Expression of anti-Z-DNA single chain antibody variable fragment on the filamentous phage surface

We describe the expression of an anti-Z-DNA single chain variable region antibody fragment (scFv) on a filamentous phage surface. Four vectors for phage display were constructed. Two of them are able to display multiple copies of the antibody fragment, and the others can be used to make monovalent libraries. The vectors use different promoter/leader sequences to direct the expression of the fused proteins. All were able to promote the assembly of fusion virion particles. In this paper we also show the affinity selection (biopanning) of those phage-antibodies based on the capacity of their products to recognize the antigen. We used biotinylated Z-DNA and the selection was performed in a solution phase fashion. The data presented here indicate that these vectors can be further used to construct anti-nucleic acid antibody fragment libraries that can be used to study the basis of nucleic acid-protein interaction and its role in autoimmunity mechanisms.

Influência do pH na atividade hemolítica de uma amostra aviária de vírus influnza A / Influence of pH on hemolytic activity of an avian sample of influenza a virus

A atividade de fusäo, depende de pH, de uma amostra aviária de Vírus Influenza A com eritrócitos de galinhas, foi investigada usando oteste de hemólise (HL). Este teste é baseado na quantificaçäo de hemoglobina (Hb) liberada como consequência da fusäo vírus/eritrócito. A atividade hemolítica desta preparaçäo viral pode ser demonstrada na faixa de pH ácido (5.0-5.8), o que está relacionado à ocorrência de uma mudança conformacional nas moléculasda hemaglutinina (HA) sob estas condiçöes. A atividade fusogênica era rapidamente inativada após incubaçäo do vírus, em pH ácido, a 37 graus C, na ausência de eritrócitos, sugerindo que a mudança conformacional da HA do vírus pode ser responsável pela ativaçäo e/ou inativaçäo da capacidade fusogênica. O estudo da reaçäo de HL mostra que elevando-se a concentraçäo de eritrócitos, enquanto a concentraçäo de vírus permanece constante, pode-se observar um aumento na liberaçäo de hemoglobina (Hb), o qual sugere que, provavelmente, os vírus tiveram a chance de encontrar um maior número de células susceptíveis. Uma vez que a Hb em soluçäo muda de tonalidade em funçäo do pH em que se encontra, um fator de correçäo foi utilizado após o ensaio colorimétrico.