Avaliação histológica e histomorfométrica da regeneração óssea a partir da utilização de biomateriais em tíbias de ovinos / Histological and histomorphometric evaluation of bone regeneration with biomaterial in the tibia of sheep

Falhas ósseas são comumente encontradas na medicina veterinária em diferentes enfermidades, principalmente por traumas em grandes animais. Frequentemente faz-se necessário auxiliar este reparo tecidual para melhor correção desta falha. Os biomateriais foram desenvolvidos para cumprir esta função. A fim de avaliar o comportamento celular perante estes substitutos ósseos, a realização de testes in vivo é fundamental. A partir da observação da unidade morfofuncional do tecido é possível avaliar a quantidade e a qualidade do tecido neoformado. Atualmente, em estudos ortopédicos, os ovinos são considerados animais de escolha como modelo experimental. Falhas ósseas foram realizadas experimentalmente em ovinos, onde foram implantados biomateriais à base de quitosana, hidroxiapatita e colágeno. Após 60 dias foi realizada biopsia no local do reparo tecidual e por meio da histomorfometria da matriz orgânica, da análise descritiva da microscopia de luz e da microscopia eletrônica de transmissão, o tecido neoformado foi avaliado e comparado. Na histomorfometria, não houve diferença significativa quanto à quantidade de tecido neorformado do grupo controle e do grupo com biomaterial, porém quando comparado ao osso pré-existente, retirado no momento da confecção da falha, a área de matriz óssea foi menor. Na descrição da microscopia de luz e em maiores detalhes na análise ultra estrutural, observou-se o biomaterial em contato íntimo com o tecido neoformado, sugerindo boa biocompatibilidade. Foi possível observar o padrão da reparação tecidual, onde o membro controle e o membro com biomaterial não diferiram quanto à arquitetura tecidual, porém nas amostras com o implante do biomaterial foi identificada a presença do mesmo. Todas estas informações sugerem que o biomaterial não prejudicou a regeneração óssea, apresentou boa biocompatibilidade e denota potencial para auxiliar na rotina ortopédica de grandes animais.(AU)

Bone defects are commonly found in veterinary medicine through different disease such as trauma, especially in large animals. Frequently it is necessary to assist this tissue repair for better regeneration. Biomaterials in general are designed to this function. In order to understand the bone cells in the presence of bone substitutes, tests in vivo are essential for these studies. The quantity and quality of new tissue formation can be assessed by observation of tissue morphofunctional unit. Currently, in orthopedic studies sheep are considerated animals of choice for experimental development. Bone defects were performed experimentally in sheep and were implanted chitosan, hydroxyapatite and collagen biomaterials. After 60 days, biopsy was performed at the site of tissue repair and the new tissue formation was described, evaluated and compared by organic matrix bone histomorphometry and electronic transmission microscopy. After hystomorfometry analysis there was no difference between control group and biomaterial group, but when compare with pre-existent tissue, the values are smaller. In descriptive analysis was observed intimate contact with biomaterial and new tissue formation suggesting biocompatibility. It observed the pattern of tissue repair in control group and biomaterial group did not differ in the architecture tissue. However, in the biomaterial group was identified presence of the biomaterial in the specimen. All these data suggest that the biomaterial did not impair bone regeneration, had good biocompatibility and potential to assistant in orthopedic routine of large animals.(AU)

Sheep Model for Uterine Transplantation: The Best Option Before Starting a Human Program

OBJECTIVE: This study reports the first four cases of a uterine transplant procedure conducted in sheep in Latin America. The aim of this study was to evaluate the success of uterine transplantation in sheep. METHOD: The study was conducted at Laboratory of Medical Investigation 37 (LIM 37) at the University of São Paulo School of Medicine. Four healthy mature ewes weighing 40-60 kg were used as both the donor and recipient for a transplant within the same animal (auto-transplant). Institutional guidelines for the care of experimental animals were followed. RESULTS: The first two cases of auto-transplant were performed to standardize the technique. After complete uterine mobilization and isolation of the blood supply, the unilateral vascular pedicle was sectioned and anastomosed on the external iliac vessels. After standardization, the protocol was implemented. Procurement surgery was performed without complications or bleeding. After isolation of uterine arteries and veins as well as full mobilization of the uterus, ligation of the distal portion of the internal iliac vessels was performed with subsequent division and end-to-side anastomosis of the external iliac vessels. After vaginal anastomosis, the final case presented with arterial thrombosis in the left uterine artery. The left uterine artery anastomosis was re-opened and flushed with saline solution to remove the clot from the artery lumen. Anastomosis was repeated with restoration of blood flow for a few minutes before another uterine artery thrombosis appeared on the same side. All four animals were alive after the surgical procedure and were euthanized after the experimental period. CONCLUSION: We describe the success of four uterine auto-transplants in sheep models.

