Sperm-binding to the perivitelline membrane of chicken egg yolk as a functional test for sperm evaluation in dogs / Teste de ligação espermática à membrana perivitelínica da gema de ovo de galinha como avaliação funcional do sêmen de cães

During fertilization, spermatozoa interact with the zona pellucida (ZP) through the binding between the acrosome and proteins 2 and 3 (ZP2 and ZP3). The perivitelline membrane of chicken egg yolk is homologous to the mammalian ZP3, which allows the binding of sperm of several species. The aim of this study was to standardize and evaluate the efficiency of sperm-binding to the perivitelline membrane of chicken eggs as a functional method for canine semen evaluation. For this purpose, nine post-thaw sperm samples were used, which were divided into two aliquots: the first was kept in water bath at 37ºC (live sample) and the second was submitted to cold shock to induce cellular damage (dead sample). The two aliquots were mixed on five proportions, corresponding to 0%, 25%, 50%, 75%, and 100% of viable cells, and the binding test was performed by analyzing the number of spermatozoa bonded to the perivitelline membrane by means of computerized assessment of sperm motility (CASA) or conventional microscopy. Additionally, samples were submitted to sperm motility analysis, evaluation of plasmatic and acrosomal membrane integrity, and sperm mitochondrial activity. The sperm-binding test to the perivitelline membrane of chicken egg yolk was considered a feasible sperm analysis test for both fertilizing capacity and overall sperm attributes evaluation, mainly when the analysis is performed by a conventional microscope, which expands its practicality to the majority of canine reproduction laboratories.(AU)

Durante a fecundação, os espermatozoides interagem com a zona pelúcida (ZP) por meio da ligação entre o acrossomo e as proteínas 2 e 3 (ZP2 e ZP3). A membrana perivitelínica da gema de ovo de galinhas é homóloga à ZP3 de mamíferos, possibilitando a ligação espermática de diversas espécies. Este trabalho padronizou e avaliou a eficiência do teste de ligação espermática à membrana perivitelínica da gema de ovo de galinhas como avaliação funcional do sêmen de cães. Para tal, foram utilizadas nove amostras seminais previamente criopreservadas. Cada amostra foi dividida em duas alíquotas: a primeira foi mantida em banho-maria à 37ºC (vivos) e a segunda submetida a choque térmico com o intuito de induzir dano celular (mortos). As duas alíquotas foram misturadas, correspondendo a 0, 25, 50, 75 e 100% de células viáveis. As amostras foram avaliadas quanto ao número de espermatozoides ligados à membrana perivitelínica por meio da análise computadorizada da motilidade (CASA) ou microscopia convencional. Ademais, as amostras foram avaliadas quanto à motilidade espermática, integridade das membranas acrossomal e plasmática e atividade mitocondrial espermática. O teste de ligação espermática à membrana perivitelínica de ovos de galinha foi considerado um teste de análise seminal exequível tanto para avaliar a capacidade fecundante dos espermatozoides como atributos seminais gerais, especialmente quando realizado em microscopia convencional, expandindo sua praticidade para a maioria dos laboratórios de análise de sêmen canino.(AU)

Crescimento vascular em membrana do saco vitelínico e desenvolvimento embrionário de codornas japonesas (Coturnix japonica) expostas a campo magnético de baixa frequência / Vascular growth in yolk sac membrane and embryonic development of Japanese quail (Coturnix japonica) exposed to low frequency magnetic field

O objetivo deste trabalho foi observar a influência do campo magnético (CM) de baixa frequência na membrana do saco vitelínico (MSV) e no desenvolvimento do embrião de codornas japonesas (Coturnix japonica) em 72 horas de incubação. Ovos fertilizados foram expostos a nove horas consecutivas de CM, sendo um grupo a partir das 48 horas e o outro a partir das 63 horas de incubação. A quantificação da vascularização da MSV foi determinada pela obtenção da dimensão fractal por meio dos métodos de box-counting e de dimensão de informação, enquanto o peso corporal e o percentual de comprimento cefálico dos embriões foram utilizados como parâmetros de desenvolvimento embrionário. O CM não causou diferenças significativas na densidade vascular da MSV nem no desenvolvimento embrionário, quando comparados ao grupo controle...

