Duplex nested-PCR for detection of small ruminant lentiviruses

Abstract Small ruminant lentiviruses (SRLV) have high genetic variability which results in different viral strains around the world. This create a challenge to design sensible primers for molecular diagnosis in different regions. This work proposes a protocol of duplex nested-PCR for the precise diagnosis of SRLV. The technique was designed and tested with the control strains CAEV Co and MVV 1514. Then, field strains were submitted to the same protocol of duplex nested-PCR. Blood samples of sheep and goats were tested with AGID and nested PCR with specific primers for pol, gag and LTR. The AGID results showed low detection capacity of positive animals, while the nested PCR demonstrated a greater capacity of virus detection. Results demonstrated that LTR-PCR was more efficient in detecting positive sheep samples, whereas gag-PCR allowed a good detection of samples of positive goats and positive sheep. In addition, pol-PCR was more efficient with goat samples than for sheep. Duplex nested PCR performed with standard virus samples and field strains demonstrated that the technique is more efficient for the detection of multiple pro-viral DNA sequences. This study demonstrated a successful duplex nested PCR assay allowing a more accurate diagnosis of SRLV.

Transmissibilidade de Lentivírus de Pequenos Ruminantes para cabritos e cabras adultas por meio de sêmen infectado experimentalmente / Transmissibility of Small Ruminants Lentivirus in kids by experimentally infected semen

A Artrite Encefalite Caprina se caracteriza por ser multissistêmica e infecciosa, causada por um lentivírus. O estudo teve como objetivo avaliar a transmissibilidade do Lentivírus Caprino, para fêmeas e sua prole, por meio de sêmen infectado experimentalmente. Para tanto, onze fêmeas livres de CAEV foram inseminadas artificialmente com sêmen de bode livre de CAEV ao qual foi adicionado CAEV-Cork para obter título infectante com carga viral em 105 TCID50/ml. (grupo experimental 1). Destas, seis obtiverem prenhez confirmada, e a sua prole (n=6) constituiu o grupo experimental 2. Duas cabras livres de CAEV foram inseminadas artificialmente com sêmen do mesmo bode, sem o inócuo viral, constituindo-se o grupo controle. O diagnóstico da infecção pelo Lentivírus Caprino, foi realizado por IDGA, cELISA e nested-PCR. As fêmeas foram monitoradas durante 210 dias pós inseminação artificial. Já as proles foram imediatamente separadas das mães após o nascimento, e monitoradas nos momentos hora zero, aos quinze dias de idade e mensalmente, até doze meses de idade. Em relação às cabras, 56,96%(9/158) apresentaram positividade para cELISA, 24,05% (38/158) foram positivas a IDGA e nenhuma para nested-PCR. Em relação aos cabritos, 11,28% (15/133) amostras positivas para nested-PCR, 5,26% (7/133) amostras positivas para IDGA e nenhum para cELISA. As proles do grupo controle apresentaram resultados negativos para as três técnicas. A positividade encontrada em nested-PCR pode indicar grande importância para identificação de animais infectados, porém soronegativos, em situações de soroconversão tardia. De acordo com os resultados, concluiu-se que há a transmissão do Lentivírus caprino para a prole e para as mães pelo sêmen infectado.(AU)

Caprine Arthritis Encephalitis is a multisystemic infectious disease, caused by a lentivirus. The objective of this study was to evaluate the transmissibility of caprine lentivirus to goats and their offspring, through experimentally infected semen. Therefore, eleven free-CAEV goats were artificially inseminated using semen from a free-CAEV buck experimentally infected with CAEV-Cork strain (experimental group one). Pregnancy was confirmed in only six goats and their offspring (n=6) constituted the experimental group two. Two free-CAEV females were artificially inseminated with semen from the same seronegative buck, without viral inoculum to constitute the control group. The diagnosis of caprine lentivirus infection was performed using AGID, cELISA and nested-PCR. All females were monitored for 210 days after artificial insemination. Kids were immediately separated from their mothers after birth, and monitored at zero time, 15 days old and monthly until 12 months old. Regarding goat samples, 56.96% (9/159) were positive in cELISA, 24.05% (38/158) were positive in IDGA and none was positive in nested-PCR. Regarding to the offspring samples, 11.28% (15/133) and 5.26% (7/133) were positive in nested-PCR and IDGA, respectively, while no sample was positive in cELISA. The control group showed no positives in the three techniques. The positivity observed to nested-PCR may show its importance to identify infected, but seronegative animals, in late seroconversion situations. According to results, the transmission of caprine lentivirus to offspring and their mothers through infected semen is possible.(AU)

