus (específica para N-acetil-D-galactosamina) antes y después de la incubación con saliva A y frente a eritrocitos A1, Aint y A2. Se estudiaron 458 muestras, resultando 242 O (52,8 por ciento), 170 A (37,1 por ciento), 38 B (8,3 por ciento), 5 A1B (1,1 por ciento) y 3 A2B (0,7 por ciento). Las muestras A se subdividieron en 138 A1 (81,2 por ciento), 23 A2 (13,5 por ciento) y 9 Aint (5,3 por ciento). La comparación de las curvas de cinética obtenidos permite diferenciar los hematíes de grupos A1, Aint y A2. Nuestros resultados concuerdan con observaciones previas sobre la marcada heterogeneidad de los hematíes Aint. El reconocimiento de variantes débiles del grupo A reviste importancia cuando se presentan reacciones transfusionales hemolíticas y en la práctica forense. Este estudio es relevante, en inmunogenética poblacional, por su contribución al conocimiento del mestizaje con poblaciones negras.

Prevalencia de anticuerpos antieritrocitos y su importancia clínica en 17960 pacientes Banco de Sangre / Prevalence of antierythrocytes antibodies and its clinical importance in 17960 patients, blood bank

El objetivo del presente trabajo fue el de conocer la prevalencia de anticuerpos antieritrocitos en 17960 muestras estudiadas en el Banco de Sangre del Hospital Calderón Guardia así como su significado clínico. Se encontró que el 1.1 por ciento (n=200) tienen anticuerpos a grupos sanguíneos, de estos el 94 por ciento (n=188) se identificaron y en el 6 por ciento (n=12) no se pudo concluir nada con la metodología utilizada. De el 94 por ciento que equivale a 188 casos de los cuales el 73 por ciento tienen importancia clínica (n=137) y el 27 por ciento (n=51) no tienen importancia clínica. La frecuencia con que se encontraron los diferentes sistemas de grupos sanguíneos fue: Rh-hr, I, Kell Lewis, Duffy, Kidd, MNSs, Lutheran y P. Se encontró una prevalencia de anticuerpos clínicamente significativos de 0.8 por ciento de los 17960 pacientes estudiados con la siguiente especificidad : 26 por ciento para el anti D, Anti E 19 por ciento, anti c 13 por ciento, anti K 12 por ciento, anti Fya 8 por ciento, anti Jka 7 por ciento, anti C y anti e con un 5 por ciento cada uno, anti S 3 por ciento, anti s 1 por ciento, anti Lu un 0.3 por ciento. Los anticuerpos sin importancia clínica con 0.28 por ciento de prevalencia e identificados en el siguiente orden anti I un 83 por ciento, Lea 14 por ciento, Leb, M y P con 1 por ciento para cada uno

El proceso de calcificación en la placenta humana / The process of calcification in human placental

Con el propósito de conocer el inicio del proceso de la calcificación placentaria y su evolución fueron analizadas con microscopía electrónica de transmisión, histoquímica de v.Kossa para calcio y microscopía electrónica de barrido muestras de placa basal procedentes de embarazo prolongado. Vesícula de matríz no fueron vistas. Densos agregados de minerales parecen fusionarse y formar gránulos cada vez mayores en la degeneración fibrinoide intracelular del sincitio, en células de placa basal, matríz extracelular, estroma vellositario y barrera placentaria. Glóbulos rojos, fibrina, fibrinoide y colágena son posibles núcleadores de cristales de hidroxiapatita. Gránulos que crecen para formar pequeños filamentos, barras y cuerpos tridimencionales irregulares, se ocacionan unos a otros por aposión para formar depósitos minerales en cualquier lugar de la placa basal. Vellosidades que se impregnan uniformemente de estos depósitos se fusionan y forman áreas de infartación calcificada. En conclusión, los resultados presentan imágenes del inicio y desarrollo de la calcificación distrófica