Detecção do grupo mycoplasma mycoides por imunoperoxidase indireta (IPI) e PCR-REA em conduto auditivo de bovinos / Detection of mycoplasma mycoides cluster by indirect immunoperoxidase (IPI) and PCR-REA in the ear canal of bovines

O Grupo Mycoplasma mycoides (GMM) foi diagnosticado por PCR-REA e imunoperoxidase indireta (IPI) em amostras de lavados de conduto auditivo de bovinos no Estado do Rio de Janeiro, Brasil. 60 bovinos foram selecionados aleatoriamente. As lavagens foram feitas com uso de seringas estéreis contendo um volume de 60 mL de solução salina tamponada (PBS pH 7.2). As amostras obtidas foram estocadas em glicerol (1:2) e congeladas a 20ºC até uso. Estas amostras foram diluídas até 10-5 e repicadas em meio Hayflick modificado, sólido e líquido, sendo incubados a 37ºC por 48-72 horas. As placas foram mantidas em microaerofilia e observadas diariamente, para visualização das colônias típicas em ôovo-fritoõ. Das 60 amostras cultivadas, 48 (80,00 por cento) foram positivas para Mycoplasma spp. A prevalência obtida para o GMM na IPI foi de 20,0 por cento (12/60) enquanto na PCR-REA foi de 41,7 por cento (25/60). Das cepas tipificadas pela IPI 58,3 por cento (7/12) foram M. mycoides subsp. mycoides LC e 41,7 por cento (5/12) foram M. capricolum. Na PCR-REA o grupo M. mycoides foi confirmado pela visualização de um amplicon de 785bp, compatível com este grupo. O valor encontrado no teste Kappa para associação entre estes testes foi de 0,14 (P>0,05. Na clivagem do produto da PCR com a enzima de restrição AluI, de cepas de referências e dos isolados de ouvido os fragmentos obtidos foram de 81, 98, 186 e 236pb, mas não de 370pb, que é específica para o agente da Pleuropneumonia Contagiosa Bovina. A presença de espécies de micoplasmas no conduto auditivo de bovinos assintomáticos representa um risco para propagação de Mycoplasma spp. entre rebanhos bovinos no Brasil.

Mycoplasma mycoides cluster (MMC) was diagnosed by polimerase chain reaction-restriction endonuclease analysis (PCR-REA) and indirect immunoperoxidase (IPI), both, carried out in flushing from external ear canal, collected from bovine at slaughter time in the State of Rio de Janeiro, southeastern, Brazil. A total of 60 bovines were randomly selected. Sterile syringes (60mL) loaded with buffer solution (PBS, pH 7.2) were used for the ear canal flushing. The obtained samples were stored in glycerol (1:2) and frozen at -20ºC until use. These specimens were diluted up to 10-5, inoculated in liquid and solid modified Hayflickïs media and incubated at 37ºC for 2-3 days. The plates were kept in a microaerophilia condition and examined every two days under a stereomicroscope for the presence of typical colonies ôfried-eggõ. In this study, 35 strains selected in agreement with their biochemistry and physiologic proprieties, were used. From the 60 cultivated samples, 48 (80.00 percent) were positive for Mycoplasma spp. Under IPI the prevalence obtained for MMC was 20.0 percent (12/60) while by PCR-REA it was 41.7 percent (25/60). The IPI typing of these isolates resulted in 58.3 percent (7/12) for M.mycoides mycoides LC and 41.7 percent (5/12) for M. capricolum. PCR-REA for MMC was confirmed by the amplicon size of 785bp, compatible with this group. The Kappa value for the association between these two tests was 0.14 (p>0.05). After restriction analysis with AluI in all MMC strains the fragments size obtained were of 81, 98, 186 and 236bp, but not of 370bp that is compatible with Mycoides mycoides mycoides SC of bovine type. The presence of mycoplasmas species in the ear canal of asymptomatic bovines represent a risk of subsequent propagation of Mycoplasma spp. among bovine herds in Brazil.

Importância da resistência osmótica na estabilidade do antígeno celular de Mycoplasma mycoides subesp. mycoides tipo LC em ensaio imunoenzimático (ELISA) / Osmotic resistance importance on Mycoplasma mycoides subsp. mycoides l type cellular antigen LC stabilization on immunoenzymatic assay (ELISA)

O trabalho avalia a importância das condições de armazenamento do antígeno celular de Mycoplasma Mycoides subesp. Mycoides Tipo LC no teste de ELISA. Os resultados mostram a importância da preservação da integridade da célula micoplásmica na estabilidade do antígeno empregado no teste.