The aim of this study was to observe the influence of the low frequency magnetic field (MF) on the yolk sac membrane (YSM) and embryonic development of Japanese quail (Coturnix japonica) in 72 hours of incubation. Fertilized eggs were exposed to 9 consecutive hours of MF, with a group from 48 hours and the second group from 63 hours of incubation. The evaluation of YSM vascularization was determined by the fractal dimensions obtained through box-counting method and information dimension, while body weight of the embryo and percentage of cephalic length were used as parameters for embryo development. The MF caused no significant differences in vessel density in the YSM, nor in the embryonic development considering the body weight and percentage cephalic length, when were compared to the control group...

Efeito dos ácidos graxos essenciais sobre lipidemia e vascularização da membrana vitelina de codornas japonesas / Effect of essential fatty acids on lipidemia and vitelline membrane vascularization in Japanese quails

Verificou-se o efeito de diferentes fontes de ácidos graxos essenciais ômega-3 e ômega-6 sobre o perfil lipídico de codornas japonesas e sobre o crescimento vascular na membrana vitelina dos embriões de aves suplementadas com óleo de peixe, 2% e 4%, e óleo de soja, 2% e 4%, em relação à dieta-controle, sem suplementação lipídica. Foi usado o método enzimático com reação colorimétrica para estimar o perfil lipídico sérico de colesterol total, triglicerídeos e HDL das aves. A vascularização na membrana vitelina foi quantificada por meio da dimensão fractal, utilizando-se o método de box-counting. A concentração de colesterol dos grupos controle e tratados não diferiu entre si. Para o HDL, o grupo que recebeu maior proporção de óleo de peixe, 4%, diferiu dos outros grupos. Os níveis de triglicerídeos das codornas suplementadas com óleo de peixe foram superiores aos dos demais grupos. A dimensão fractal da vascularização da membrana vitelina dos embriões de codornas dos grupos que receberam 4% de óleo de peixe e 4% de óleo de soja foi significativamente menor que a dos demais grupos, indicando efeitos antiangiogênicos no processo de formação vascular.

The effect of different sources of omega-3 and omega-6 essential fatty acids on serum lipid profile in Japanese quails and on vascular growth in the embryos vitelline membrane was verified. The birds were supplemented with fish oil, 2% and 4%, and soybean oil, 2% and 4%, and one control diet, without lipid supply. The enzymatic method with colorimetric reaction was used to estimate the profile of serum total cholesterol, triglycerides and HDL of the birds. Vitelline membrane vascularization was measured using the box-counting fractal dimension. The cholesterol concentration of the treated and control groups showed no difference. For HDL, the group treated with a higher proportion of fish oil, 4%, differed from other groups. The triglycerides levels of quails supplemented with fish oil were higher than the other groups. The fractal dimension of quail embryos vitelline membrane from the groups treated with 4% fish oil and 4% soybean oil was lower than the other groups, indicating antiangiogenic effects on the vascular formation process.

Early ontogenesis of the angelfish, Pterophyllum scalare Schultze, 1823 (Cichlidae)

