Clinical, laboratorial and radiographic predictors of Bordetella pertussis infection / Preditores clínicos, laboratoriais e radiográficos para infecção por Bordetella pertussis

OBJECTIVE: To identify clinical, laboratorial and radiographic predictors for Bordetella pertussis infection. METHODS: This was a retrospective study, which analyzed medical records of all patients submitted to a molecular dignosis (qPCR) for B. pertussis from September 2011 to January 2013. Clinical and laboratorial data were reviewed, including information about age, sex, signs/symptoms, length of hospitalization, blood cell counts, imaging findings, coinfection with other respiratory pathogens and clinical outcome. RESULTS: 222 cases were revised. Of these, 72.5% had proven pertussis, and 60.9% were under 1 year old. In patients aging up to six months, independent predictors for B. pertussis infection were (OR 8.0, CI 95% 1.8-36.3; p=0.007) and lymphocyte count >104/µL (OR 10.0, CI 95% 1.8-54.5; p=0.008). No independent predictors of B. pertussis infection could be determined for patients older than six months. Co-infection was found in 21.4% of patients, of which 72.7% were up to six months of age. Adenovirus was the most common agent (40.9%). In these patients, we were not able to identify any clinical features to detect patients presenting with a respiratory co-infection, even though longer hospital stay was observed in patients with co-infections (12 vs. 6 days; p=0.009). CONCLUSIONS: Cyanosis and lymphocytosis are independent predictors for pertussis in children up to 6 months old...

OBJETIVO: Identificar preditores clínicos, laboratoriais e radiológicos da infecção por Bordetella pertussis. MÉTODOS: Trabalho retrospectivo, com análise de prontuários clínicos de todos os indivíduos submetidos ao diagnóstico molecular (qPCR) para B. pertussis de setembro de 2011 à janeiro de 2013. Foram revistos dados clínicos e laboratoriais, incluindo informações sobre idade, sexo, sinais/sintomas, tempo de hospitalização, contagens de células sanguíneas, exames de imagem, co-infecção com outros patógenos respiratórios, e evolução clínica. RESULTADOS: 222 casos foram revistos, do quais 72,5% tinham coqueluche confirmada, sendo 60,9% menores de um ano de idade. Foram observados preditores independentes para B. pertussis em pacientes com menos de seis meses de idade. Nesses casos, os preditores identificados foram cianose (OR 8,0; CI 95% 1,8-36,3; p=0,007) e contagem de linfócitos >104/µL (OR 10,0, CI 95% 1,8-54,5; p=0,008). Preditores de coqueluche não puderam ser determinados para crianças maiores de 6 meses de idade. Coinfecção foi encontrada em 21,4% dos pacientes, dos quais 72,7% tinham até seis meses de idade, sendo que o adenovírus foi o agente mais comum (40,9%). Nesses indivíduos, não foram observadas características clíncias capazes de distinguir pacientes com co-infecção, porém foi verificado um maior tempo de internação hospitalar nos pacientes com mais de um agente infeccioso detectado (12 vs. 6 dias; p=0,009). CONCLUSÕES: Cianose e linfocitose são preditores independentes para coqueluche em crianças com até seis meses de idade...

Rapid and sensitive detection of Bordetella bronchiseptica by loop-mediated isothermal amplification (LAMP)

Bordetella bronchiseptica causes acute and chronic respiratory infections in diverse animal species and occasionally in humans. In this study, we described the establishment of a simple, sensitive and cost-efficient loop-mediated isothermal amplification (LAMP) assay for the detection of B. bronchiseptica. A set of primers towards a 235 bp region within the flagellum gene of B. bronchiseptica was designed with online software.. The specificity of the LAMP assay was examined by using 6 porcine pathogens and 100 nasal swabs collected from healthy pigs and suspect infected pigs. The results indicated that positive reactions were confirmed for all B. bronchiseptica and no cross-reactivity was observed from other non-B. bronchiseptica. In sensitivity evaluations, the technique successfully detected a serial dilutions of extracted B. bronchiseptica DNA with a detection limit of 9 copies, which was 10 times more sensitive than that of PCR. Compared with conventional PCR, the higher sensitivity of LAMP method and no need for the complex instrumentation make this LAMP assay a promising alternative for the diagnosis of B. bronchiseptica in rural areas and developing countries where there lacks of complex laboratory services.

Desarrollo y validación de una PCR múltiple para el diagnóstico de Bordetella spp / Development and validation of a multiplex PCR for diagnosis of Bordetella spp / Desenvolvimento e validação de uma PCR múltipla para o diagnóstico de Bordetella spp

