Spatiotemporally differential expression of HER (human epithelial growth factor receptor)-2 with sexual dimorphism in submandibular gland of mice

SUMMARY: Considering that the submandibular gland (SMG) of postnatal mice performs active cell proliferation, apoptosis and differentiation which are regulated by proto-oncogene products in cancerous cells, the expression and localization of a proto-oncogene product HER (human epidermal growth factor receptor)-2 was examined in SMG of postnatal mice. In Western blot analysis, the expression for HER-2 was high until pre-puberty, and it decreased from puberty to young adult stages with male SMG more dominant. In immunohistochemistry, the immunoreactivity was positive in acinar and ductal cells of newborn SMG with distinct localization at the intercellular apposition sites. The immunoreactivity in acinar cells progressively decreased to negligible levels by pre-pubertal stage, while it remained positive in most ductal cells throughout the postnatal time-course. The immunoreactivity in cells of terminal tubules and intercalated ducts, both of which have a high potential to produce cells, were seen at levels similar to those of more proximal ducts, while the immunoreactivity in ductal basal cells was significantly high, but the granular convoluted tubule cells were seen at negligible levels in male and at faint levels in female. In immuno-electron microscopy of excretory ducts, the immunoreactivity was dominantly localized on the basal infolding membranes as well as vesicles and vacuoles of various sizes, but rarely in Golgi apparatus and mitochondria. The immunoreactivity without association to any membranous structures were also seen, though not numerous. The relation of expression levels of HER-2 in various portions of normal SMG to those in their cancerous ones is briefly discussed.

RESUMEN: Considerando que la glándula submandibular (GSM) de ratones postnatales realiza la proliferación celular activa, apoptosis y diferenciación que están reguladas por productos protooncogénicos en células cancerosas, la expresión y localización de un producto protooncogénico HER (receptor del factor de crecimiento epidérmico humano) - 2 se examinó en GSM de estos ratones. En el análisis de Western blot, la expresión de HER-2 fue alta hasta la prepubertad, y disminuyó desde la pubertad hasta las etapas de adultos jóvenes con GSM macho más dominante. En inmunohistoquímica, la inmunorreactividad fue positiva en las células acinares y ductales de GSM de recién nacido con una localización distinta en los sitios de aposición intercelular. La inmunorreactividad en las células acinares disminuyó progresivamente a niveles insignificantes en la etapa prepuberal, mientras que permaneció positiva en la mayoría de las células ductales durante el transcurso del tiempo posnatal. La inmunorreactividad en las células de los túbulos terminales y los conductos intercalados, los cuales tienen un alto potencial para producir células, se obser- vó a niveles similares a los de los conductos más proximales, mientras que la inmunorreactividad en las células basales ductales fue significativamente alta, pero en el túbulo contorneado granular las células se observaron en niveles insignificantes en los machos y en niveles débiles en las hembras. En la microscopía inmunoelectrónica de los conductos excretores, la inmunorreactividad se localizó de manera predominante en las membranas de pliegues basales, así como en vesículas y vacuolas de varios tamaños, pero raramente en el aparato de Golgi y en las mitocondrias. También se observó la inmunorreactividad sin asociación a ninguna estructura membranosa, aunque no numerosa. Se discute brevemente la relación de los niveles de expresión de HER-2 en varias porciones de GSM normal con aquellos en sus cancerosos.

Localization of vesicular inhibitory amino acid transporter (VIAAT) in the submandibular salivary gland throughout the postnatal development of mice / Localización del transportador vesicular de aminoácidos inhibidores (VIAAT) en la glándula salival submandibular durante el desarrollo postnatal de ratones

According to recent studies, it is highly possible that the occurrence of vesicular inhibitory amino acid transporter (VIAAT) is a good marker of GABA-signaling not only in the brain, but also in extra-brain tissue cells containing GABA and GAD. In view of this, the present study was attempted to localize VIAAT-immunoreactivity in the submandibular gland of mice. In the present study, the submandibular glands of male mice at various postnatal developmental stages were examined for detailed localization of VIAAT-immunoreactivity in immunohistochemistry at light microscopic level. The immunoreactivity for VIAAT was localized in epithelial cells of proximal and distal excretory ducts with the striated portion more intensely immunopositive at young postnatal stages. No significant immunoreactivity was seen in the acinar cells throughout the postnatal development. In addition, the immunoreactivity for VIAAT was detected in the salivary parasympathetic ganglionic neurons, but not in any nerve fibers surrounding the glandular cells. Furthermore, VIAAT-immunoreactivity was found in smooth muscle cells forming the outermost layer of intralobular arterioles. From the present findings, it is possible that GABA plays roles as paracrine and autocrine regulators in the saliva secretion as well as the gland development.