This study describes the egg membrane structures of angelfish (Pterophyllum scalare), morpho-physiological changes during angelfish embryogenesis from activation to hatching under optimal conditions (28°C; pH 6.8), the developing larvae and fry, the effect of alkaline pH on the early developmental stages of the species, the relationship between food item size and fry survival. Egg membranes (thin, transparent, 1.67-2.18 µm thick) are covered by a sticky substance. The amber-coloured angelfish eggs were oval in shape, with average diameters of 1.436 and 1.171 mm, i.e., a mean volume of 1.033 ± 0.095 mm³. The survival rate of embryos and larvae kept in water with an elevated, slightly alkaline pH was very low: as few as 2% of the embryos survived, while in the batch kept in optimal water conditions very few eggs died. The first larvae hatched after 1288 h of embryonic development. The newly hatched larvae measured on average 2.60 ± 0.093 mm and had large (0.64 ± 0.077 mm³) yolk sacs. They attached themselves to the substrate with a secretion of thin, viscous threads, which was released from glands situated on the top of the head. The glands vanished on day 5. The 1-day-old larvae showed the first pigment cells on the body and the eyes of the 2-day-olds were already fully pigmented. Between day 4 and 5 of larval life, the larvae began feeding on live food. The 23-day-old fry looked like a miniature versions of the adults. Mortality of the angelfish larvae during their first days after hatching was higher in those fed brine shrimp (Artemia salina) nauplii than those fed protozoans and rotifers.

En este trabajo se ha descrito la estructura de las túnicas ovulares del escalar o pez ángel (Pterophyllum scalare), las modificaciones morfo-fisiológicas que transcurren durante la embriogénesis del escalar desde el momento de activización para el desove en condiciones ambientales óptimas (28ºC y pH 6,8) y, se han caracterizado las larvas y los alevines desarrollándose. Adicionalmente, se ha estudiado el efecto del pH básico del agua sobre los primeros estadios de desarrollo y la dependencia entre la cantidad de alimento y la supervivencia de los alevines. Las túnicas ovulares del escalar son finas (1,67-2,18 mm), transparentes, cubiertas de una sustancia viscosa. Los huevos de color ámbar tienen forma ovalada de diámetros medios 1,436 y 1,171 mm y de un volumen medio de 1,033 ± 0,095mm³. El porcentaje de supervivencia de embriones y de larvas en agua con pH aumentado, ligeramente básico, fue muy bajo, ya que sólo el 2% de los embriones sobrevivió, mientras que en agua de parámetros óptimos sólo algunos huevos palidecieron. Las larvas recién salidas del huevo medían 2,60 ± 0,093 mm por término medio y poseían grandes (0,64 ± 0,077 mm³) sacos vitelinos. Se han adherido al substrato mediante una secreción en forma de filamentos finos y viscosos. Esta secreción se ha desprendido de las glándulas ubicadas en la cumbre de la cabeza. Las glándulas desaparecieron al 5º día de vida de las larvas. Las larvas de un día poseían ya las primeras células pigmentarias en el cuerpo, los ojos de las larvas de dos días estaban pigmentadas plenamente. Entre el 4º y 5º día de vida las larvas empezaron a tomar alimento. Las larvas de 23 días se parecían a una versión miniaturizada de los adultos. La mortalidad de las larvas del escalar alimentadas durante los primeros días a partir del desove con larvas de artemia salina (Artemia salina) fue mayor que la de las alimentadas con protozoarios y rotíferos.

Tumor do saco vitelino testicular: estudo microcópico de 15 casos / Testicular yolk sac tumor: microscopic study of 15 cases

Os tumores de células germinativas såo as neoplasias mais comuns do testículo, correspondendo a mais de 95 por cento das neoplasias desse órgäo, sendo o tumor de saco vitelino o mais recentemente reconhecido. Em crinças, o tumor do saco vitelino é encontrado na forma pura e, em adultos, está quase que invariavelmente associado a outros tipos de tumores de células germinativas. É uma neoplasia com diversos aspectos microscópicos distintos e ainda pouco reconhecidos. Os autores revisaram 15 casos de tumores de testículo com componente de tumor de saco vitelino e observaram a distribuiçåo por várias faixas etárias, a presença de outros tipos histológicos de tumores de células germinativas associados e analisaram seus vários aspectos microscópicos. Concluem que a presença do aspecto microscópio peculiar de seio endodérmico näo é imprescindível para o diagnóstico de tumor do saco vitelino, porque está presente em menos de 3/4 dos casos (73,3 por cento). O aspecto que mais auxilia no diagnóstico desse tumor é o reticular (ou microcístico), o qual é o mais freqüentemente observado (93,3 por cento)