Intoxicação espontânea por antibióticos ionóforos em ovinos no Rio Grande do Sul / Spontaneous poisoning by ionophores in sheep in Rio Grande do Sul, Brazil

Um surto de intoxicação espontânea por antibióticos ionóforos em ovinos da região Central do Rio Grande do Sul é descrito. Os 16 ovinos afetados estavam em campo nativo e ingeriram acidentalmente um aditivo alimentar para frangos contendo 250g/kg de narasina. Os sinais clínicos consistiam de fraqueza, incoordenação, dispnéia, secreção nasal, decúbito e morte em poucas horas. Um ovino apresentou urina escura. Macroscopicamente havia ascite, hidrotórax, edema pulmonar e palidez hepática. Discreto grau de degeneração muscular na musculatura esquelética dos membros pélvicos e torácicos foi observado histologicamente. O diagnóstico de intoxicação por narasina foi realizado com base no histórico (ingestão de aditivo alimentar contendo narasina) e nos achados clinico-patológicos.

An outbreak of spontaneous ionophore toxicity in sheep grazing in native pasture in Rio Grande do Sul state, Brazil is described. Sixteen sheep which had accidental access to a chicken feed additive containing 250g/kg of narasin were affected. Clinical signs consisted of weakness, incoordination, dyspnea, nasal discharge, recumbency, and death in a few hours. One sheep showed dark red urine. Grossly there were ascites, hydrothorax, pulmonary edema, and hepatic paleness. Discrete skeletal muscle degeneration was observed histologically in the muscles of the pelvic and thoracic limbs. The diagnostic of narasin toxicosis was based on history (ingestion of feed additive containing narasin), clinical, and pathological findings.

Avaliação de técnicas de biópsia renal em ovinos / Evaluation of renal biopsy techniques in sheep

Devido à escassez de trabalhos sobre biópsias renais em ovinos foi desenvolvido um estudo comparativo entre três técnicas de biópsia renal nesta espécie. Neste estudo foram utilizadas nove ovelhas (26,64 kg ±4,86) mestiças (Santa Inês) em procedimentos seriados, com intervalos consecutivos de uma semana. Foram avaliados os aspectos clínicos, achados de patologia clínica, o peso das amostras renais, a qualidade histológica, o número de glomérulos e a presença de artefatos no corte histológico da técnica de biópsia percutânea cega, da biópsia guiada por ultrassonografia e do procedimento videolaparoscópico. Não foram observadas alterações hematológicas ou bioquímicas relevantes nos animais submetidos às biópsias renais e as manifestações clínicas detectadas foram leves e transitórias, exceto por um caso de obstrução uretral por coágulo sangüíneo. A técnica percutânea cega foi relacionada à maior ocorrência e gravidade de hematúria, com danos mais graves ao tecido renal e com o único caso de obstrução do fluxo urinário. Na técnica videolaparoscópica, o peso médio das amostras foi superior e a hematúria discreta e transitória. Verificou-se relação direta entre a ocorrência de hematúria grave e a presença de epitélio de transição nas amostras e o número de tentativas utilizado para a obtenção dos fragmentos.

Due to lack of studies about renal biopsies in sheep, a comparative study was performed for three renal biopsy techniques in this species. In this study, nine crossbred (Santa Inês) ewe lamb (26.64 kg ±4,86) were used in serial procedures with one week consecutive intervals. The clinical aspects, clinical pathological findings, renal sample weights, histology quality, number of glomeruli, and the presence of artifacts in the histology slices were evaluated using the techniques of percutaneous blind biopsy, ultrasound guided biopsies and of videolaparoscopic procedure. No relevant hematological or biochemical alterations were observed in the animals subjected to renal biopsies and the clinical manifestations detected were slight and transitory, except for one case of urethral obstruction by blood clot. The blind technique was related to more frequent and severe cases of hematuria, with more severe damage to the renal tissue and to the only case of obstruction of the urinary flow. In the videolaparocopic technique, the average weight of the samples was superior and hematuria was slight and transitory. A direct relation was seen between occurrence of severe hematuria and presence of transitional epithelium in the samples and the number of trials used for obtainment of fragments.

