Occurrence of tick-borne pathogens in dogs in a coastal region of the state of Ceará, northeastern Brazil / Ocorrência de patógenos transmitidos por carrapatos em cães em uma região litorânea do estado do Ceará, nordeste do Brasil

Abstract The aim of this study was to determine the occurrence of tick-borne pathogens (Ehrlichia canis, Babesia vogeli, Hepatozoon spp. and Rickettsia spp.) in dogs in Vila de Jericoacoara, coastal region of Ceará, Brazil. Blood samples were collected from 153 animals and analyzed using molecular and serological methods. Sixty animals were found to be infected or exposed to at least one of the pathogens studied. Babesia vogeli was the most prevalent pathogen (15%), followed by E. canis (13.7%) and Hepatozoon spp. (11.8%), which was identified as Hepatozoon canis through sequencing. Twenty dogs (13%) were seroreactive to Rickettsia spp. Rhipicephalus sanguineus sensu lato was observed on 11.8% of the animals. There were associations between age (< 3 years old) and positivity for B. vogeli, and between habitation (stray dogs) and positivity for H. canis. There were also associations between anemia and infection with H. canis, and between leukopenia and exposure to Rickettsia spp. No association was detected between clinical alterations and infection with or exposure to the pathogens studied. The results confirmed that pathogens of veterinary importance are circulating in northeastern Brazil and showed that dogs are exposed to Rickettsia species with zoonotic potential, thus indicating a need for vector control measures.

Resumo O objetivo deste estudo foi determinar a ocorrência de patógenos transmitidos por carrapatos (Ehrlichia canis, Babesia vogeli, Hepatozoon spp. e Rickettsia spp.) em cães na Vila de Jericoacoara, região costeira do Ceará, Brasil. Amostras de sangue foram coletadas de 153 animais e analisadas por métodos moleculares e sorológicos. Sessenta animais foram encontrados infectados ou expostos a pelo menos a um dos patógenos estudados. Babesia vogeli foi o patógeno mais prevalente (15%), seguido por E. canis (13,7%) e Hepatozoon spp. (11,8%), que foi identificado como Hepatozoon canis por sequenciamento. Vinte cães (13%) foram sororreativos à Rickettsia spp. Rhipicephalus sanguineus sensu lato foi observado em 11,8% dos animais. Houve associações entre idade (<3 anos) e positividade para B. vogeli, e entre habitação (cães de rua) e positividade para H. canis. Também houve associações entre anemia e infecção por H. canis, e entre leucopenia e exposição a Rickettsia spp. Não foi detectada associação entre alterações clínicas e infecção ou exposição aos patógenos estudados. Os resultados confirmaram que patógenos de importância veterinária estão circulando no nordeste do Brasil e mostraram que cães estão expostos a espécies de Rickettsia com potencial zoonótico, indicando a necessidade de medidas de controle do vetor.

Detección de " Candidatus Rickettsia andeanae" en Rhipicephalus sanguineus sensu stricto (Acari: Ixodidae) en Rapa Nui-Isla de Pascua / Detection of " Candidatus Rickettsia andeanae" in Rhipicephalus sanguineus sensu stricto (Acari: Ixodidae) from Rapa Nui-Easter Island

INTRODUCCIÓN: Las rickettsiosis son enfermedades emergentes transmitidas por vectores artrópodos cuyos agentes etiológicos corresponden a bacterias patógenas del género Rickettsia y Orientia . Bacterias de este género han sido descritas en el norte y sur de Chile. OBJETIVO: Determinar presencia de Rickettsia spp. en garrapatas colectadas a partir de perros domésticos en Rapa Nui-Isla de Pascua, Región de Valparaíso. MÉTODOS: Fueron muestreados 20 perros callejeros durante octubre del año 2018. Se colectaron ocho garrapatas adultas desde siete animales (prevalencia: 35%); luego de su identificación taxonómica fueron sometidas a amplificación y secuenciación del gen ADNm 16S para garrapata y gltA (citrato sintetasa) para Rickettsia . RESULTADOS: Todos los ejemplares de garrapatas adultas correspondieron genéticamente a Rhipicephalus sanguineus sensu stricto lo cual fue confirmado mediante un análisis filogenético. En dos garrapatas (25%) se encontraron secuencias idénticas de gltA compatibles con " Candidatus Rickettsia andeanae", que formaron un clado monofilético con aislados obtenidos en Brasil, Chile y Perú. CONCLUSIÓN: Se documenta la presencia de " Ca. R. andeanae" s. s. en Rapa Nui-Isla de Pascua, asociado por primera vez a garrapatas del complejo R. sanguineus en Chile.

