Diseño y evaluación de una reacción de polimerasa en cadena (RPC) múltiple, para la identificación de bacterias causantes de meningitis aguda en líquido cefalorraquídeo de niños chilenos / Multiplex PCR assay in spinal fluid to identify simultaneously bacterial pathogens associated to acute bacterial meningitis in Chilean children

Background: Acute bacterial meningitis (ABM) is a serious disease that needs rapid diagnosis for an accurate treatment. The most important etiological agents are: Streptococcus pneumoniae, Neisseria meningitidis and Haemophilus influenzae type b. Overall pathogen detection rate in patients with ABM in Chile is 83 percent. Aim: To evaluate a Polymerase Chain Reaction (PCR) protocol for simultaneous detection of several pathogens in patients with ABM. Material and methods: We designed and evaluated a multiplex PCR protocol for simultaneous specific genes identifications of S pneumoniae (¡ytA and ply genes), N meningitidis (ctrA, crgA) and H influenzae (bexA) in cerebrospinal fluid (CSF) samples from pediatric patients with suspected diagnosis of ABM. Sensitivity, specificity and minimum detection levels of DNA were determined. Amplifications ofrDNA 16S gene was done to confirm extraction of bacterial DNA. Results: Ninety nine CSF samples were studied, 90 from children with fever and negative CSF culture, and 9 from ABM and positive culture patients. The PCR protocol had a sensitivity of 89 percent, specificity of 100 percent, positive predictive value 100 percent and negative predictive value 99 percent. Conclusions: We observed a high concordance (89 percent) between bacteriological cultures and the PCR protocol results. This diagnostic tool could increase identification of agents in specific settings such as patients previously treated with antibiotics.

Detection of Neisseria meningitidis in cerebrospinal fluid samples from suspicious cases of meningococcal meningitis using polymerase chain reaction and counterimmunoelectrophoresis

Rapid diagnosis of meningococcal disease followed by an early treatment is essential. However, blood or cerebrospinal fluid cultures may not be successful because antibiotic treatment is often started before proper specimens are collected and because bacteria may die during transportation to the laboratory. Improvements in antibiotic therapy for specific microorganisms will require the use of more than one method for immunodiagnosis. In this study a collection of cerebrospinal fluid samples from Brazilian patients was analyzed. Gram stains, culture, counterimmunoelectrophoresis and clinical evaluations for meningococcal diseases were available. The sensitivity of nested PCR (nPCR) was 73 for cerebrospinal fluid of clinically suspected cases, whereas both sensitivity and specificity were 100 when subtypes of Brazilian epidemic strains (P1.7, P1.9 and P1.15) isolated from the samples were used.

Use of oligonucleotide probes for meningococcal serotype characterization

No presente trabalho nos examinamos o uso potencial de sondas de oligonucleotideos para caracterizar sorotipos de Neisseria meningitidis sem o uso de anticorpos monoclonais (MAbs). A diversidade antigenica da proteina PorB forma a base do metodo de sorotipagem, todavia, o atual painel de MAbs utilizados, sub-estima em no minimo 50 por cento a diversidade desta proteina devido a falta de reagentes para as varias regiöes variáveis (VRs) da proteina PorB ou porque varias variantes das VRs nao sao reagentes com os MAbs disponíveis. Nos analisamos o uso de sondas de oligonucleotideos para caracterizar os sorotipos 10 e 19 de N. meningitidis. O gene porB da cepa prototipo do sorotipo 10 foi sequenciado e alinhado com outras 7 sequencias de diferentes sorotipos, e as individuais VRs foram entäo analisadas. Os resultados com as sondas 21U (VRI-A) e 615U (VR3-B) contra 72 cepas de N. meningitidis os MAbs 19 e 10 respectivamente. E possivel o uso de sondas para a caracterizaçäo dos sorotipos e podemos tipar 100 por cento da diversidade da VR do gene porB. Trata-se de um metodo simples, rapido, e especialmente util para a analise de um grande numero de amostras

Avaliaçäo do diagnóstico laboratorial da doença meningocócica em pacientes internados em um hospital sentinela no município de Campinas/SP, 1988 - 1991 / Laboratorial diagnosis evaluation of meningococcal disease in hospitalized patients of a observed hospital in Campinas/SP, Brazil, 1988 - 1991