Según estudios recientes, es altamente posible que la aparición del transportador vesicular de aminoácidos inhibidores (VIAAT) sea un buen marcador de señalización de GABA no sólo en el cerebro, sino también en células de tejido extra-cerebrales que contienen GABA y GAD. En el presente estudio se intentó localizar inmunoreactividad a VIAAT en la glándula submandibular de ratones. En el presente estudio, se examinaron las glándulas submandibulares de ratones machos en las distintas etapas del desarrollo postnatal para la localización detallada de inmunoreactividad a VIAAT inmunohistoquímicamente a nivel de microscopía óptica. La inmunorreactividad para VIAAT se localizó en las células epiteliales de los conductos excretores proximal y distal, con mayor intensidad en la porción estriada en las etapas tempranas. No se observó inmunoreactividad significativa en las células acinares durante el desarrollo postnatal. Además, se detectó la inmunoreactividad para VIAAT en las neuronas ganglionares parasimpáticas salivales, pero no en las fibras nerviosas que rodean las células glandulares. Además, la inmunoreactividad a VIAAT se encuentra en las células del músculo liso que forman la capa más externa de las arterias interlobulillares. En base a estos hallazgos, es posible que GABA tenga una función como regulador autocrino y paraparacrino en la secreción de saliva, así como en el desarrollo de la glándula.

O efeito da dieta alcoólica sobre o desenvolvimento da glândula submandibular de Rattus novergicus é definitivo? / The effect of alcohol diet in the development of the submandibular gland of Rattus novergicus is definitive?

O álcool é uma das drogas mais comuns na sociedade em geral e pode provocar alterações morfológicas em diferen-tes tecidos. O objetivo deste trabalho foi observar, por meio da morfometria, se o álcool altera o desenvolvimento da glândula submandibular dos ratos e se esta alteração é definitiva. Para isso foram utilizados três grupos (n=10): grupo controle (GC), os animais receberam água e ração “ad libitum”; grupo alcoolizado (GA) receberam uma mistura de água e álcool numa concentração de 25%; e grupo isocalórico (GI), receberam uma solução de água e sacarose, com a mesma quantidade de calorias que os animais do grupo alcoolizado. Após 120 dias, cinco animais de cada grupo foram sacrificados. Os animais restantes passaram a receber apenas uma dieta de água e ração e os novos grupos formados passaram a ser denominados de: grupo controle1 (GC1), grupo desintoxicado (GD) e grupo antigo isocalórico (GAI). Os animais destes grupos foram sacrificados 120 dias após este novo tratamento. Os animais sacrificados tiveram suas glândulas submandibulares removidas bilateralmente para análise morfométrica. Utilizando-se de paquímetro digital as medidas foram devidamente tomadas e submetidas à análise estatística. Os resultados mostraram que o consumo de álcool produz um crescimento menor nas glândulas submandibulares no período de alcoolização e um aumento após o período de desintoxicação alcoólica. Baseado nestes resultados pode-se concluir que o álcool altera o desenvolvimento das glândulas salivares de ratos, mas esta alteração não é definitiva, se o animal for submetido a um período de desin-toxiação alcoólica.