BACKGROUND: Rickettsioses are vector-borne emerging diseases caused by pathogenic bacteria of the genera Rickettsia and Orientia . Bacteria of these genera have been described in northern and southern Chile, respectively. AIM: To determine the presence of Rickettsia spp. in ticks collected from domestic dog in Rapa Nui-Easter Island, Valparaíso Region. METHODS: 20 stray dogs were sampled during October 2018. Overall, eight adult ticks were collected from seven animals (prevalence: 35%); after morphological identification, were submitted to DNA extraction and amplification and sequencing of the tick mitochondrial 16S DNA gene. The screening for Rickettsia was performed targeting the gltA (citrate synthetase) gene. RESULTS: A phylogenetic analysis confirmed the identity of the ticks as Rhipicephalus sanguineus sensu stricto. In two ticks (25%), we retrieved identical sequences of gltA compatible with " Candidatus Rickettsia andeanae", which formed a monophyletic group with conspecific isolates obtained in Brazil, Chile and Peru. CONCLUSION: This study proves the presence of " Ca . R. andeanae" in R. sanguineus s. s. at Rapa Nui-Easter Island, which also corresponds to the first report of this Rickettsia spp. in R. sanguineus complex for Chile.

Detección de Rickettsia typhi en Rhipicephalus sanguineus s.l. y Amblyomma mixtum en el sur de México / Detection of Rickettsia typhi in Rhipicephalus sanguineus s.l. and Amblyomma mixtum in South Mexico

Resumen: Objetivo: Determinar la presencia de Rickettsia typhi en Rhipicephalus sanguineus s.l. y Amblyomma mixtum, en el sur de México. Material y métodos: Las garrapatas fueron colectadas en humanos y animales domésticos. Se determinó la presencia de Rickettsia por reacción en cadena de la polimerasa (PCR, por sus siglas en inglés) y secuenciación. Resultados: 10/39 viales de trabajo amplificaron fragmentos de los genes gltA, htrA y ompB, en 7/10 proveniente de Rh. sanguineus s.l. colectadas de perros y en 3/10 de A. mixtum colectadas de caballo y humano. La secuenciación indicó R. typhi en Rh. sanguineus y A. mixtum con homología de 100% (LS992663.1), para una región del gen de htrA, y de 99% (LS992663.1), con las regiones de los genes de gltA y OmpB. La tasa mínima de infección (TMI) para R. typhi fue de 3.88. Conclusiones: Las garrapatas Rhipicephalus sanguineus s.l. y Amblyomma mixtum están infectadas naturalmente con R. typhi en el sur de México.

Abstract: Objective: To determine the presence of Rickettsia typhi in Rhipicephalus sanguineuss.l. and Amblyomma mixtum in southern Mexico. Materials and methods: Ticks were collected in humans and domestic animals. The presence of Rickettsia was determined by PCR and sequencing. Results: 10/39 work vials amplified fragments of the gltA,htrA and ompB genes. On 7/10 from Rh. sanguineus s.l collected from dogs and in 3/10 of A. mixtum collected from horse and human. Sequencing indicated R. typhi in Rh. Sanguineus and A. mixtum with 100% homology (LS992663.1) for a region of the htrA gene and 99% (LS992663.1) with the regions of the gltA and OmpB genes. The minimum infection rate (TMI) for R. typhi was 3.88. Conclusions: Rhipicephalus sanguineuss.l. and Amblyomma mixtum are naturally infected with R. typhi in Southern Mexico.

