Molecular detection of Cercopithifilaria bainae and other tick-borne pathogens in Rhipicephalus sanguineus s.l. isolated from dogs in Midwest Brazil / Detecção molecular de Cercopithifilaria bainae e outros patógenos transmitidos por carrapatos em Rhipicephalus sanguineus s.l. isolados de cães no Centro-Oeste do Brasil

Abstract The aim of the present study was to detect Cercopithifilaria bainae and other tick-borne pathogens and to perform molecular characterization of the tick Rhipicephalus sanguineus s.l. collected from dogs. Ticks (n = 432, including 8 larvae, 59 nymphs, and 365 adults) were sampled from domiciled dogs (n = 73) living in Campo Grande, Mato Grosso do Sul (Midwest Brazil). All ticks were morphologically identified as R. sanguineus. Genomic DNA was extracted in pools (three to five ticks per animal) and was used for definition of R. sanguineus haplotypes (based on 16S rRNA analysis) and pathogen identification (Cercopithifilaria sp., Ehrlichia canis, Anaplasma platys, Hepatozoon canis, Babesia vogeli and Rickettsia spp.). Rhipicephal us sanguineus specimens were identified as haplotypes A and B. DNA of Cercopithifilaria bainae (43.83%; 32/73), Ehrlichia canis (24.65%; 18/73), Anaplasma platys (19.17%; 14/73), and Hepatozoon canis (5.47%; 4/73) was detected. The identity of pathogens was confirmed by DNA sequence analysis. The present study confirms the presence of haplotypes A and B of R. sanguineus in the state of Mato Grosso do Sul and its importance as a vector of several pathogens of veterinary concern. Finally, this is the first report to identify C. bainae in ticks in the Midwestern region of Brazil.

Resumo O objetivo do presente estudo foi detectar Cercopithifilaria bainae e outros patógenos transmitidos por carrapatos e realizar a caracterização molecular do carrapato Rhipicephalus sanguineus s.l. coletado em cães. Carrapatos (n = 432, incluindo 8 larvas, 59 ninfas e 365 adultos) foram amostrados de cães domiciliados (n = 73) residentes no município de Campo Grande, Mato Grosso do Sul (centro-oeste do Brasil). Todos os carrapatos foram identificados morfologicamente como R. sanguineus. O DNA genômico foi extraído em pools (três a cinco carrapatos por animal), seguido pela definição de haplótipos (com base no gene 16S rRNA) e pela investigação de patógenos (Cercopithifilaria sp., Ehrlichia canis, Anaplasma platys, Hepatozoon canis, Babesia vogeli e Rickettsia spp.). Os espécimes coletados foram identificados como haplótipos A e B de R. sanguineus. Foram detectados DNA de Cercopithifilaria bainae (43,83%; 32/73), Ehrlichia canis (24,65%; 18/73), Anaplasma platys (19,17%; 14/73) e Hepatozoon canis (5,47%; 4/73). A identidade dos patógenos foi confirmada por análise de sequência de DNA. O presente estudo confirma a circulação dos haplótipos A e B de R. sanguineus no estado de Mato Grosso do Sul e sua importância como vetor de vários patógenos de interesse veterinário. Finalmente, este é o primeiro relato de C. bainae em carrapatos na região centro-oeste do Brasil.

Ehrlichia canis DNA in domestic cats parasitized by Rhipicephalus sanguineus sensu lato (s. l. ) ticks in Brazil ­ case report / Felinos domésticos parasitados por carrapato Rhipicephalus sanguineus sensu lato (s. l. ) infectados por Ehrlichia canis no Brasil ­ relato de caso

Ectoparasites can transmit pathogens, including bacteria such as Ehrlichia sp., which trigger infectious diseases in domestic animals. Little is known about the epidemiology of feline ehrlichiosis, although several studies have focused on elucidating the pathogenesis and transmission of this disease. This paper presents the first mutual infection by Ehrlichia sp. between a domestic cat and a Rhipicephalus sanguineus sensu lato (s.l.) tick removed from the animal. The cat and tick were tested by Polymerase Chain Reaction (PCR) to detect the dsb gene, and the analyzed sequences revealed samples 100% identical to E. canis. Based on this report, we discussed the importance of cats as E. canis reservoirs s and their position in the cycle of transmission between dogs and cats in Brazil.(AU)

Os ectoparasitos são capazes de transmitir patógenos incluindo algumas bactérias, como a Ehrlichia sp., causando doenças em animais domésticos. Pouco se conhece sobre a epidemiologia da erliquiose felina, embora alguns estudos já tenham sido realizados para elucidar a sua patogenia e transmissão. Este trabalho relata a primeira infecção mútua por Ehrlichia sp. entre um felino doméstico e o carrapato Rhipicephalus sanguineus sensu lato (s.l.) removido deste animal. Ambos foram testados pela Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR) para detectar o gene dsb, e as sequências analisadas confirmaram amostras 100% idênticas à E. canis. Baseado neste relato é discutida a importância dos gatos como vetores de E. canis e sua posição no ciclo de transmissão de carrapatos entre cães e gatos no Brasil.(AU)