Use of serological diagnostic techniques in the control and eradication of caprine arthritis encephalitis: an update / Uso de técnicas sorológicas de diagnóstico no controle e erradicação da artrite encefalite caprina: atualização

Caprine arthritis encephalitis (CAE) is a chronic disease caused by a small ruminant lentivirus (SRLV), which causes significant losses in goat breeding. The actual state of animal infection with SRLV is difficult to determine due to a complex pathogenesis of the virus, including factors such as delayed or intermittent seroconversion in serological tests. Several serological techniques are available for disease diagnosis, such as screening or confirmation tests, which are different in sensitivity and specificity. Regarding the choice of the test to be applied, availability of commercial immunoreagents, team training, antigen used, and cost of techniques must be considered. This review presents the serological methods available for use in different stages of CAE control and eradication programs, and management measures to be adopted in conjunction with serological diagnosis of the disease...

A artrite encefalite caprina (CAE) é uma enfermidade crônica causada por um lentivírus de pequenos ruminantes (LVPR), que ocasiona perdas significativas na caprinocultura. O estado real da infecção animal pelo LVPR é de difícil determinação em virtude da complexa patogenia do vírus, incluindo fatores como soroconversão tardia ou intermitente em testes sorológicos. Para o diagnóstico da enfermidade, diversas técnicas sorológicas estão disponíveis, como testes de triagem ou confirmatórios, com variações na sensibilidade e especificidade. Para escolha do teste a ser usado, a disponibilidade de imunorreagentes comerciais, o treinamento da equipe, o antígeno utilizado, e o custo das técnicas devem ser considerados. Esta revisão apresenta os métodos sorológicos disponíveis para uso em diferentes fases dos programas de controle e erradicação da CAE e as medidas de manejo que devem ser adotadas em conjunto com o diagnóstico sorológico da enfermidade...

Prevalência da infecção por lentivírus de pequenos ruminantes em caprinos em Teresina, Piauí / Prevalence of small ruminants lentiviruses infection in goats from Teresina, Piauí, Brazil

The prevalence of anti-lentiviruses antibodies of small ruminants was investigated in goat herds in the city of Teresina, PI, Brazil. A seroepidemiological survey was conducted involving 480 animals, apparently healthy, belonging to six rural properties. The diagnostic test was the agar gel immunodiffusion (AGID), using antigens produced from cellular cultures infected with caprine arthritis encephalitis virus (CAEV Cork). Prevalences by gender and age were estimated considering sampling fractions for each farm. A general prevalence of 4.2 percent, was observerved, being 4.2 percent for females and 3.6 percent for males. Prevalences were higher among older goats. Regarding the breed standard, 23.5 percent were of the Anglo Nubian, 5.9 percent of the Boer, 35.3 percent Anglo Nubian x Boer crossbred, and 35.3 percent of undefined breed. It is concluded that small ruminant lentiviruses are endemic among goat herds of Teresina.

Occurrence of feline immunodeficiency virus infection in cats / Ocorrência da infecção pelo vírus da imunodeficiência felina em gatos

The occurrence of feline immunodeficiency virus (FIV) in Brazil has been previously described. This study aimed to investigate the frequency of FIV infection in 454 blood samples from healthy and sick domestic cats from 13 cities of São Paulo State, Brazil as well as to evaluate the risk factors associated with the infection. The results showed that 14.7 percent (67/454) of the cats were infected with FIV. The clinical evaluation showed that 29.2 percent of the FIV-positive animals were sick, while 7.3 percent did not show any type of clinical manifestation. In addition, the vast majority (23.1 percent) of positive cases corresponded to free-roaming owned cats. The incidence of FIV infection was higher in males (20.3 percent) than in females (9.7 percent). The results suggest that certain characteristics such as gender, health status and lifestyle may be associated with the risk of being infected with FIV in the population of cats studied.