Detection of tick-borne rickettsial pathogens in naturally infected dogs and dog-associated ticks in Medellin, Colombia / Detecção de patógenos rickettsiais transmitidos por carrapatos em cães naturalmente infectados e carrapatos associados a cães em Medellin, Colômbia

Abstract Tick-borne rickettsial pathogens (TBRP) are important causes of infections in both dogs and humans. Dogs play an important role as a biological host for several tick species and can serve as sentinels for rickettsial infections. Our aim was to determine the presence of TBRP in dogs and in dog-associated ticks and their potential risk to human diseases in Medellin, Colombia. DNA for E. canis (16S rRNA and dsb) and A. platys (groEl) was detected in 17.6% (53/300) and 2.6% (8/300) of dogs, respectively. Antibodies against Ehrlichia spp. 82 (27.3%) and Anaplasma spp. 8 (2.6%) were detected in dogs. Antibody reactivity against both agents were found in 16 dogs (5.3%). Eight dogs showed antibody for Rickettsia spp. with titers that suggest 3 of them had a probable exposure to R. parkeri. Rhipicephalus sanguineus s.l. (178/193) was the main tick in dogs, followed by R. microplus (15/193). The minimum infection rates (MIR) in R. sanguineus were 11.8% for E. canis and 3.4% for A. platys. E. canis and A. platys are the main TBRP infecting dogs and ticks and R. sanguineus s.l. is likely involved in the transmission of both agents. Interestingly, we found serological evidence of exposure in dogs for spotted fever group rickettsiae.

Resumo As riquétsias transmitidas por carrapatos (RTC) são causas importantes de infecção em cães e humanos. Os cães exercem um papel essencial como hospedeiros biológicos para diversas espécies de carrapatos, assim como podem ser úteis como sentinelas de infecções por riquétsias. O intuito deste estudo foi determinar a presença de RTC em cães, assim como em seus carrapatos, para determinar o risco potencial de doença humana em Medellín, Colômbia. DNA de Ehrlichia canis (16S rRNA e dsb) e Anaplasma platys (groEl) foi detectado em 17,6% (53/300) e 2,6% (8/300) dos cães, respectivamente. Anticorpos contra Ehrlichia spp. (82; 27,3%) e Anaplasma spp. (8; 2,6%) foram detectados nos cães. Reatividade de anticorpos contra ambos patógenos (Ehrlichia e Anaplasma) foi detectada em 16 cães (5,3%). Oito animais apresentaram anticorpos contra Rickettsia spp., e 3 deles sugerem uma provável exposição a Rickettsia parkeri. Rhipicephalus sanguineus s.l. (178/193) foi a principal espécie de carrapatos, seguida de R. microplus (15/193). A taxa de infecção mínima em R. sanguineus foi 11,8% para E. canis e 3,4% para A. platys. E. canis e A. platys são as principais RTC que infectam cãese R. sanguineus s.l. provavelmente está envolvido na transmissão de ambos os agentes. É evidente, porém, a exposição sorológica dos cães a riquétsias do grupo da febre maculosa.

Serosurvey of Borrelia in dogs, horses, and humans exposed to ticks in a rural settlement of southern Brazil / Soroprevalência e fatores associados a Borrelia em cães, equinos e humanos expostos a carrapatos em um assentamento rural do sul do Brasil