A análise dos exames relizados em 65 casos de Doença Meningocócica internados no Hospital Alvaro Ribeiro, Campinas/SP, de 1988 a 1991, mostrou que em 56,9(por cento) dos casos foi possível identificar os sorogrupos de Neisseria meningitidis, onde houve predominância do meningococo sorogrupo B, e em 7,7(por cento) foi possível detectar somente o diplococo Gram negativo. Encontrou-se valores de positividade semelhante para bacterioscopia e cultura de líquido céfalorraquidiano (LCR), 61,7(por cento) e 61,5(por cento) respectivamente. A maior positividade, na associaçäo dos exames, foi encontrada na bacterioscopia e cultura, 74,5(por cento), com valor aproximado na associaçäo de bacterioscopia, cultura e imunoeletroforese cruzada (IEC), 73,8(por cento). Os resultados das associaçöes de bacterioscopia e IEC e de cultura e IEC foram mais baixos e semelhantes: 62,0(por cento) e 62,2(por cento) respectivamente. Foi baixa a positividade dos exames de IEC, 34,8(por cento)

Bacterial antigen detection in cerebrospinal fluid by the latex agglutination test

Oitenta amostras purulentas de liquido cefalorraquidiano (LCR) de pacientes com evidencia clinica de meningite foram estudadas empregando-se Kit Directigen de aglutinacao de latex (AL) para demonstrar antigeno bacteriano no LCR. Os resultados modtraram que o teste de AL apresentou melhor desempenho diagnostico do que bacterioscopia atraves da coloracao de Gram, cultura e imunoeletroforese cruzada (IEC) em relacao a Neisseria meningitidis grupos b e C, e ao Haemophilus influenzae tipo b, e melhor do que coloracao de Gram e cultura quando Streptococcus pneumoniase foi avaliado...

Fracaso del tratamiento con penicilina en un caso de meningitis por Neisseria meningiditis / Failure of treatment with penicillin in a case of meningitis by Neisseria meningitidis

Neisseria meningitidis fue considerada hasta 1985 como uniformemente sensible a penicilina (Concentración inhibitoria mínima, C.I,M., ó 0,06 mg/L), y la mortalidad relacionada con meningitis meningocóccica ha sido baja. En los últimos años se han aislado cepas moderadamente sensibles a penicilina (C.I.M.:0,12-1 mg/L) en España, Inglaterra, Sudáfrica, Estado Unidos y Argentina. Se presenta el caso de un joven de 16 años de edad que se interna con diagnóstico de meningitis meningocóccica, obteniéndose líquido cefalorraquídeo con cultivo positivo para Neisseria meningitidis grupo C. Se inicia tratamiento con penicilina G (300.ooo UI/Kg). A los tres días de tratamiento se efectúa una nueva punción lumbar, obtiéndose desarrollo de N. meningitidis grupo C. La C.I.M. demonstró que el germen era moderadamente sensible a penicilina, probablemente debido a modificaciones en las proteínas ligadoras de penicilina. Se cambia el esquema antibiótico a ceftriaxona (50 mg/Kg). El paciente fue dado de alta, sin secuelas neurológicas, después de 14 días de tratamiento endovenoso. Este caso ilustra de qué manera, pequeños cambios en la sensibilidad de N. meningitideis pueden ser clínicamente significativos

Aspectos dos líquidos cefalorraquidianos nas meningites bacterianas / The cerebrospinal fluid in bacterial meningitis

Samples of 1815 cerebrospinal fluid (CSF) were studied in a meningitis outbreak during 1989 in S ao Paulo, Brazil. Neisseria meningitis 56 per cent with 44 per cent type B, Haemophilus influenzae 17 per cent , from which 72 per cent in children (days to 3-year-old) and Streptococcus pneumoniae 14 per cent from which 60 per cent in children (day to 1-year-old) of 443 (24 per cent ) of all strains. Cytochemistry study showed: purulent or turbidity aspects in 70 to 79 per cent positive bacterioscopy or culture of CSF; white cells count > 500/mm3; glucose < 45 mg/dl; protein > 90 mg/dl in 90 per cent of all patients. We concluded that: CSF prognostic factors: (aspect and cytochemistry) were correlated with bacterial meningitis. Bacterioscopy and positive cultures were correlated to NM, SP and HI isolation from these patients (Goodman Test)

Meningite meningococica no lactente jovem: relato de dois casos / Meningococcal meningitis in young infants: report of two cases

Os autores apresentam dois casos de meningite meningococica em lactentes jovens. Discute-se a etiologia do processo nessa faixa etaria.