Vitelline envelope formation during oogenesis in Bufo arenarum

The formation of vitelline envelope (VE) during the oogenesis of Bufo arenarum (Amphibia Anura) is described. At the stage of early vitellogenesis, the first structures appear: the number of oocyte microvilli increases, and many cross sections of them are observed between the follicle cells and the oocyte. A filamentous material is observed inside the follicle cells and between the follicle cells and the oocyte. Multivesicular bodies are also found in the follicle cells, and in the perivitelline space. The micrographs also suggest the participation of the oocyte in the process of VE formation: large vesicles are present in the cortex of the oocyte, filled with an amorphous material of low and uniform electron density. Some of them are in the process of releasing their content to the perivitelline space. Many vesicles (probably resulting from microvilli fragmentation) are also observed in the perivitelline space. During late vitellogenesis the VE is a continuous structure between the layer of follicle cells and the oocyte. The filamentous material is aggregated in bundles, forming a net, and the spherical components are now either included in the orifices of the net, or free near the oocyte's surface. At the end of oogenesis, when the VE is completely formed, it is difficult to distinguish its components independently. Immunolocalization with antibodies against VE, show a positive reaction in follicle cells and oocytes in previtellogenic and full grown ovarian follicles. This analysis suggests that both the oocyte and the follicle cells are directly involved in the synthesis and secretion of the components of the vitelline envelope in Bufo arenarum.

An improved method for chemical devitellinization of X-gal stained Drosophila embryos.

In Drosophila developmental biological studies, X-gal staining is commonly employed to study the spatio-temporal expression of the lacZ reporter gene in the transformed flies or their embryos. Study of the lacZ pattern in embryos often suffers from the lack of an efficient and high yielding technique for devitellinization of X-gal stained embryos. Devitellinization techniques employed during antibody staining, in situ hybridization or embryonic cuticular preparations generally do not give satisfactory results when used for similar purpose in X-gal stained embryos. This results in the flaky appearance of the blue stain. We present here an improved chemical devitellinization technique which gives a high yield of devitellinized embryos and a better resolution of the X-gal staining pattern.

Golden hamster perivitelline spermatozoa do not show proacrosin/acrosin at the inner acrosomal membrane

It has been suggested that acrosin may function in penetration of the zona pellucida and of the highly structured extracellular matrix of the perivitelline space. In this study we investigated whether golden hamster perivitelline spermatozoa contain proacrosin/acrosin, as evidenced by the silver enhanced immunogold technique using the monoclonal antibody antiacrosin C2E5. None of the 197 spermatozoa recovered from the perivitelline space showed proacrosin/acrosin associated with the acrosomal region, suggesting that acrosin would not play a role in the penetration of the perivitelline extracellular matrix

The development of the vitelline envelope during Bufo arenarum oogenesis

La información de la envoltura vitelina del ovocito de Bufo arenarum durante la ovogénesis es estudiada a nviel ultraestructural. Se analizan diferentes estadios del ovocito en desarrollo, desde previtelogénesis hasta ovocitos totalmente desarrollados . Tres períodos pueden definirse en la formación de la envoltura vitelina. El primero se caracteriza por la aparición de un esbozo de aspecto fibrilar. Luego gran número de microvellosidades del ovocito se proyectan e invaden el esbozo inicial, observandose dispersas proyecciones citoplasmáticas desde las células foliculares. El tercer momento se caracteriza por la organización en bandas y fascículos de los elementos fibrilares estructurales, dando lugar a un estado de configuración de la envoltura vitelina muy semejante al que se encuentra en ovocitos celómicos. Los diferentes pasos del proceso de formación de la envoltura vitelina son analizados en función del estado citofisológico de las células involucradas en el proceso. A partir del cuadro observado en ovocitos y células foliculares se llega a la interpretación de que el principal responsable en la formación de la envoltura vitelina es el ovocito