Evaluation of equine corneal endothelium after exposure to 0. 05% brilliant blue - an in vitro study / Avaliação do endotélio corneano de equinos após contato com o corante azul brilhante 0, 05% - estudo in vitro

The aim of this study was to evaluate the immediate effects of 0.05% brilliant blue on corneal endothelium of horses. Thirty-eight corneas of 19 horses, male or female, of different ages were studied. Corneas were randomly divided into two groups. Group 1: Corneal endothelium was covered with 0.3mL of brilliant blue 0.05% for 60 seconds followed by rinsing with a balanced salt solution. Group 2: Corneal endothelium was covered with BSS for 60 seconds. The corneas were excised with an 8mm trephine and prepared to analyze posterior endothelial surface using a light microscope (24 corneas) and a scanning electron microscope (14 corneas). The equine posterior corneal endothelium surface observed by optical microscopy and scanning electron microscopy revealed a continuous layer of polygonal cells of uniform size and shape in both the control and treatment groups. Due to non-normal residuals at ANOVA mean comparison, a generalized linear model was utilized at 5% level of significance. The chi-square test stated that treatment and control group were not different statistically. The 0.05% brilliant blue did not cause damage to equine corneal endothelium.(AU)

Objetivou-se avaliar os efeitos imediatos de uma solução de 0,05% de azul brilhante sobre o endotélio da córnea de equinos. Trinta e oito córneas de 19 cavalos, machos ou fêmeas, de diferentes idades foram estudadas. As córneas foram divididas aleatoriamente em dois grupos. Grupo 1: O endotélio corneano foi perfundido com 0,3mL de azul brilhante 0,05% durante 60 segundos seguido por irrigação com uma solução salina balanceada. Grupo 2: O endotélio corneano foi perfundido com BSS durante 60 segundos. As córneas foram posteriormente excisadas com trépano de 8mm e preparadas para análise endotelial utilizando um microscópio óptico (24 córneas) e um microscópio eletrônico de varredura (14 córneas). A análise da superfície posterior do endotélio da córnea equina observada por microscopia óptica e microscopia eletrônica de varredura revelou uma camada contínua de células poligonais de tamanho e forma uniformes tanto no grupo controle quanto no grupo tratamento. Devido aos resíduos não normais na comparação da média de ANOVA, utilizou-se um modelo linear generalizado com nível de significância de 5%. Evidenciou-se com o teste qui-quadrado que não houve diferença estatística entre o grupo controle e o grupo tratamento. O azul brilhante de 0,05% não causou dano ao endotélio corneano de equinos.(AU)

Comparação de kits ELISA® comerciais para anticorpos no soro e leite com um teste coproparasitológico em bovinos naturalmente infectados por Fasciola hepatica / Comparison of comercial® ELISA kits for antibodies in serum and milk with a fecal test in cattle naturally infected with Fasciola hepatica

A fasciolose é uma enfermidade causada por um trematoda que acomete o fígado principalmente de ruminantes domésticos, podendo parasitar o homem e seu diagnóstico é realizado rotineiramente por exames coproparasitológicos. O objetivo do presente estudo foi comparar kits comerciais de ELISA para anticorpos no soro e leite com um teste coproprarasitológico em bovinos naturalmente infectados por Fasciola hepatica. Foram coletadas amostras de fezes (92) sangue (92) e leite (43) de bovinos provenientes de propriedades de gado leiteiro do município de Jerônimo Monteiro, sul do Estado do Espírito Santo. As amostras de fezes coletadas foram processadas pela técnica de sedimentação fecal para ovos de F. hepatica, utilizada como padrão ouro para as análises. Amostras de sangue e de leite foram processadas segundo a orientação do fabricante dos respectivos Kits ELISA comerciais testados. Utilizou-se o c² de McNemar para comparação estatística e calcularam-se a sensibilidade e especificidade, valores preditivos e kappa. Os resultados obtidos mostraram que as frequências de positividade pelo uso dos kits ELISA comerciais de soro e de leite diferiram significativamente (p<0,0001) em relação ao exame coproparasitológico. A sensibilidade dos Kits foi de 100%, porém possuíram baixa especificidade, 42,85 e 30% para o soro e leite respectivamente. O coeficiente de kappa mostrou concordância sofrível para os testes de soro (0,33) e de leite (0,21). Os valores preditivos positivos dos kits para soro e leite foram, respectivamente, 44,61 e 38,23% e, os valores preditivos negativos de 100% para ambos os testes. Apesar da maior sensibilidade dos kits ELISA comerciais e, destes apresentarem diferença em relação ao exame coproparasitológico na detecção dos animais positivos para F. hepatica, a escolha de um teste diagnóstico deve considerar o custo benefício. Quando se trata da presença de parasitismo em rebanhos, o tratamento é aplicado em todos os animais e, assim, o exame coproparasitológico para o diagnóstico da doença tem maior eficiência, já que é menos oneroso e de fácil execução.