Allometric analysis of the postnatal growth of rat submandibular gland

The rat submandibular gland grows significantly during the first 10 weeks of postnatal life. During this growth, there is differentiation and maturation of the definitive glandular structures, (acini, intercalated ducts, convoluted granular tubules, striated ducts and excretory ducts) within a highly vascularized stroma. In this study, the absolute volume of each glandular component during postnatal development was determined morphometrically. The increases in gland mass and component volumes were analyzed allometrically relative to the growth of body mass, using Wald’s non-parametric method. The allometric growth of gland mass was monophasic and negative (k<1), with k = 0.86. The absolute volumes of the acini plus terminal tubules, intercalated ducts, striated ducts and excretory ducts all showed a biphasic pattern, with the first phase occuring from day 2 to day 28 and the second phase from day 28 to day 96. In the first phase, all of the structures showed positive allometric growth (k>1), with k values from 1.09, 1.15, 1.49 and 1.17, for the acini plus terminal tubules, intercalated ducts, striated ducts and excretory ducts, respectively, while in the second phase, all showed negative allometrtic growth (k<1), with k values of 0.72, 0.33, 0.77 and 0.82, respectively. The convoluted granular tubules showed a single phase of positive allometric growth (k>1) between 28 and 96 days of age, with k=1.28, whereas the stromal volume showed negative allometric growth (k<1) from day 14 to day 96, with k=0.77.

Efectos de la administración prenatal de cafeína sobre la glándula submandibular de fetos de rata / Effects of the prenatal administration of caffeine on the submandibular gland of rat fetuses

Fueron estudiados los efectos de una inyección intraperitoneal única de cafeína (10 mg/kg de peso corporal) en el 10 día de preñez sobre el feto de rata, en especial sobre la glándula submandibular. Al examen microscópico fueron observadas glándulas submandibulares inmaduras, constituidas por cordones sólidos y brotes terminales, en los fetos pertenecientes al grupo tratado. Morfométricamente fue verificado aumento del tamaño nuclear en las células de los acinos y de los conductos glandulares en los fetos del grupo inyectado. Los volúmenes relativos ocupados por los conductos y por el tejido conjuntivo fueron significativamente mayores en las glándulas submandibulares del grupo inyectado. No hubo diferencias significativas entre ambos grupos, en el diámetro medio de los acinos y de los conductos, mientras que el espesor del epitelio acinar fue menor en el grupo tratado. El aumento significativo del volumen relativo de los conductos en los fetos del grupo tratado, a pesar de poseer diámetros similares en ambos grupos, se debe, seguramente, a un aumento en el número de los conductos de las glándulas submandibulares en los fetos de las ratas inyectadas con cafeína en el 10 día de preñez.

Modificaçöes na populaçäo de células e no volume absoluto de estroma de glândulas submandibulares de rato durante o desenvolvimento / Changes in the cell population and in the absolute volume of the stroma of rat submandibular glands during postnatal development

As mudanças que ocorrem no parênquima de um orgäo epitelial durante o seu desenvolvimento ontogenético säo controladas pela sua interaçäo com seu estroma de origem mesenquimal. O objetivo do atual trabalho foi o de avaliar uma possível relaçäo na evoluçäo do volume absoluto e no número de células do estroma e do parênquima da glândula submandibular do rato durante o desenvolvimento pós-natal. No período de 2 a 70 dias de idade, a massa glandular aumentou 1822 por cento, às custas de um marcante crescimento de 3593 por cento e de 1211 por cento, respectivamente, no volume absoluto do parênquima e do estroma. Por outro lado, o número de células nos mesmos compartimentos aumentou, respectivamente, 1033 por cento e 1203 por cento. Esses resultados indicaram que o aumento no volume celular individual das células epiteliais também tem papel importante no crescimento do volume do parênquima, e que no estroma, ocorreu proporcionalidade entre o crescimento do número de células e de matriz extracelular. A relaçäo volume do estroma/volume do parênquima diminuiu nos períodos, respectivamente, de 2 a 28 e 35 a 70 dias, e manteve-se estável no período de 28 a 35 dias devido exclusivamente ao aumento no número de células do estroma e exibiu estabilidade nos demais períodos. Convém salientar, que é nesse período de 28 a 35 dias, que ocorre o grande processo de transformaçäo de células dos ductos estriados em células secretoras serosas dos ductos granulosos, o que caracteriza o início da fase ductal do desenvolviemnto pós-natal da glândula submandibular do rato. As mudanças detectadas no estroma nesse período podem estar relacionados a este fato

Reversibilidade dos efeitos da progesterona na glândula submandibular do camundongo fêmea: estudo histológico e histoquímico / Reversibility of the effects of progesterone on the submandibular gland of female mice: histological and histochemical study

