El rol de tres pruebas de ELISA con antígenos de promastigotes de Leishmania braziliensis, L. amazonensis y L. guyanensis en el diagnóstico de leishmaniasis tegumentaria / Role of three ELISA tests using promastigote homogenates of Leishmania braziliensis, L. amazonensis and L. guyanensis in the diagnosis of tegumentary leishmaniasis

Es importante conocer si la variabilidad de especies de Leishmania circulantes en una región afecta la performance de las pruebas de ELISA estandarizadas para el diagnostico de la leishmaniasis. El objetivo de este trabajo fue analizar la reactividad de la prueba de ELISA utilizando homogenados de promastigotes de Leishmania (V.) braziliensis (ELISAb), L (L) amazonensis (ELISAa) y L (V.) guyanensis (ELISAg) frente a distintos grupos de sueros. Se estudiaron muestras de personas con leishmaniasis cutánea (n = 37), leishmaniasis mucocutánea (n = 8), no infectados (n = 52), infectadas por Trypanosoma cruzi (n = 11) e infecciones mixtas (n = 14). Se calcularon las sensibilidades, especificidades, cut off, valores predictivos, y se compararon las tres pruebas usando ANOVA, índice de concordancia kappa, comparación de curvas ROC e intervalos de confianza construidos por el método de bootstrap. Se encontraron diferencias significativas al comparar los niveles de DO de los sueros de pacientes con leishmaniasis cutánea respecto a los controles negativos, pero no se encontraron diferencias entre pruebas. Las sensibilidades calculadas fueron de 84.6% para ELISAb y ELISAa y de 88.5 para ELISAg, mientras que el valor de especificidad para las tres pruebas fue de 96.2. El índice de concordancia kappa y la comparación de curvas ROC mostraron performances similares para las tres pruebas (p = 0.225). La elevada reactividad obtenida para estas ELISAs frente a sueros de pacientes con leishmaniasis mucocutánea indica un importante potencial de esta técnica como complemento en el diagnóstico de la enfermedad.

It is important to know whether the variability of species of Leishmania parasites circulating in a region affects the performance of the ELISA test for the diagnosis of leishmaniasis. Therefore, the aim of this study was to analyze the reactivity of the ELISA using homogenates of promastigotes of Leishmania (V.) braziliensis (ELISAb), Leishmania (L) amazonensis (ELISAa) and Leishmania (V.) guyanensis (ELISAg) against different sera groups. Samples from individuals with cutaneous leishmaniasis (n = 37), mucocutaneous leishmaniasis (n = 8), healthy controls (n = 52), persons infected with Trypanosoma cruzi (n = 11) and mixed infections (n = 14) were included in the study. We calculated sensitivities, specificities, cut offs, and predictive values for the three tests and compared them using ANOVA, kappa index, ROC curves comparison, and confidence intervals calculated by the bootstrap method. Significant differences were found when comparing the OD levels of sera from patients with cutaneous leishmaniasis against healthy controls, but there were no differences when comparing the different ELISAs. The sensitivities calculated for ELISAb and ELISAa were 84.6 and of 88.5% for ELISAg, while the value of specificity for the three tests was 96.2. The kappa index (0.87) and comparison of ROC curves showed similar performance for the three ELISAs (p = 0.225). The high reactivity obtained for these ELISAs in sera of patients with mucocutaneous leishmaniasis indicates this test as an important complement in the diagnosis of the disease.

Caracterización de la respuesta inmune celular durante la infección in vitro por Leishmania (Viannia) panamensis en individuos no expuestos / Characterization of cellular immune response in the infection in vitro against Leismania (Viannia) panamensis in individuals nonexposed

Objetivo: el presente trabajo pretende caracterizar la respuesta inmune desarrollada durante la infección con Leishmania (Viannia) panamensis en individuos no expuestos a esta infección. Población del Estudio y Métodos: las células mononucleares de sangre periférica de 16 individuos sanos Montenegro, se infectaron con promastigotes vivos de L. (V) panamensis. Luego de diferentes tiempos post-infección se analizó por citometría de flujo la expresión de membranas de CD69/CD3-CD4-CD8, CD28 y CD152 y la producción intracelular de IFN gamma IL-12, IL-4 e IL-13. Resultados: el mayor porcentaje de células CD69+ se obtuvo después de 48 horas pos-infección utilizando una proporción célula: parásito de 1:10. Se observó una mayor activación en células CD8+ comparadas con las CD4+ aunque los máximos niveles de activación celular se obtuvieron en células CD3 negativas. Se observó un aumento en la expresión de CD 152 hasta las 120 horas pos-infección. La producción de IL4 e IL-13 intracelulares fué detectada en menos del 1 por ciento de la células infectadas. La mayor producción de IFN-gamma e IL-12 se detecto en un 4 por ciento y un 3 por ciento de las células respectivamente, con una mayor respuesta de las 20 horas pos-infección. Conclusiones: en este estudio se observa como las CMSP de individuos sanos, sin contacto previo con L. (V) panamensis proliferan, se activan, modifican la expresión de moléculas coestimuladoras y producen citoquinas luego de la infección con el parásito. Esta respuesta podría ser debida a un fenómeno de reactividad cruzada con otros antígenos o a la presencia de superantígenos en la suspención de promastigotes utilizada