Activated protein C resistance and lupus anticoagulant activity induced by plasma and purified monospecific human IgG anti-β2-glycoprotein-I antibodies / Resistencia a la proteína C activada y actividad de anticoagulante lúpico inducidas por plasma y por anticuerpos purificados humanos del IgG anti β2-glicoproteína I

ABSTRACT Introduction. We investigated the activated protein C resistance (APCR) phenotype and the lupus anticoagulant (LA), activity induced by anti-β2-glycoprotein-I (anti-β2GP-I) antibodies. Patients and methods. We studied plasma and sera samples from 29 patients with persistently positive anti-β2GP-I: 22 with thrombosis (12 with primary APS, 10 with APS secondary to SLE) and seven without thrombosis (all with SLE); 25 healthy subjects were studied as controls. We detected anticardiolipin antibodies (ACA); IgG (and its subclasses) and IgM anti-β2GP-I, on irradiated and non-irradiated plates by ELISA. APCR was assessed by the activated partial thromboplastin time (APTT)-based assay and by the modified test. The FV Leiden mutation was studied by PCR. LA determination included screening and confirmatory dRVVT. Serum anti-β2GP-I were affinity purified on sepharose columns and their isotype, subclass, and reactivity against various antigens were studied by ELISA. Results. We found that titers of IgG anti-β2GP-I on irradiated plates were higher than on non-irradiated plates (p = 0.002), IgG2 was the predominant subclass. Fifteen patients (13 with thrombosis) had LA and 15 (also 13 with thrombosis) induced the APCR phenotype. Eleven (all with thrombosis) had both. Two patients were heterozygous for the Leiden mutation. Two purified antibodies, monospecific for β2GP-I, induced an in vitro APCR phenotype and LA activity. Conclusions. Our results seem to indicate that the inhibition of the APC anticoagulant function by IgG2 anti-β2GP-I with LA activity may be one of the responsible mechanisms of thrombophilia in patients with APS.

Introducción. Investigamos la resistencia a la proteína C activada (RPCA) y la actividad de anticoagulante lápico (AL), inducidas por anticuerpos anti-β2-glicoproteína-I (anti-β2GP-I). Pacientes y métodos. Estudiamos los plasmas y sueros persistentemente positivos para anti-β2GP-I de 29 pacientes: 22 tuvieron trombosis (12 con síndrome de antifosfolípidos (SAF) primario y 10 con SAF secundario a lupus erítematoso generalizado (LEG)) y siete sin trombosis (todos con LEG). Como controles estudiamos 25 sueros de personas clínicamente sanas. Detectamos anticuerpos anticardiolipina, anti-β2GP-I IgG (y sus subclases) e IgM por ELISA en placas irradiadas y no irradiadas. Evaluamos la RPCA por medio del tiempo parcial de tromboplastina activada y por la prueba modificada. Estudiamos la mutación FV de Leiden por PCR y el anticoagulante lápico con el método de dRVVT screening y confirmatorio. Después de purificar los anti-β2GP-I séricos con una columna de antígeno unido a sefarosa, analizamos por ELISA sus isotipos, subclases y reactividad contra β2GP-I y algunos fosfolípidos. Resultados. Los títulos de anti-β2GP-I IgG fueron más altos en placas irradiadas que en no irradiadas (p = 0.002), predominó la subclase IgG2. Quince plasmas (13 de pacientes con trombosis) tuvieron AL y 15 (13 también de pacientes con trombosis) indujeron el fenotipo de RPCA. Once plasmas (todos de pacientes con trombosis) indujeron ambas actividades. Dos pacientes fueron heterocigotos para la mutación de Leiden. Dos anticuerpos purificados monoespecíficos para β2GP-I indujeron el fenotipo de la RPCA y la actividad de AL in vitro. Conclusiones. Nuestros resultados sugieren que la RPCA, inducida por los anti-β2GP-I que concomitantemente tienen actividad de AL, puede tener implicaciones patogénicas en la trombofílía del SAF.

Estudo comparativo dos resultados obtidos pelos métodos de imunocromatografia e o ELISA para detecção de anticorpos IgM e IgG anti-vírus dengue / Comparative study of the results obtained by immunocromatography methods and ELISA IgM and IgG antibodies detection antidengue virus

O dengue constitui sério problema de saúde pública no mundo, especialmente na maioria dos países tropicais. No Brasil, o diagnóstico sorológico é realizado pelo ensaio imunoenzimático para captura de IgM (MAC-ELISA) e IgG (ELISA IgG) anti-dengue, entretanto, inúmeros kits estão disponíveis no mercado. Nesse estudo, o Kit Dengue - Teste Rápido em Tira (KD-TRT) é comparado com as técnicas padrões. Foram utilizadas 72 soros, incluindo soros de pacientes com infecção confirmada ou presuntiva por dengue, com infecção por febre amarela e rubéola, bem como, de pacientes com sorologia dengue negativa. O KD-TRT apresentou sensibilidade de 54,2 porcento e especificidade de 100 porcento mediante análise dos soros de pacientes com ou sem dengue. Quando incluídas as amostras de febre amarela e rubéola, o KD-TRT apresentou os índices de 54,2 porcento e 91,2 porcento de sensibilidade e especificidade, respectivamente. Os resultados da detecção de anticorpos IgG do KD-TRT foram correlacionados com os resultados do ELISA IgG. O ELISA IgG detectou 20 (38,5 porcento) reações primárias, 17 (32,7 porcento) reações secundárias e 15 (28,8 porcento) reações negativas, enquanto que o KD-TRT detectou 11 (21,2 porcento), 7 (13,5 porcento) e 34 (65,3 porcento), respectivamente. O KD-TRT apresentou menor sensibilidade e especificidade em relação ao MAC-ELISA e baixa correlação de resultados com ELISA IgG.