Investigação dos efeitos do emprego de celulose biossintética e matriz dérmica humana acelular na correção da meningomielocele intra-útero: estudo comparativo em fetos de ovelhas / Comparative study of byosinthetic cellulose (BC) and human acellular dermal matrix (HADM) in the in utero repair of myelomeningocele in fetal sheep model

Objetivo: Estudar os efeitos do emprego de dois materiais consideravelmente diferentes quanto à origem e custo na correção intra-uterina da meningomielocele criada experimentalmente em feto de ovino. Métodos: Em 36 fetos de ovinos foi criado um defeito aberto de tubo neural, com 75 de dias de gestação. Os casos foram divididos em três grupos: o controle onde o defeito não foi corrigido, grupo corrigido A onde o material utilizado para cobrir a medula exposta foi a matriz dérmica humana acelular (MDHA) e o grupo corrigido B onde o material foi a celulose biossintética (CB). Após a correção realizada com 100 dias, os fetos eram mantidos intra-útero até o termo da gestação. Os sacrifícios foram realizados com 140 dias e a coluna fetal era submetida à análise macro e microscópica onde foi observada a aderência dos materiais à pele, medula ou tecido nervoso remanescente. Resultados: Na fase inicial (piloto), 11 fetos foram operados e 4 sobreviveram (37%). Na segunda fase (estudo) 25 fetos foram operados e 17 sobreviveram (68%). No grupo de estudo, 6 fetos não foram submetidos à correção (grupo controle), 11 casos foram corrigidos e ocorreu 1 perda fetal. Do total de 10 casos, 4 constituíram o grupo A e 6, o grupo B. À macroscopia observou-se deslizamento da pele e tecidos subjacentes sobre a CB em todos os casos onde ela foi empregada e isto não ocorreu em nenhum dos casos onde a MDHA foi utilizada. Para comparar a aderência, foram considerados 4 casos do grupo A e 4 do grupo B. A aderência, caracterizada pela migração de células do hospedeiro e proliferação de vasos para dentro da MDHA, foi observada em 100% dos casos do grupo A e em nenhum caso no grupo B (p < 0,05). No grupo B observou-se formação de uma camada de fibroblastos ao redor do material, protegendo a medula, caracterizando a formação de uma "neoduramater"...

Purpose: The aim of this study was to compare the effectiveness of two dura-mater substitutes, namely human acellular dermal matrix (HADM) and biosynthetic cellulose (BC), in repairing, in utero, surgically-induced meningomyelocele (MMC) in fetal sheep. Methods: A neural tube defect was created at 74-77 days gestation in 36 fetal sheep. They were divided into 3 groups, the control group that did not receive pre-natal corrective surgery, and the other two groups that received corrective surgery using HADM (Group A) or BC (Group B). Both materials were used as a dura-mater substitutes between the neural tissue and the sutured skin. Correction was performed at gestation day 100 and the fetuses were maintained in utero until term. Sheep were sacrificed on gestation day 140. The fetal spine was submitted to macro and microscopic analysis. At microscopy, adherence of the material to the skin and neural tissue was analyzed. Results: In the initial phase (pilot), experimentally-induced MMC was performed on 11 fetuses and 4 survived (37%). In the second phase (study), 25 fetuses received surgery and 17 survived (68%). In the study group, 6 fetuses did not undergo repair (control group), 11 cases were submitted to corrective surgery (experimental group) and one fetal loss occurred. Of the surviving cases in the experimental group, 4 constituted Group A and 6 in Group B. Macroscopically, skin and underlying tissues where easily displaced from the BC in all cases it was used; in contrast, HADM adhered to these tissues. To compare the adherence, 4 cases from Group A and 4 in Group B were studied. We observed adherence, host cell migration and vessel proliferation into the HADM all sections from Group A and this aspect was not present in any cases in Group B (p < 0.05). In Group B, we also observed that a new fibroblast layer formed around the BC thus protecting the medulla and constituting a "neoduramater"...