Doença grave, diagnóstico precoce: meningite purulenta e teste de aglutinaçäo de partículas de látex / Grave disease, early diagnosis: bacterial meningitis and latex fixation tests

Desenvolveu-se um estudo transversal controlado prospectivo com o objetivo de avaliar, de forma independente e "cega" e em três etapas distintas e complementares, o desempenho do teste de aglutinaçäo de partículas de látex no diagnóstico etiológico das meningites determinadas pelo H. influenzae b, S. pneumoniae e N. meningitidis A e C em 284 crianças (casos e controles) com idade compreendida entre 3 meses e 14 anos. Na primeira, o teste em estudo foi comparado com um padräo ouro e revelou sensibilidade, especificidade, valor preditivo positivo, valor preditivo negativo e acurácia equivalentes a 92,7 por cento, 100,0 por cento, 95,0 por cento e 96,9 por cento, respectivamente. Na segunda estabeleceu-de uma comparaçäo com o exame quimiocitológico liquórico, quando entäo a sensibilidade, o valor preditivo negativo e a acurácia reduziram para 63,3 por cento, 70,8 por cento e 80,6 por cento, mantendo-se inalteradas as proporçöes da especificidade do valor preditivo positivo. Na última etapa, associou-se ao teste em estudo à bacterioscopia direta pelo Gram, confrontando-se ambos os métodos, com a cultura e contraimunoeletroforese, visando verificar o comportamento de cada dupla de exames no diagnóstico etiológico, independente do microorganismo causal. Näo ocorreu diferença estatisticamente significante na performance de cada uma dessas duplas de métodos laboratoriais (p=.79). Considerando que além do desempenho observado nesta investigaçäo, o teste em estudo reune outras vantagens como rapidez no fornecimento dos resultados e simplicidade de execuçäo e interpretaçäo, conclui-se que o mesmo representa um instrumento diagnóstico valioso tanto do ponto de vista clínico-individual como em programas de saúde coletiva.

Dx de laboratorio de estreptococos (Lancefield C y G) / Laboratory diagnosis of streptococcus (Lancefield C and G)

La presencia de microrganismos en un líquido corporal normalmente estéril como la sangre, puede representar la evidencia de una infección activa que tiene el riesgo de propagarse a otros órganos o tejidos de la economía; por ésto, el laboratorio de microbiología clínica cumple una función muy importante en el diagnóstico, al aislar a los agentes causales mediante hemocultivos

Dexametasona no tratamento da meningite meningocócia / Dexamethasone in the treatment of meningococcal meningitis

Analisou-se o efeito da dexametasona incluída no esquema terapêutico da meningite meningocócica, estudando-se 58 doentes. Alternadamente, de acordo com a ordem de internaçäo, a dexametasona foi adicionada (aplicando-se por via endovenosa, em doses padronizadas e com intervalos regulares) ao esquema terapêutico de 27 pacientes (grupo A); o grupo B (grupo controle) foi constituído por 31 pacientes. Os doentes dos dois grupos foram tratados com penicilina G cristalina. Näo foram incluídos no estudo doentes com choque, manifestaçöes sistêmicas de meningococcemia e os que morreram nas primeiras 48 horas de tratamento. Nos casos estudados näo se verificou a ocorrência de óbitos ou evidência clínica de seqüelas, durante o período de tratamento. No grupo de doentes que receberam dexametasona observou-se maior freqüência de completa normalizaçäo do líquido cefalorraquidiano (LCR) colhido no 9§ dia de tratamento; além disso, verificou-se nesse grupo maior freqüência de normalizaçäo da concentraçäo de proteínas e de glicose no LCR colhido no 5§ dia de tratamento; também se observou tendência para reduçäo mais rápida do número total de leicócitos e da percentagem de neutrófilos no LCR do 5§ dia

El caso de infecciosas: meningitis meningococcica / The infections case: meningococcal meningitis

Se presenta un caso de Meningitis meningocóccica en un paciente del sexo masculino, de 19 años de edad. Se comprobó el diagnóstico con el examen del L.C.R. El tratamiento a base de penicilina cristalina y cloranfenicol produjo la mejoría del paciente