Os ductos granulosos das glândulas submandibulares do camundongo apresentam evidente dimorfismo sexual, sendo mais numerosos e desenvolvidos no macho. Na fêmea, tais estruturas säo masculinizadas pela açäo de vários hormônios, dentre eles a progesterona. Mostrou-se no presente trabalho que esta estimulaçäo é reversível e ocorre 60 dias após cessada a aplicaçäo da progesterona

Estudo morfométrico do crescimento de glândulas submandibulares de ratos tratados com isoproterenol. II. Modificaçöes no comportamento dos ductos granulosos / Morphometric study of the rat submandibular glands enlargement induced by isoproterenol. II. Changes in the convoluted granular tubule compartment

Estudou-se através de métodos estereológicos ao microscópio óptico, as modificaçöes que ocorrem no compartimento dos ductos granulosos de glândulas submandibulares de ratos induzidos ao crescimento por injeçöes de cloridrato de isoproterenol por 14 dias. A análise dos resultados obtidos mostrou que as dimensöes morfométricas absolutas do sistema de ductos granulosos, praticamente näo se modificaram durante todo o período de crescimento glandular induzido pelo isoproterenol, assim o seu volume total, o volume celular médio, o número total de células e o comprimento total, mantiveram-se ao redor, respectivamente, de 39mmü, 972µmü, 34x10(6) células e 86m. As únicas dimensöes morfométricas que exibiram modificaçöes estatisticamente significativas foram a sua densidade de volume na glândula e o seu diâmetro externo, ambas no intervalo de 0 a 3 dias de tratamento, quando decresceram, respectivamente, de 48 por cento e 21 por cento. Desse modo, os resultados mostraram que as células serosas dos ductos granulosos, ao contrário das células acinosas, näo exibem o efeito sialadenotrófico quando submetido a tratamento crônico com isoproterenol

Estudos estereológico do crescimento de glândulas submandibulares de ratos induzido pelo isoproterenol. I. Modificaçöes no comportamento acinar / Stereological study of the rat submandibular glands growth induced by isoproterenol. I. Changes in the acinar compartment

O objetivo desta pesquisa foi de verificar, através de quantificaçöes esteriológicas ao microscópio óptico, a participaçäo dos processos hiperplásicos e hipertrófico no crescimento do comportamento dos ácinos de glândulas submandibulares de ratos machos, induzido por injeçöes diárias de cloridrato de isoproterenol por 14 dias. A análise dos resultados obtidos mostrou que: a) a massa glandular aumentou 135,8 por cento entre 0 a 14 dias, sendo que entre 0 a 3 dias foi observada a maior velocidade de crescimento; b) a densidade de volume, ou seja, o percentual de volume glandular ocupada pelos ácinos aumentou nos períodos de 0 a 3 e 5 a 7 dias, respectivamente, de 1,33 e 1,10 vezes; c) o volume absoluto desse comportamento passou de 131,9 milímetros cúbicos aos 0 dias para 522,5 milímetros cúbicos aos 14 dias de tratamento, o que representou um aumento de 296,1 por cento; d) o volume celular médio exibiu um soberbo crescimento de 585,4 por cento após 14 dias de tratamento, sendo que entre 0 a 3 e 5 a 7 dias, os aumentos foram, respectivamente, 286,3 por cento e 45 por cento; e) o número absoluto ora apresentados, mostraram que o crescimento do volume total do comportamento acinar de glândulas submandibulares de ratos induzidos pelo isoproterenol, ocorre essencialmente por um mecanismo hipertrófico

Morphometric study of the acinar cell development of mouse submandibular glands during the post natal period

It was studied the phases and rate of growth of the acinar cell population of the submandibular glands of male albino Swiss mice from 14 to 84 days of postnatal life. The frequency and absolute number of acinar cells were evaluated by morphometric counting methods using the light microscope. Cell frequency fluctuated throughout the study period from an initial value of 31,8 per cent to a final value of 36,6 per cent. The absolute number of acinar cells showed two distinct phases of significant growth, i.e., from 14 to 21 and from 28 to 84 days of development. Cell number did not increase between 21 and 28 days. Linear regression analysis yielded the following equation for the evolution of number of acinar cells from 14 to 84 days : Y= 149,44 + 2,54 (x-40). Mean daily acinar cell accumulation calculated by the equation was 2,54 x 10 pot.5 cells/day

