Sheep polyclonal antibody to map Haemonchus contortus mimotopes using phage display library / Anticorpo policlonal de ovinos para mapear mimetopos de Haemonchus contortus usando a biblioteca de Phage display

Abstract The aim of this study was to evaluate phage display technology for mapping Haemonchus contortus mimotopes. We screened the PhD-7 Phage Display Peptide Library Kit with a sheep polyclonal antibody against H. contortus. After four rounds of selection, 50 phage peptide clones were selected by biopanning and sequenced. Two clones displaying peptide mimotopes of H. contortus proteins were chosen for sheep immunization: clone 6 - mimotope of glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) and clone 17 - mimotope of a disorganized muscle family member (Dim 1). Twelve sheep were allocated into 3 groups of 4 animals as follow: G1: control group; G2/GAPDH: immunized with clone 6; and G3/Dim1: immunized with clone 17. Four immunizations were performed at intervals of seven days (0, 7, 14, and 21 days). On day 28 post initial vaccination, all groups were orally challenged with 2500 H. contortus infective larvae. The mimotope peptides selected by phage display were recognized by IgG from sheep naturaly infected with H. contortus. The immunization protocol showed an increasein IgG anti-M13 phage titers, but no effect was observed in IgG-specific for the anti-mimotope peptides. This is the first report of successful use of a phage display library for the identification of mimotopes of H. contortus proteins.

Resumo O objetivo deste estudo foi avaliar a tecnologia de phage display no mapeamento de mimetopos de Haemonchus contortus. Anticorpo policlonal de ovinos anti-H. contortus foi usado para seleção a partir da biblioteca PhD-7 Phage Display Peptide Library Kit (New England BioLabs). Após quatro rodadas, 50 clones de fagos expressando peptídeos foram selecionados e sequenciados. Dois clones que exibiram mimetopos de H. contortus foram escolhidos para imunização de ovinos: clone 6 - mimetopo de gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase (GAPDH) e clone 17 - mimetopo da família do músculo desorganizado (Dim 1). Doze ovinos foram alocados em 3 grupos de 4 animais, da seguinte forma: G1: grupo controle, G2/GAPDH: imunizado com o clone 6 e G3/Dim1: imunizado com o clone 17. Quatro imunizações foram realizadas (0, 7, 14 e 21 dias). No dia 28 após a primeira imunização, todos os grupos foram desafiados oralmente com 2500 larvas infectantes de H. contortus . Os peptídeos mimetopos selecionados foram reconhecidos por IgG de ovinos naturalmente infectados por H. contortus. O ensaio de imunização revelou um aument dos títulos de IgG anti-fago M13, mas não ocorreu aumento de IgG anti-peptídeos mimetopos. Este é o primeiro relato de uso bem sucedido da biblioteca de Phage display para a identificação de mimetopos de H. contortus.

Efeito da aplicaçäo de conídios de Drechmeria coniospora em cultivos de fezes contendo ovos de Haemonchus contortus / Effect on an endorapasitic fungus, Drechmeria coniospora, in fecal cultures containing eggs of Haemonchus contortus

O efeito da adiçäo de conídios de Drechmeria coniospora, na reduçäo do número de larvas infectantes de Haemonchus contortus foi observado em um teste onde concentraçöes crescentes de conídios foram adicionadas às fezes de ovinos contendo 750 ovos do nematódeo em cada grama de fezes. Para o teste, pesaram-se individualmente 40 amostras de 4g de fezes. Dez amostras foram deixadas sem tratamento (controle), dez foram tratadas com 10 elevado à quinta, dez com 10 elevado à sexta e dez com 10 elevada à oitava potência conídios por grama de fezes. Em seguida, as fezes foram incubadas à temperatura ambiente durante sete dias. Após este período, as larvas foram extraídas, fixadas e posteriormente quantificadas. A concentraçäo de 10 elevado à oitava potência conídios por grama de fezes reduziu significativamente o número de larvas extraídas dos cultivos