Validação do feto ovino como modelo experimental para o defeitomeningomielocele humana: estudo piloto / Validation of the ovine fetus as an experimental model for the human myelomeningocele defect: a pilot study

O objetivo deste trabalho foi produzir um defeito semelhante meningomielocele humanaem feto de ovinos, validando este modelo experimental, em nosso meio. Estudo prospectivo com 12 ovelhas de cruzamento das raças Hampshire e Down, onde um defeito na coluna foi criado cirurgicamente com 75 a 77 dias de gestação. A técnica consistiu emhisterotomia com exposição das patas traseiras e cauda até a metadeda coluna fetal. Foram retirados pele, musculatura paravertebral e quatro arcos vertebrais posteriores, expondo a medula. A dura foi aberta e uma incisão até o canal medular foi realizada. O sacrifício foi realizado com 139 dias de gestação para avaliação fetal. O sistemanervoso central foi submetido a ressonância magnética post-morteme a coluna foi submetida a exame anatomopatológico. O defeito foi criado em 13 fetos e 5 sobreviveram. A idade gestacional média da necropsia foi de 121,6 dias (variando de 93 a 145 dias).Macroscopicamente, o defeito estava presente em quatro casos. A microscopia revelou achatamento da medula, com desaparecimentodo canal medular e desarranjo da citoarquitetura medular com apoptose neuronal e/ou fusão da pia e dura-máter. A ressonância magnética demonstrou herniação do cerebelo para o canal cervical e siringomelia. Conclusões: O defeito produzido foi muito semelhante à meningomielocele em fetos humanos, levando inclusive àmalformação de Arnold-Chiari. A ressonância magnética postmortem,utilizada de forma inédita neste estudo, demonstrou ser uma excelente alternativa para demonstrar a presença da herniação do cerebelo. A técnica para produzir o defeito foi padronizada em nosso meio.

Oclusión traqueal intraluminal por vía endoscópica en modelo experimental de hernia diafragmática congénita / Intraluminal tracheal occlusion using endoscopy in experimental model of congenital diaphragmatic hernia

La hernia diafragmática congénita (HDC) está asociada a 40-60 por ciento de mortalidad perinatal, fundamentalmente debido al desarrollo de hipoplasia pulmonar. El fracaso de la corrección in utero de la HDC por cirugía fetal abierta y el descubrimiento de que la oclusión de la tráquea fetal puede evitar hipoplasia pulmonar, ha producido un nuevo enfoque terapéutico. El objetivo de este trabajo era evaluar una técnica mínimamente invasiva de oclusión intratraqueal en un modelo experimental de hernia diafragmática. Se creó una HDC en fetos de ovejas bajo condiciones de antisepsia a los 90 días de gestación. En el grupo experimental se colocó un dispositivo oclusivo intratraqueal por vía endoscópica a los 105 días. Fetos con hernia sin tratamiento (grupo control positivo) y sanos (grupo control negativo) sirvieron de comparación. El embarazo se interrumpió por cesárea a los 135 días de gestación (término 140 días), y los fetos fueron sacrificados. La presencia o ausencia de hipoplasia pulmonar se determinó mediante análisis histológico de los pulmones. La tráquea se examinó para evaluar posibles efectos traumáticos del dispositivo. Veintiocho ovejas fueron intervenidas, pero sólo 13 completaron el protocolo. La oclusión traqueal evitó el desarrollo de hipoplasia pulmonar en 8/11 (72 por ciento) fetos experimentales. No hubo traumatismo traqueal importante en 6 fetos estudiados, excepto una perforación. Conclusión: El desarrollo de hipoplasia pulmonar por hernia diafragmática puede evitarse mediante la colocación de un dispositivo oclusivo intratraqueal. Estos experimentos pueden servir de base para el posible tratamiento de fetos humanos con hernia diafragmática congénita mediante técnicas mínimamente invasivas

Anestesia geral em ovinos submetidos a cirurgia fetal experimental / General anesthesia in sheep submited to fetal experimental surgery

Foram utilizadas dez ovelhas prenhas, submetidas a cirurgia intra-uterina, sendo que o protocolo anestésico incluiu o cloridrato de levomepromazina, tiopental sódico e halotano. A finalidade do emprego da anestesia geral foi a de conferir adequada condiçäo anestésico-cirúrgica. Foram monitorados os dados paramétricos de freqüência cardíaca e respiratória, pressäo arterial média e ocorrência ou näo de refluxo gastro-esofágico. Os resultados demonstraram uma estabilidade cárdio-respiratória e silêncio abdominal adequados ao ato operatório