No Brasil, a ocorrência da infecção pelo vírus da imunodeficiência felina (FIV) já foi descrita. Neste estudo, objetivou-se investigar a freqüência da infecção pelo FIV em 454 amostras de sangue de gatos domésticos doentes e sadios, oriundos de 13 cidades do Estado de São Paulo, assim como avaliar os fatores de risco associados à infecção pelo FIV. Os resultados demonstraram que 14,7 por cento (67/454) dos gatos estavam infectados pelo FIV. A avaliação clínica dos animais investigados mostrou que 29,2 por cento dos animais soropositivos para FIV estavam doentes, enquanto 7,3 por cento não apresentavam nenhuma manifestação clínica. Além disso, a vasta maioria dos animais positivos (23,1 por cento) vivia em residências e tinha livre acesso à rua. A incidência da infecção pelo FIV foi maior nos gatos machos (20,3 por cento) do que nas fêmeas (9,7 por cento). Os resultados sugerem que certas características como sexo, estilo de vida e estado de saúde podem estar associadas ao risco de contrair a infecção pelo FIV na população de gatos estudada.

Anticorpos contra lentivírus de pequenos ruminantes em caprinos e ovinos em abatedouros do estado de Pernambuco / Small ruminant lentivirus infection in goats and sheep from two abattoirs in Pernambuco State, Brazil

The prevalence of small ruminant lentivirus (SRL) infection was evaluated in goats and sheep in two counties of Pernambuco State, Brasil. Seriological examinations were performed from a total of 672 goats and 325 sheep, one year of age and older, at two abattoirs. Sera were analyzed by agar gel immunodiffusion using Maedi-Visna K-1514 antigens. There were 42 reactive samples (95 percent confidence interval 3.6 percent to 4.9 percent) in both slaughter houses. In São Lourenço da Mata county, 3.2 percent and 4.0 percent of goat and sheep sera were responsive, whereas in Paulista county, 5.1 percent of goat samples and 8.2 percent of sheep were reactive. Thus, the prevalence of small ruminant lentivirus was low in goats and sheep sampled from the region.

Prevalência da infecçäo pelo vírus da artrite encefalite caprina no Estado do Ceará, Brasil / Prevalence of caprine arthritis encephalitis virus infection in the state of Ceará, Brazil

A elevaçäo do risco de contaminaçäo pelo vírus da artriteencefalite caprina (CAEV) em rebanhos caprinos nativos e sem raça definida (SRD) tem sido verificada paralelamente à introduçäo de caprinos de raças exóticas no Brasil, o que motivou a realizaçäo deste levantamento epidemiológico no Estado do Ceará. Para o diagnóstico da infecçäo pelo CAEV, utilizou-se a microtécnica de imunodifusäo em gel de ágar. Foram pesquisadas 4019 amostras de soro caprino em 30 municípios do Ceará. A prevalência da infecçäo pelo CAEV verificada foi de 1 por cento (40/4019 animais), sendo a maior prevalência (11,1 por cento) na regiäo metropolitana de Fortaleza. Analisando a distribuiçäo de animais soropositivos nos municípios pesquisados, constatou-se que um terço dos municípios (10/30) apresentaram pelo menos um animal soropositivo. Verificou-se maior prevalência (p<5 por cento) nos caprinos mais velhos quando comparados com os jovens. A análise por sexo e composiçäo do rebanho mostrou que os machos estavam estatisticamente mais afetados (p<5 por cento). Consideramdo-se o grau de sangue, 5,02 por cento de raças puras e 0,12 por cento de animais mestiços apresentavam anticorpos contra CAEV. Dentre os soropositivos, a raça Parda Alpina foi estatisticamente mais afetada (p<5 por cento). Com base nos resultados, pode-se verificar que o lentivírus de pequenos ruminantes já se encontra disseminado nas várias regiöes do Ceará e que, provavelmente, os reprodutores sejam a principal fonte de transmissäo viral entre os rebanhos nativos/SRD.

Caprine arthritis-encephalitis virus: isolation and identification in Rio Grande do Sul, Brazil

We describe the first report of caprine arthritis-encephalitis virus (CAEV) isolation in Brazil. In December 1989 a four-year old anglonubian arthritic doe was submitted to euthanasia and its synovial membranes were cultured by explantation. This doe was positive for antibodies to the caprine arthritis-encephalitis virus (CAEV). The reverse transcriptase activity detected in culture supernatants, the characteristic cytopathic effect of lentivirus in these cultures, the detection of viral antigens in concentrated supernatants by the agar gel immunodiffusion test, and the results of the fluorescent antibody test and of Northern blot analyses are consistent with the isolation of the CAEV