Estudo morfométrico da evoluçäo da populaçäo de células do ducto granuloso da glândula submandibular do camundongo durante a vida pós-natal / Morphometric study of the granular duct cells population evolution of mouse submandibular gland during the post natal life

O desenvolvimento pós-natal da glândula submandibular do camundongo albino (Mus musculus) foi estudado em animais com idades de 14, 21, 28, 35, 42, 56 e 84 dias, através de métodos morfométricos aplicados à microscopia de luz. A massa glandular aumentou substancialmente em todo período analisado passando de 24,3 mg aos 14 dias para 175,2 mg aos 84 dias, com um incremento diário médio de 2,16 mg. O volume processado da glândula foi obtido, a partir de sua massa fresca, da densidade e da retraçäo provocada pelo processamento histológico. Através de contagens realizadas ao microscópio de luz, utilizando-se do método morfométrico II de AHERNE (1967) 2, obtivemos o número absoluto e a frequência de células de cada compartimento glandular. A análise da evoluçäo do número absoluto de células de cada compartimento glandular nos permitiu calcular o tempo de duplicaçäo e/ou decaimento de células, assim como o acréscimo e/ou perda diária de células. Em relaçäo as células do ducto granuloso avaliamos ainda, em cortes de 0,25µm de material incluído em resina araldite, o volume nuclear através do método morfométrico de BACH (1963) 9 e a densidade de volume do núcleo e do citoplasma através da volumetria de pontos (CHALKLEY, 1943 25). A partir destes valores calculamos o volume citoplasmático das células do ducto granuloso. Aos 14 dias de vida pós-parto a glândula submandibular está constituída por células acinosas (64,1x10(5)), células do túbulo terminal (41,9x10(5)), células do ducto intercalar (29,4x10(5)), células do ducto estriado (26,5x10(5)), células do ducto excretor (3,4x10(5)) e estroma (22,9x10(5))...

Estudio histoenzimático de la glándula submandibular de la rata durante el desarrollo posnatal / Histoenzymatic study of the rat submandibular gland during postnatal development

Fueron estudiadas en la glándula submandibular de la rata el nacimiento hasta la etapa adulta las enzimas oxidorreductoras: deshidrogenasas láctica, succínica y la NAD citocromo C reductasa. Estas enzimas se localizan en las células de las unidades secretoras y conductos excretores. Se comprobó que éstas presentan un incremento durante el desarrollo posnatal que es superiror al nivel de los conductos excretores. Se comprobó que la glándula submandibular de la rata adulta presenta dimorfismo sexual, el cual se manifiesta por la disposición diferente en que se precipitan los gránulos de formazán en el macho y la hembra

Efecto de la castración precoz sobre el desarrollo de la glândula submandibular de la rata macho / Effect of early castration on the development of submandibular gland of male rats

Se estudió el efecto que la castración precoz provoca sobre el desarrollo de la glándula submandibular. Se estudiaron los mucopolisacáridos ácidos y neutros, el ARN y las enzimas oxidorreductoras, se efectuó un estudio cariométrico de las células de los conductos granulares. Se comprobó que la castración efectuada a los 21 días del desarrollo no impide la diferenciación de los conductos granulares de la glándula de la rata macho, aunque estos presentan un aspecto similar a los de las hembras. No encontramos alteraciones con respecto a los mucopolisacáridos y el ARN; las enzimas oxidorreductoras aparecen con una disposición similar a la observada en las ratas hembras. Se detectaron diferencias cariovolumétricas en las células de los conductos granulares entre castrados y controles

Estudio de la fosfatasa alcalina en la glándula submandibular de la rata y el gato durnate el desarrollo posnatal / Alkaline phosphatase in the submandibular gland of rats and cats during postnatal development

La fosfatasa alcalina fue estudiada en la glándula submandibular de la rata y el gato desde el nacimiento hasta la edad adulta. Esta enzima se localiza en las células mioepiteliales que rodean a las unidades secretoras y conductos intercalares en ambos mamíferos. Se comprobó que la fosfatasa alcalina no está presente en la glándula de la rata recién nacida, apareciendo a los 7 días del desarrollo; a partir de este estudio sufre un aumento hasta que el animal alcanza la etapa adulta. En la glándula del gato, la enzima está presente desde el nacimiento hasta la etapa adulta