Immunoproteomics of Plasmodium falciparum-infected red blood cell membrane fractions

BACKGROUND The surface of infected red blood cells (iRBCs) has been widely investigated because of the molecular complexity and pathogenesis mechanisms involved. Asymptomatic individuals are important in the field because they can perpetuate transmission as natural reservoirs and present a challenge for diagnosing malaria because of their low levels of circulating parasites. Recent studies of iRBC antibody recognition have shown that responses are quantitatively similar in symptomatic and asymptomatic infections, but no studies have characterised the plasmodial proteins targeted by this response. OBJECTIVES Our main objective was to identify Plasmodium falciparum proteins associated with iRBC ghosts recognised by antibodies in the sera of symptomatic and asymptomatic individuals in the Brazilian Amazon. METHODS We collected symptomatic and asymptomatic sera from patients residing in the Brazilian Amazon and P. falciparum iRBC ghosts to identify the proteins involved in natural antibody recognition by 2D-electrophoresis, western blotting, and high- resolution mass spectrometry. FINDINGS 2D gel-based immunoproteome analysis using symptomatic and asymptomatic sera identified 11 proteins with at least one unique peptide, such as chaperones HSP70-1 and HSP70-x, which likely are components of the secretion machinery/PTEX translocon. PfEMP1 is involved in antigenic variation in symptomatic infections and we found putative membrane proteins whose functions are unknown. MAIN FINDINGS Our results suggest a potential role of old and new proteins, such as antigenic variation proteins, iRBC remodelling, and membrane proteins, with no assigned functions related to the immune response against P. falciparum, providing insights into the pathogenesis, erythrocyte remodelling, and secretion machinery important for alternative diagnosis and/or malaria therapy.

Anticuerpos naturales contra proteínas propias y no propias de la membrana eritrocitaria / Natural antibodies against self and non-self red cell membrane proteins

Fue observada la presencia de anticuerpos naturales contra las proteínas de la membrana eritrocitaria en sueros de origen humano y animal. Se demuestran, por medio del "Western blot", las reacciones de sueros de conejos adultos contra el estroma de auto-, alo- y xeno-antígenos (humano y mono rhesus) de las membranas de los hematíes. Los sueros de conejo estaban dirigidos principalmente contra las dos espectrinas (alfa + beta) y la proteína banda 3. No hubo reacción contra estromas de tres monos rhesus. Las comparaciones entre sueros tratados y no tratados con ditiotreitol (DTT) sugieren la presencia de anticuerpos IgG. Los animales fueron clasificados de acuerdo con éstas reacciones, mediante el método de agrupamiento UPGMA. Aunque existe cierta variabilidad, probablemente debida a fenómenos estocásticos, los resultados apuntan a un reconocimiento de estructuras químicas similares entre las proteínas banda 3 y entre las espectrinas de los hematíes de conejo, mono rhesus y humanos. Esta amplia reactividad plantea el tema de cuáles serían los epitopos reconocidos por éstos anticuerpos. El presente trabajo incluye también la descripción del peso molecular de las proteínas de la membrana de los hematíes de conejo

Detección inmunoenzimática de anticuerpos en la membrana entrocitaria de pacientes politransfundidos / Inmunenzymatic detection of erythrocyte-binding inmunoglobulins in politransfused patients

Se investigó la presencia de anticuerpos unidos a la membrana eritrocitaria en 164 pacientes politransfundidos, mediante inmunanálisis enzimático. Se encontró que el 9.8% de ellos teniá un número significativamente mayor de moléculas de anticuerpo promedio por eritrocito que las personas no transfundidas. Este hallazgo no tuvo relación con el número de transfusiones recibidas, el tiempo transcurrido desde la última transfusión, la edad, esxo, ni el padecimiento subyacente de los pacientes. Se postula que la presencia de estos anticuerpos es resultado de sensibilización alogénica y se hace hincapié en la necesidad de utilizar métodos sensibles para su demostración

The interaction between the malaria parasite and the red cell membrane.

The malaria parasite intimately interacts with the host red cell membrane throughout the cycle of invasion and intracellular development. Direct interaction between the merozoite surface and the red cell membrane involves specific binding between the surface components of both cells, which leads to the subsequent endocytotic process still incompletely understood. Intracellular development of the parasite is accompanied by various changes in the structure and function of red cell membrane components. Some changes may benefit parasite survival while others trigger host immune response. An understanding of both the direct interaction between the surface components of the parasite and the red cell during invasion, and the subsequent changes in the red cell membrane following invasion, should lead to better ways of controlling malaria.

Confección de un panel de eritrocitos de prueba para la detección y caracterización de anticuerpos / Preparation of a testing erythrocyte panel for detection and characterization of antibodies

Se estudiaron 73 personas pertenecientes al grupo sanguíneo O y aptas para donar sangre, para conformar un panel de eritrocitos de prueba para la detección y clasificación de anticuerpos antieritrocitarios. Se determinaron los siguientes antígenos de grupo sanguíneo. C, c, E, e, D, C(w), K, Kp(a), Kp(b), Fy(a), Fy(b), M, N, S, s, Pl, Le(a), Le(b), Lu(b), Jk(a), Jk(b) y se realizaron pruebas de control de calidad. Se confeccionó un panel de 10 donantes con el que se pueden detectar y clasificar todos los anticuerpos antieritrocitarios de importancia clínica