The fascioliasis is a disease caused by a trematode that affects the liver mainly of domestic ruminants and can also parasite man; its diagnosis is routinely done by coprological methods. The aim of this study was to compare commercial ELISA kits for antibodies in serum and milk with a coprological test in cattle naturally infected by Fasciola hepatica. We collected fecal, blood and milk samples from cattle in the municipality of Jerônimo Monteiro, southern Espírito Santo state. The fecal samples were processed by the fecal egg sedimentation for F. hepatica, which is used as a gold standard for analyzis. Blood (92) and milk (43) samples were processed according to the manufacturer instructions of the respective commercial ELISA kits tested. We used the McNemar chi-square for statistical comparison and calculated the sensitivity, specificity, predictive values, and kappa. The results showed that the frequency of positivity for the commercial serum ELISA kits (χ2=34.02) and milk (χ2=19.04) differed significantly (p<0.0001) compared with fecal egg sedimentation. The sensitivity of the kits was 100%, but possessed low specificity, 42.85 and 30% for serum and milk respectively. The coefficient kappa showed agreement for testing serum (0.33) and milk (0.21). The positive predictive value of the kits for serum and milk were respectively 44.61% and 38.23%, and negative predictive values were 100% for both tests. Despite the increased sensitivity of commercial ELISA kits and the difference in relation to the fecal egg sedimentation test for detection of F. hepatica positive animals, the choice of a diagnostic test should consider the effectiveness. When a herd is affected by parasitism, treatment is applied to all animals; so, the fecal egg sedimentation test for the diagnosis of disease in the field is most efficient, as the test is cheap and easy to perform.

Obtención y evaluación de un derivado proteico purificado de una cepa argentina de Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis / Production and evaluation of a purified protein derivative from an Argentine strain of Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (MAP)

Los derivados proteicos purificados (PPD) son mezclas antigénicas no definidas obtenidas de distintas micobacterias. Los PPD bovino (PPDb) y PPD aviar (PPDa) son los antígenos que se emplean para evaluar la respuesta inmunitaria celular en infecciones como tuberculosis y paratuberculosis en el bovino. El PPDa comercial se produce a partir de Mycobacterium avium subsp. avium, y no a partir de la subespecie paratuberculosis. En este trabajo se seleccionó una cepa local de Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis cuyo patrón molecular por RFLP es el más frecuente entre los aislamientos de nuestro país que han sido estudiados, y a partir de esta, se obtuvo un derivado proteico purificado: PPDj-IB. Se emplearon tanto el PPDa comercial como el PPDj-IB como antígenos en la prueba de liberación de gamma-interferón en animales de un tambo con paratuberculosis y en animales control. Aun cuando ambos PPD fueron capaces de estimular diferencialmente la liberación de la citoquina en el tambo infectado (respecto de los tambos control), no hubo diferencias significativas en los niveles de estimulación producidos y solo dos animales fueron positivos mediante el empleo de PPDj-IB. A partir del análisis por Western blot se demostró que el contenido de lipoarabinomano y del antígeno Apa/ModD era distinto en los PDD evaluados. Estas diferencias podrían explicar, en parte, las diferencias en los niveles de estimulación en términos individuales. Si bien el empleo de PPDj-IB no mejoró significativamente los resultados de la prueba de liberación de ?IFN, es importante destacar que se logró producir en el laboratorio un PPD apto para su empleo en ensayos in vitro.

Purified Protein Derivatives (PPDs) are non-defined antigens prepared from mycobacteria cultures. They are usually employed to evaluate the specific cellular immune response both in animals and humans. Bovine and avian PPDs are usually employed as antigens in mycobacterial infections such as tuberculosis and paratuberculosis. Nevertheless, PPD from Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis, (PPDj) is neither commonly used nor frequently available. However, PPD from Mycobacterium avium subsp. avium is in fact used. We aimed to obtain and evaluate the performance of a PPDj from a local isolate of MAP using the ãInterferon-release assay. The stimulation of ãInterferon-release was significantly different between infected and control cattle when this antigen, named PPDj-IB, was used. Stimulation in the infected animals was similar with both antigens (PPDa and PPDj-IB). However, some animals were positively stimulated with PPDj-IB and not with PPDa. We demonstrated by Western blot that two antigenic molecules, lipoarabinoman and APA/ModD antigen were differentially represented in both PPDs. This could explain the difference in stimulation induction of ?IFN observed at individual level. Although PPDj-IB could not improve PPDa performance, we could easily produce an effective purified protein derivative for in vitro assays.