Eritrocitose primária em cão: relato de caso / Primary erythrocytosis in dog: case report

A eritrocitose absoluta primária, também denominada de policitemia vera, é um distúrbio mieloproliferativo crônico de causa desconhecida, caracterizado pela proliferação clonal de células-tronco eritróides neoplásicas. Acomete cães de meia-idade entre seis e sete anos. As manifestações clínicas mais comuns são letargia, fraqueza, poliúria, polidipsia, sangramentos como epistaxe, hematúria, hematoemese, hematoquezia, até mesmo convulsões e ataxia. O diagnóstico é baseado em valores altos de hematócrito, geralmente acima de 70%, excluindo-se as causas de eritrocitose secundária. As concentrações séricas de eritropoietina estão normais ou diminuídas. O tratamento consiste em flebotomia e administração de hidroxiuréia. Relata-se o caso de uma cadela, raça Bichon Frise, 11 anos, que, no início do quadro, apresentou hematócrito de 84%, letargia, ataxia, mucosas congestas, cianose de língua, poliúria e polidipsia. Realizou-se o tratamento com hidroxiuréia durante oito anos, na dose de 15 a 30 mg/kg, a cada 24 horas, sem ocorrência de efeitos colaterais ou recidiva das manifestações clínicas.(AU)

Primary absolute erythrocytosis, also termed polycythemia vera, is a chronic myeloproliferative disorder of unknown cause. It is characterized by clonal proliferation of neoplastic erythroid stem cells. It affects middle-aged dogs between 6-7 years. The most common clinical manifestations are lethargy, weakness, polyuria, polydipsia, and bleeding such as epistaxis, hematuria, hematoemese, and hematochezia. Seizures and ataxia are also common. Diagnosis is based on high hematocrit values, generally above 70% excluding the causes of secondary erythrocytosis. Serum concentrations of erythropoietin are at a normal level or decreased level. Treatments consists of hydroxyurea and phlebotomy management. It is reported that case of female Bichon Frise, 11 years old who onset of the disease had a hematocrit of 84%, lethargy, ataxia, congested mucous membranes, tongue cyanosis, polyuria and polydipsia. The treatment with hydroxyurea was performed for 8 years, at a dose of 15 to 20mg/kg, every 24 hours, without occurrence of side effects or recurrence of clinical manifestations.(AU)

Cytotoxicity and DNA damage in the neutrophils of patients with sickle cell anaemia treated with hydroxyurea

Hydroxyurea (HU) is the most important advance in the treatment of sickle cell anaemia (SCA) for preventing complications and improving quality of life for patients. However, some aspects of treatment with HU remain unclear, including their effect on and potential toxicity to other blood cells such as neutrophils. This study used the measurement of Lactate Dehydrogenase (LDH) and Methyl ThiazolTetrazolium (MTT) and the comet assay to investigate the cytotoxicity and damage index (DI) of the DNA in the neutrophils of patients with SCA using HU.In the LDH and MTT assays, a cytoprotective effect was observed in the group of patients treated, as well as an absence of toxicity. When compared to patients without the treatment, the SS group (n=20, 13 women and 07 men, aged 18-69 years), and the group of healthy individuals (AA) used as a control group (n=52, 28 women and 24 men, aged 19-60 years), The SSHU group (n=21, 11 women and 10 men, aged 19-63 years) showed a significant reduction (p<0.001) in LDH activity and an increase in the percentage of viable cells by the MTT (p<0.001). However, the SSHU group presented significantly higher DI values (49.57±6.0 U/A) when compared to the AA group (7.43 ± 0,94U/A) and the SS group (22.73 ±5.58 U/A) (p<0.0001), especially when treated for longer periods (>20 months), demonstrating that despite the cytoprotective effects in terms of cell viability, the use of HU can induce DNA damage in neutrophils.