Abstract The aims of the present study were to serosurvey dogs, horses, and humans highly exposed to tick bites for anti-Borrelia burgdorferi s.l. antibodies, identify tick species present, and determine risk factors associated with seropositivity in a rural settlement of Paraná State, southern Brazil. Eighty-seven residents were sampled, along with their 83 dogs and 18 horses, and individual questionnaires were administered. Immunofluorescence antibody test (IFAT) was performed on serum samples and positive samples were subjected to western blot (WB) analysis. Anti-B. burgdorferi antibodies were found in 4/87 (4.6%) humans, 26/83 (31.3%) dogs, and 7/18 (38.9%) horses by IFAT, with 4/4 humans also positive by WB. Ticks identified were mostly from dogs and included 45/67 Rhipicephalus sanguineus, 21/67 Amblyomma ovale, and 1/67 A. cajennense sensu lato. All (34/34) horse ticks were identified as A. cajennense s.l.. No significant association was found when age, gender, or presence of ticks was correlated to seropositivity to Borrelia sp. In conclusion, although anti-Borrelia antibodies have been found in dogs, horses and their owners from the rural settlement, the lack of isolation, molecular characterization, absence of competent vectors and the low specificity of the commercial WB kit used herein may have impaired risk factor analysis.

Resumo Os objetivos do presente estudo foram realizar um levantamento sorológico de cães, cavalos e humanos altamente expostos a picadas de carrapatos para anticorpos anti-B. burgdorferi s.l., identificar as espécies de carrapatos presentes, e determinar os fatores de risco associados a soropositividade em um assentamento rural do Estado do Paraná, sul do Brasil. Oitenta e sete residentes foram amostrados junto com seus respectivos 83 cães e 118 cavalos e questionários individuais foram aplicados. O teste de imunofluorescência indireta (IFI) foi realizado nas amostras sorológicas e as positivas foram submetidas a análise por western blot (WB). Anticorpos anti-B. burgdorferi foram detectados em 4/87 (4,6%) humanos, 26/83 (31,3%) cães e 7/18 (38,9%) cavalos pela IFI, com 4/4 humanos também positivos pelo WB. Os carrapatos identificados foram em sua maioria de cães e incluíram 45/67 Rhipicephalus sanguineus, 21/67 Amblyomma ovale e 1/67 A. cajennense sensu lato. Todos (34/34) carrapatos dos cavalos foram identificados como A. cajennense s.l.. Não foram observadas diferenças estatísticas entre idade, sexo ou presença de carrapatos e soropositividade para Borrelia sp. Em conclusão, embora anticorpos anti-Borrelia tenham sido encontrados em cães, equinos e seus proprietários do assentamento rural, a ausência de isolamento, caracterização molecular, ausência de vetores competentes e baixa especificidade do kit comercial de WB utilizado podem ter limitado a análise de fatores de risco.

Detección molecular de Rickettsia massiliae y Anaplasma platys en garrapatas Rhipicephalus sanguineus y caninos domésticos del municipio de Bahía Blanca (Argentina) / Molecular detection of Rickettsia massiliae and Anaplasma platys infecting Rhipicephalus sanguineus ticks and dogs, Bahía Blanca (Argentina)

Background: Rickettsioses, ehrlichioses and anaplasmoses are caused by Gram negative obligate intracellular bacteria and transmitted mainly by arthropods. Aim: To detect and perform the molecular characterization of these pathogens in ticks and domestic dogs in Bahia Blanca City (Buenos Aires, Argentina). Methods: Fifty six blood samples from dogs and 82 ticks (75 Rhipicephalus sanguineus and 7 Amblyomma tigrinum) were studied. The samples were analyzed by PCR for Rickettsia (intergenic space 23S-5S rRNA), Ehrlichia/Anaplasma (16S rRNA), and Anaplasma platys (16S rRNA). Results: 12% of R. sanguineus resulted positive for Rickettsia, identified by sequencing as Rickettsia massiliae; and 37.5% of the canine blood samples analyzed were positive for A. platys. Molecular characterization was also performed by amplification of the fragment of the citrate synthase gene (gltA) (Rickettsia genus) and the groESL gene (A. platys). Phylogenetic trees were constructed using the neighbor-joining method. These trees revealed that sequences obtained are similar to those from other geographical regions. Conclusion: The results indicate the presence of R. massiliae in R. sanguineus ticks for the second time in an urban area of South America and A. platys infection in dogs, being the southernmost region of Argentina where it has been notified.