Diferenciaçäo de tipos de Mycoplasma mycoides na etiopatogenia da micoplasmose caprina / Differentiation of Mycoplasma mycoides types on the etiopathogeny of goat mycoplasmosis

Dentre as várias espécies e subespécies de micoplasma, isoladas de caprinos, Mycoplasma mycoides subesp. mycoides e M. mycoides subesp. capri, säo considerados importantes patógenos, por produzirem doenças com diversas manifestaçöes clínicas (infecçöes sistêmicas, pneumonia, artrite, agalaxia etc.). O propósito desse estudo foi pesquisar a presença dessas subespécies em caprinos com diagnóstico de micoplasmose, oriundos de uma propriedade localizada em Nova Friburgo, município do estado do Rio de Janeiro. Na coleta de espécimes para o diagnóstico, usou-se o método de lavagem do conduto auditivo externo de 20 animais, utilizando-se o meio líquido de Hayflick. Após a obtençäo dos lavados de ouvido, as amostras foram cultivadas segundo os procedimentos padröes. Os cultivos foram examinados em microscópio estereoscópico, visando a observaçäo de colônias típicas de micoplasma. Essas colônias foram coradas pelo método de Dienes, submetidas aos testes de sensibilidade à Digitonina e Imunoperoxidase Indireta (IPI), para posterior identificaçäo. Todos os caprinos examinados apresentaram cultivo positivo para Mycoplasma spp., i.é, 100 por cento (20/20) e desses, 80 por cento (16/20) foram positivos para M. mycoides. Das amostras positivas para M. mycoides, 70 por cento (14/16) o foram para M. mycoides subesp. mycoides tipo Colônia Grande (®Large Colony-LC¼), 45 por cento (9/16) para M. mycoides subesp. mycoides tipo Colônia Pequena (®Small Colony-SC¼) e 70 por cento (14/16) para M. mycoides subesp. capri, onde 12 dos 16 caprinos examinados portavam mais de uma subespécie e/ou tipo no conduto auditivo. No presente estudo foram encontrados micoplasmas com características de ambas as subespécies e tipos (LC e SC), no conduto auditivo externo de caprinos, sugerindo a necessidade de estudos adicionais para elucidaçäo da etiopatogenia das micoplasmoses caprinas.

Characterization and Sequence Analysis of Helicobacter pylori Cryptic Plasmid (pHP489)

The DNA sequence of a plasmid named pHP489 of Helicobacter pylori strain 489 was determined and analyzed to characterize its replication apparatus. The pHP489 plasmid consisted of 1,222 bp and had an overall G+C content of 33.1%. An ORF was predicted to encode the putative protein of 239 amino acid residues (28 kDa). A putative ribosomal binding site and a potential terminator sequence are located upstream and downstream of the ORF, respectively. However, the consensus sequence for a promoter in upstream of ORF was not found. A potential dna A box was found at 317 nt upstream of a start codon and followed by two-57 bp directed repeats and an inverted repeat. The DNA homology was found in the regions of less than 90 bp among pHPK255, pHPM180, and pHel1 of other H. pylori plasmids and Mycoplasma mycoides plasmids. pHP489K that was produced by pHP489 sequence and C. jejuni derived aph(3')-III, was transformed to various H. pylori isolates and were stably maintained in the H. pylori host without the addition of selective antibiotics for the 30-times subcultues. The plasmic vector, in which the ORF region of pHP489 DNA was deleted, could be transformed into H. pylori. However, the plasmid vector, whose the direct repeats region of pHP489 DNA was deleted, failed to be transformed. The direct repeats region of pHP489 DNA was confirmed to be bound with cytosolic factors of H. pylori. These results showed that the direct repeats region of pHP489 DNA is an essential apparatus by which the plasmid could be replicacted in H. pylori. And pHP489 plasmid was supposed to be replicated by host factors rather than plasmic-encoded factors.

Lesiones anatomo e histopatologicas compatibles con neumoni enzootica porcina a nivel de matadero de Santa Cruz / Anatomic and histologic lesions consistent with endozootic pig neumonia in Santa Cruz

Se determino lesiones anatomo e histopatologicas compactibles con neumonia enzootica porcina (NEP) en cerdos faenados en los mataderos de Santa Cruz de la Sierra, en los meses de agosto y Septiembre de 1995. El muestreo se realizo dos veces por semana; de todos los animales faenados en el dia, se procedio al examen macroscopico de los pulmones en el momento de la evisceracion y se tomaron muestras a los que presentaban lesiones macroscopicas compatibles con NEP; estas fueron procesadas y se utilizo la tecnica de histopatologia de rutina. Los resultados obtenidos se sometieron a un analisis estadistico de comparacion de proporciones mediante la prueba de Chi Cuadrado. De 1000 pulmones inspeccionados 237 (23,7 por ciento) resultaron con lesiones macroscopicas