A hidroxiuréia (HU) constitui o avanço mais importante no tratamento da anemia falciforme (AF) por prevenir complicações e aumentar a qualidade de vida dos pacientes. Entretanto, alguns aspectos do tratamento com HU permanecem obscuros, incluindo a sua ação e potencial toxicidade em outras células sanguíneas, tais como neutrófilos. Este estudo utilizou a mensuração da lactato desidrogenase (LDH) e do metil tiazoltetrazólio (MTT) e o ensaio do cometa para investigar a citotoxicidade e índice de dano (ID) ao DNA em neutrófilos de pacientes com AF em uso do medicamento. Nos ensaios de LDH e MTT, observou-se além de ausência de toxicidade, uma ação citoprotetora no grupo de pacientes tratados, Grupo SSHU (n=21, 11 mulheres e 10 homens, com idades entre 19-63 anos), quando comparados aos pacientes sem tratamento, Grupo SS (n=20, 13 mulheres e 07 homens, 18-69 anos), e grupo de indivíduos saudáveis (AA) usado como controle (n=52, 28 mulheres e 24 homens, 19-60 anos), com redução significativa (p<0,001) na atividade de LDH e aumento no percentual de células viáveis pelo MTT (p<0,001). Entretanto, o grupo SSHU apresentou valores de ID significativamente elevados (49,57±6,0 U/A), quando comparados ao grupo AA (7,43 ± 0,94U/A) e grupo SS (22,73 ±5,58 U/A) (p<0,0001), especialmente quando tratados por períodos mais longos (>20 meses), demonstrando que apesar dos efeitos citoprotetores quanto à viabilidade celular, o uso da HU pode induzir lesão ao DNA de neutrófilos.

Standardization method for measurement of hydroxyurea by Ultra High Efficiency Liquid Chromatography in plasma of patients with sickle cell disease

Sickle cell anemia (SCA) is a recessively inherited disease characterized by chronic hemolytic anemia, chronic inflammation, and acute episodes of hemolysis. Hydroxyurea (HU) is widely used to increase the levels of fetal hemoglobin (HbF). The objective of this study was to standardize and validate a method for the quantification of HU in human plasma by using ultra high performance liquid chromatography (UPLC) in order to determine the plasma HU levels in adult patients with SCA who had been treated with HU. We used an analytical reverse phase column (Nucleosil C18) with a mobile phase consisting of acetonitrile/water (16.7/83.3). The retention times of HU, urea, and methylurea were 6.7, 7.7, and 11.4 min, respectively. All parameters of the validation process were defined. To determine the precision and accuracy of quality controls, HU in plasma was used at concentrations of 100, 740, and 1600 µM, with methylurea as the internal standard. Linearity was assessed in the range of 50-1600 µM HU in plasma, obtaining a correlation coefficient of 0.99. The method was accurate and precise and can be used for the quantitative determination of HU for therapeutic monitoring of patients with SCA treated with HU.

A anemia falciforme (AF) é uma doença hereditária recessiva caracterizada por anemia hemolítica crônica, inflamação crônica e episódios agudos de hemólise. Hidroxiureia (HU) é amplamente utilizada para aumentar os níveis de hemoglobina fetal (Hb F). O objetivo consiste em padronizar e validar um método para a quantificação de HU no plasma humano utilizando Cromatografia Líquida de Ultra Alta Eficiência (UPLC), a fim de determinar os níveis de HU em pacientes adultos com AF, tratados com HU. Utilizou-se coluna analítica de fase inversa (Nucleosil C18), fase móvel constituída por acetonitrila/água (16,7/83,3). Os tempos de retenção da HU, uréia e metiluréia foram respectivamente de 6,7, 7,7 e 11,4 minutos. Definiram-se todos os parâmetros do processo de validação. Para determinar a precisão e exatidão dos controles de qualidade utilizaram-se concentrações de 100, 740 e 1600 mM de HU no plasma, empregando como padrão interno a metiluréia. A linearidade foi avaliada no intervalo de 50 1600 mM de HU no plasma, obtendo-se coeficiente de correlação de 0,99. O método foi considerado exato e preciso e pode ser realizado com o propósito de determinação quantitativa de HU para monitorização terapêutica de pacientes com AF tratados com esse fármaco.