Introducción: Las rickettsiosis, ehrlichiosis y anaplasmosis son causadas por bacterias gramnegativas, intracelulares obligadas y transmitidas principalmente por artrópodos. Objetivo: Detectar y caracterizar molecularmente estos patógenos en garrapatas y caninos domésticos del municipio de Bahía Blanca (provincia de Buenos Aires, Argentina). Material y Métodos: Se estudiaron 56 muestras sanguíneas de caninos, 75 garrapatas Rhipicephalus sanguineus y 7 Amblyomma tigrinum. Las muestras fueron analizadas por RPC para Rickettsia (espacio intergénico 23S-5S ARNr), Ehrlichia y Anaplasma (16S ARNr), y Anaplasma platys (16S ARNr). Resultados: Se detectó positividad a Rickettsia en 12% de R. sanguineus, identificándose por secuenciación a Rickettsia massiliae. Las muestras sanguíneas de los caninos resultaron en 37,5% positivas a A. platys. También se caracterizaron molecularmente por la amplificación del fragmento del gen citrato sintasa (gltA) (género Rickettsia) y del gen groESL (A. platys). Se construyeron árboles filogenéticos utilizando el método del vecino más cercano (neighbor-joining) revelando que las secuencias obtenidas son similares a las de otras regiones geográficas. Conclusión: Los resultados indican la presencia de R. massiliae en garrapatas R. sanguineus en una segunda zona urbana de Sudamérica y la infección por A. platys en caninos, siendo la región más austral de Argentina donde ha sido notificada.

SEROLOGICAL SURVEY OF Ehrlichia SPECIES IN DOGS, HORSES AND HUMANS: ZOONOTIC SCENERY IN A RURAL SETTLEMENT FROM SOUTHERN BRAZIL / Investigação sorológica de espécies de Ehrlichia em cães, equinos e humanos de um assentamento rural do sul do Brasil

SUMMARY The aims of this study were to determine the seroprevalence of Ehrlichia spp. and risk factors for exposure in a restricted population of dogs, horses, and humans highly exposed to tick bites in a Brazilian rural settlement using a commercial ELISA rapid test and two indirect immunofluorescent assays (IFA) with E. canis and E. chaffeensis crude antigens. Serum samples from 132 dogs, 16 horses and 100 humans were used. Fifty-six out of 132 (42.4%) dogs were seropositive for E. canis. Dogs > one year were more likely to be seropositive for E. canis than dogs ≤ one year (p = 0.0051). Ten/16 (62.5%) and 8/16 (50%) horses were seropositive by the commercial ELISA and IFA, respectively. Five out of 100 (5%) humans were seropositive for E. canis and E. chaffeensis. Rhipicephalus sanguineus (n = 291, 97.98%) on dogs and Amblyomma cajennense (n = 25, 96.15%) on horses were the most common ticks found. In conclusion, anti-Ehrlichia spp. antibodies were found in horses; however, the lack of a molecular characterization precludes any conclusion regarding the agent involved. Additionally, the higher seroprevalence of E. canis in dogs and the evidence of anti-Ehrlichia spp. antibodies in humans suggest that human cases of ehrlichiosis in Brazil might be caused by E. canis, or other closely related species. .