El objetivo del trabajo consistió en diseñar y validar una PCR en formato convencional que permita confirmar la presencia o ausencia de Bordetella pertussis y detectar otras especies del género, como Bordetella parapertussis y Bordetella bronchiseptica, que pudieran estar involucradas en el cuadro clínico de coqueluche. A tal fin se diseñó una reacción en cadena de la polimerasa (PCR) múltiple que amplifica una secuencia del promotor del gen de Toxina Pertussis y otra del gen de la Toxina Adenilato Ciclasa-Hemolisina. Se validó la metodología siguiendo esquemas publicados anteriormente. Se optimizaron las condiciones de la PCR. Se validó la metodología obteniéndose un límite de detección para ambas secuencias de 0,5 bacterias por reacción. Se validó, además, la especificidad y robustez de la técnica. Se presenta una nueva herramienta diagnóstica optimizada y validada, que permite detectar la presencia de las especies de Bordetella más frecuentemente involucradas en el cuadro clínico de coqueluche. Su uso combinado con alguna de las PCR habituales en diagnóstico, como la PCR IS481, permite aumentar la sensibilidad del diagnóstico de esta en­fermedad, la especificidad del mismo discriminando los resultados falsos positivos/negativos y aumentar el conocimiento sobre los agentes etiológicos implicados en esta patología.

The aim of the present work was to design and validate a conventional PCR that enables to confirm the presence or absence of Bordetella pertussis and to detect other Bordetella species, such as Bordetella parapertussis metoand B. bronchiseptica, that may be involved in this pathology. To this aim, a multiplex PCR that amplifies a sequence of the promoter of the Pertussis Toxin gene and a sequence of the Adenylate Cyclase Toxin-Hemolysin gene were designed. The PCR was validated following previously published schemes. PCR conditions were optimized. The methodology was validated obtaining a detection limit of 0.5 bacteria per reaction, for both sequences. Specificity and robustness of the technique were also validated. A new optimized and validated tool to detect the presence of the Bordetella species most frequently responsible of pertussis was presented. The combined use with some of the usual PCR, such as IS 481, may increase the sensitivity of the diagnosis of this disease, its specificity discriminating false positive/negative results and increase awareness of the etiologic agents involved in this pathology.

O objetivo do trabalho foi desenhar e validar uma reação em cadeia da polimerase (PCR) em formato convencional que permita confirmar a presença ou ausência de Bordetella pertussis e detectar outras espécies do gênero, como Bordetella parapertussis e Bordetella bronchiseptica, que pudessem estar envolvidas no quadro clínico de coqueluche. Para tal, foi desenhada uma PCR múltipla que amplifica uma sequência do promotor do gene de Toxina Pertussis e outra do gene da Toxina Adenilato Ciclase-Hemolisina. A metodologia foi validada seguindo esquemas publicados anteriormente. Foram otimizadas as condições da PCR. Validou-se a metodologia obtendo-se um limite de detecção para ambas as sequências de 0,5 bactérias por reação. Validou-se também a especificidade e robustez da técnica. Apresenta-se uma nova ferramenta diagnóstica otimizada e validada, que permite detectar a presença das espécies de Bordetella mais frequentemente envolvidas no quadro clínico de coqueluche. Seu uso combinado com alguma das PCR habituais em diagnóstico, como a PCR IS481, permite aumentar a sensibilidade do diagnóstico desta doença, a especificidade do mesmo discriminando os resultados falsos positivos/negativos e aumentar o conhecimento sobre os agentes etiológicos envolvidos nesta patologia.

Relapsing Peritonitis Caused by Bordetella bronchiseptica in Continuous Ambulatory Peritoneal Dialysis Patient: A Case Report

Bordetella (B) bronchiseptica is a common veterinary pathogen, but has rarely been implicated in human infections. Most patients with B. bronchiseptica infections are compromised clinically such as in patients with a malignancy, AIDS, malnutrition, or chronic renal failure. We experienced a case of relapsing peritonitis caused by B. bronchiseptica associated with continuous ambulatory peritoneal dialysis (CAPD). A 56-yr-old male, treated with CAPD due to end stage renal disease (ESRD), was admitted with complaints of abdominal pain and a turbid peritoneal dialysate. The culture of peritoneal dialysate identified B. bronchiseptica. The patient was treated with a combination of intraperitoneal antibiotics. There were two further episodes of relapsing peritonitis, although the organism was sensitive to the used antibiotics. Finally, the indwelling CAPD catheter was removed and the patient was started on hemodialysis. This is the first report of a B. bronchiseptica human infection in the Korean literature.

Biología molecular de Bordetella pertussis / Molecular biology of Bordetella pertussis

Bordetella pertusis produce una infección localizada del tracto respiratorio; en los tejidos humanos y en los modelos animales de laboratorio tiene una predilección por el epitelio ciliado. Hay un cierto número de antígenos y toxinas los cuales pueden ser importantes en la patogénesis: aglutinógenos, hemaglutinina filmentosa, factor promotor de la linfocitosis (FPL), adenilatociclasa, toxina termolabil, lipopolisacárido y la citotoxina traqueal. La B. pertussis puede producir también una reacción febril causada por la endotoxina, la atenuación de la respuesta inflamatoria del huésped posiblemente por efecto de la adenilatociclasa, la linfocitosis, leucocitosis, los efectos sobre la homeostasis de la glucosa y la neurotoxicidad producidos por el FPL; sin embargo, no existe un modelo razonable para estudiar la inmunidad local de la tosferina. Los avances recientes en el laboratorio, podrían tener una repercusión sobre la producción de la vacuna y su empleo clínico