Detecçäo de progenitores hemopoiéticos eritróides (BFU-E e CFU-E) em medula óssea, sangue de cordäo umbilical e sangue periférico usando rh-EPO / Detection of erythroid haemopoietic progenitors (BFU-E and CFU-E) in bone marrow, peripheral blood, and umbilical-cord blood using rh-EPO

A detecçäo de progenitores hemopoiéticos da linhagem eritróide, BFU-E e CFU-E, envolveu a cultura de células mononucleares hemopoiéticas obtidas de medula óssea, sangue periférico e sangue de cordäo umbilical em meio de IMDM, suplementado com antibióticos, soro bovino fetal 25 porcento, soroalbumina bovina 1 porcento, meio condicionado da linhagem celular 5637 (como fonte exogena de fatores de crescimento) 1 porcento e adiçäo de eritropoietina humana recombinante em matriz semi-sólida (metilcelulose). Usando-se a técnica, populaçöes distintas de células progenitoras de linhagem eritróide puderam ser detectadas e definidas em sua linhagem pela capacidade de orientar colônias de aspecto característico, após um período de incubaçäo de 14-20 dias, à 37§C, em atmosfera úmida, com 5-19 porcento de CO2. Os tipos de colônias de BFU-E e CFU-E observados foram de tamanho variado, apresentado coloraçäo vermelha em tons variáveis. Células hemopoiéticas constituintes da linhagem eritróide, em diferentes graus de maturaçäo, foram morfologicamente identificadas após coloraçäo panóptica. A frequência de colônias de BFU-E e CFU-E observada, em nossos estudos foram, respectivamente: 33 mais ou menos 4,4 e 30,3 mais ou menos 5,4 para medula óssea; 12,7 mais ou menos 4,3 e 9,3 e 9,3 mais ou menos 1,5 para sangue periférico; 26,6 mais ou menos 8,7 e 25,6 mais ou menos 11 para sangue de cordäo umbilical

A simple method for concentrating erythropoietin activity in plasma and in other body fluids

El método aquí descripto se basa en la propiedad de la eritropoyetina de permanecer en solución acuosa en presencia de hasta 60% de etanol. En este proceso las proteínas inertes precipitan y pueden ser eliminadas sin pérdidas significativas de la actividad. El agregado de éter sulfúrico produce la separación de la fase acuosa y de sus solutos, los que se recogen con el material sólido obtenido por liofilización de aquélla. Con esta metodología se puede detectar una marcada actividad en los extractos obtenidos del plasma de ratones después de una moderada reducción del hematocrito