RESUMO Objetivou-se determinar a soroprevalência de Ehrlichia spp. e os fatores de risco associados a exposição em uma população restrita de cães, cavalos e humanos altamente expostos a picadas de carrapatos em um assentamento rural brasileiro utilizando um teste comercial de ELISA rápido e dois testes de imunofluorescência indireta (IFI) com antígenos brutos de E. canis e E. chaffeensis. Amostras de soro de 132 cães, 16 cavalos e 100 humanos foram utilizadas. Cinquenta e seis/132 (42,4%) cães foram soropositivos para E. canis. Cães > um ano apresentaram mais chance de serem soropositivos para E. canis do que cães ≤ um ano (p = 0,0051). Dez/16 (62,5%) e 8/16 (50%) cavalos foram soropositivos pelo ELISA comercial e IFI, respectivamente. Cinco/100 (5%) humanos foram soropositivos para E. canis e E. chaffeensis. Rhipicephalus sanguineus (n = 291, 97,98%) nos cães e A. cajennense (n = 25, 96,15%) nos cavalos foram os carrapatos mais encontrados. Concluindo, anticorpos anti-Ehrlichia spp. foram encontrados em cavalos; entretanto, a ausência de uma caracterização molecular impede qualquer conclusão sobre agente envolvido. Além disso, a alta soroprevalência de E. canis em cães e a evidência de anticorpos anti-Ehrlichia sp. em humanos, sugere que os casos de erliquiose humana no Brasil possam ser causados por E. canis ou outra espécie intimamente relacionada. .

Rickettsia parkeri: a Rickettsial pathogen transmitted by ticks in endemic areas for spotted fever rickettsiosis in southern Uruguay / Rickettsia parkeri: patógeno rickettsial transmitido por garrapatas en áreas endémicas de rickettsiosis por fiebre manchada en el sur de Uruguay

At first Rickettsia conorii was implicated as the causative agent of spotted fever in Uruguay diagnosed by serological assays. Later Rickettsia parkeri was detected in human-biting Amblyomma triste ticks using molecular tests. The natural vector of R. conorii, Rhipicephalus sanguineus, has not been studied for the presence of rickettsial organisms in Uruguay. To address this question, 180 R. sanguineus from dogs and 245 A. triste from vegetation (flagging) collected in three endemic localities were screened for spotted fever group (SFG) rickettsiosis in southern Uruguay. Tick extracted DNA pools were subjected to PCR using primers which amplify a fragment of the rickettsial gltA gene. Positive tick DNA pools with these primers were subjected to a second PCR round with primers targeting a fragment of the ompA gene, which is only present in SFG rickettsiae. No rickettsial DNA was detected in R. sanguineus. However, DNA pools of A. triste were found to be positive for a rickettsial organism in two of the three localities, with prevalences of 11.8% to 37.5% positive pools. DNA sequences generated from these PCR-positive ticks corresponded to R. parkeri. These findings, joint with the aggressiveness shown by A. triste towards humans, support previous data on the involvement of A. triste as vector of human infections caused by R. parkeri in Uruguay.

Inicialmente, Rickettsia conorii fue señalada como el agente causal de la fiebre manchada en Uruguay, diagnosticada mediante pruebas serológicas. Posteriormente, Rickettsia parkeri fue detectada mediante técnicas moleculares en garrapatas Amblyomma triste colectadas sobre humanos. El vector natural de R. conorii, Rhipicephalus sanguineus, no ha sido estudiado en cuanto a rickettsias en Uruguay. Para abordar este tema, 180 R. sanguineus fueron colectados sobre perros y 245 A. triste sobre vegetación en tres localidades consideradas endémicas para fiebres manchadas en el sur de Uruguay. El ADN de las garrapatas fue extraído en pools y sometido a una primera PCR utilizando cebadores que amplifican un fragmento del gen gltA, presente en prácticamente todas las especies de Rickettsia. Las muestras positivas fueron sometidas a una segunda PCR con cebadores que amplifican un fragmento del gen ompA, presente sólo en rickettsias del grupo de las fiebres manchadas (GFM). No se detectó ADN rickettsial en R. sanguineus. Sin embargo, muestras de A. triste fueron positivas a rickettsiales en dos de las tres localidades estudiadas, con prevalencias de pools positivos del 11.8 y 37.5% respectivamente. La secuenciación del ADN evidenció la presencia de R. parkeri. Basados en estos resultados junto a los anteriores y la agresividad de A. triste hacia los humanos, se concluye que esta garrapata es vector de rickettsiosis humana por R. parkeri en Uruguay.