RESUMO
Abstract Serological testing and culling infected animals are key management practices aiming eradication of bovine leukemia virus infection. Here, we report the development of an indirect ELISA based on BLV recombinant capsid protein (BLVp24r) to detect anti-BLV antibodies in cattle serum. The BLVp24r was expressed in Escherichia coli and purified by affinity chromatography, and then used to set up the ELISA parameters. The Polysorp ® plate coated with 50 ng of antigen/well and bovine serum diluted 1:100 gave the best results during standardization. Using sera from infected and non-infected cattle we set up the cutoff point at 0.320 (OD450 nm) with a sensitivity of 98.5% and specificity of 100.0%. Then, we tested 1.187 serum samples from dairy (736 samples) and beef cattle (451 samples) with unknown status to BLV. We found that 31.1% (229/736) and 9.5% (43/451) of samples amongst dairy and beef cattle, respectively, had IgGs to BLV. The rate of agreement with a commercial competitive ELISA was 84.3% with a κ value of 0.68. Thus, our BLVp24r iELISA is suitable to detect BLV infected animals and should be a useful tool to control BLV infection in cattle.
Assuntos
Animais , Bovinos , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática/métodos , Testes Sorológicos/métodos , Leucose Enzoótica Bovina/diagnóstico , Vírus da Leucemia Bovina/imunologia , Proteínas do Capsídeo/imunologia , Anticorpos Antivirais/sangue , Proteínas Recombinantes/análise , Proteínas Recombinantes/genética , Proteínas Recombinantes/imunologia , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática/instrumentação , Sensibilidade e Especificidade , Leucose Enzoótica Bovina/sangue , Leucose Enzoótica Bovina/virologia , Vírus da Leucemia Bovina/isolamento & purificação , Vírus da Leucemia Bovina/genética , Proteínas do Capsídeo/análise , Proteínas do Capsídeo/genéticaRESUMO
El vírus de Epstein-Barr (VEB) es el principal agente oncogénico linfotrópico dentro de la família Herpesviridae y se encuentra mundialmente distribuído. La primoinfección se produce en adultos jovenes y se manifesta como mononucleosis infecciosa. La detección de anticuerpos anti-viral cápside antigen (VCA) indica infección previa o presente com VEB. Además, se observan títulos elevados de anticuerpos anti-VCA en las enfermidades neoplásicas asociadas al VEB como los linfomas, em indivíduois HIV-positivos. El objetivo de este estúdio fue el desarrollo y puesta a punto de improntas de células P3HR1 para la detección serológica del VEB por técnicas de inmunofluorescencia indirecta (IFI). Se estimularon cultivos de células P3HR1 en crecimiento exponencial com phorbol-12-mirystoil-13-acetato y se recolectaron alícuotas a distintos tiempos para realizar improntas. Se realizó uma IFI com cada impronta usando como anticuerpo primário um suero VEB-positivo. Se observo un aumento del 11% em la expresión del VCA a las 40 horas post-estimulación, deyendo al 3.5% a las 48 horas. Estos datos fueron corroborados por ensayo de Western blot com inmunodetección. La precisión intra- e inter-lote de las improntas fue evaluada para anticuerpos IgM e IgG, com sueros probados previamente por equipos para esta determinación disponibles en el mercado para el VEB y com sueros reactivos para otros miembros de la família Herpesviridae. No se obtuvieron resultados falsos-negativos ni falsos-positivos para el VEB ni se observo reactividad cruzada com otros herpesvirus. Las improntas desarrolladas constituyen un instrumento para el diagnóstico de la primoinfección del VEB y la detección serológica de anticuerpos IgG anti-VCA de neoplasias asociadas al VEB.