Human parasitism by Rhipicephalus sanguineus sensu lato (Acari: Ixodidae) in Mato Grosso do Sul, West-Central Brazil / Parasitismo humano por Rhipicephalus sanguineus sensu lato (Acari: Ixodidae) no Mato Grosso do Sul, Centro-Oeste do Brasil

Human parasitism by the brown dog tick Rhipicephalus sanguineus sensu lato (s. l.), an important parasite in medical and veterinary sciences, is only rarely reported in the American continent. The present investigation reports a R. sanguineus s. l. male tick parasitizing a human in the city of Campo Grande, State of Mato Grosso do Sul, west-central Brazil. This observation is of public health relevance, since R. sanguineus s. l. ticks are known as vectors of spotted fever group rickettsiae to dogs and humans.(AU)

O parasitismo humano pelo carrapato marrom do cão, Rhipicephalus sanguineus sensu lato (s. l.), um importante parasita para a saúde pública e veterinária, é raramente relatado no continente americano. Este trabalho relata o registro de um macho de R. sanguineus s. l. parasitando um humano na cidade de Campo Grande, estado do Mato Grosso do Sul, no Centro-Oeste do Brasil. Essa observação é relevante para a saúde pública, uma vez que os carrapatos desse complexo são conhecidos como vetores de riquétsias do grupo da febre maculosa para cães e humanos.(AU)

Ticks and fleas in crab-eating fox (Cerdocyon thous) of Pernambuco state, Brazil / Carrapatos e pulgas em cachorro-do-mato (Cerdocyon thous) do Estado de Pernambuco, Brasil

This study aimed to identify the species of fleas and ticks of Cerdocyon thous from the state of Pernambuco. Animals (n = 20) were examined, with 30% (6/20) ectoparasitized. Fleas (n = 16) and ticks (n = 17) parasitizing free-living crab-eating fox and captive in state of Pernambuco were collected. The fleas were identified as: Pulex irritans and Ctenocephalides felis; and the ticks were: Rhipicephalus sanguineus sensu lato and Amblyomma ovale. The presence of ectoparasites of domestic animals parasitizing C. thous, suggests a close contact of this species to the peridomicile. Furthermore, this is the first report of the occurrence of A. ovale in C. thous in northeastern Brazil.(AU)

Objetivou-se identificar as espécies de pulgas e carrapatos de Cerdocyon thous provenientes do estado Pernambuco. Foram examinados 20 animais, estando 30% (6/20) ectoparasitados. Foram coletadas 16 pulgas e 17 carrapatos em cachorros-do-mato de vida livre e de cativeiro no estado de Pernambuco. As pulgas foram identificadas como: Pulex irritans e Ctenocephalides felis; e os carrapatos foram: Rhipicephalus sanguineus sensu lato e Amblyomma ovale. A presença de ectoparasitos de animais domésticos parasitando C. thous, sugere a aproximação de indivíduos desta espécie ao peridomicílio. Além disso, este é o primeiro relato da ocorrência de A. ovale em C. thous no nordeste brasileiro.(AU)

Babesia canis vogeli infection in dogs and ticks in the semiarid region of Pernambuco, Brazil / Infecção por Babesia canis vogeli em cães e carrapatos de uma região semiárida de Pernambuco

This study aimed to report the prevalence of Babesia canis vogeli in dogs and ticks in the urban and rural areas of Petrolina, Pernambuco. Serum and peripheral blood samples of 404 dogs were tested by indirect immunofluorescence assay (IFA) and by blood smears, respectively. The presence of tick infestation was evaluated, and some specimens were submitted to DNA amplification by polymerase chain reaction (PCR). The presence of antibodies anti-B. canis vogeli was determinate in 57.9% (234/404) of dogs. The direct detection of Babesia spp was obtained in 0.5% (2/404) dogs by visualization of intraerythrocytic forms. Infestation by Rhipicephalus sanguineus sensu lato was observed in 54.5% (220/404) of dogs in both urban and rural areas. DNA of Babesia canis vogeli were obtained by PCR in 6% individual (3/50) and 8.7% of pool of ticks (7/80). The risk factors for the presence of anti-B. canis vogeli antibodies, as determined through the application of logistic regression models (P<0.05), were the following: medium breed size variables (P<0.001); contact with areas of forest (P=0.021); and access on the street (P=0.046). This study describes, for the first time, the confirmation of infection of B. canis vogeli in dogs and ticks in the semiarid region of Pernambuco, Brazil.

Este trabalho objetivou avaliar a prevalência de Babesia canis vogeli em cães e carrapatos de áreas urbanas e rurais do município de Petrolina, Pernambuco, Nordeste do Brasil. Amostras de soro e sangue periférico de 404 cães foram testadas pela Reação de Imunoflorescência Indireta (RIFI), e por esfregaço sanguíneo. A presença de infestação por carrapatos foi avaliada, e alguns espécimes foram submetidos à amplificação do DNA pela Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR). A presença de anticorpos anti-B. canis vogeli foi determinada em 57,9% (234/404) dos cães. A soroprevalência em áreas urbanas e rurais foi 48,5% e 67,3%, respectivamente. A detecção direta de Babesia spp foi obtida em 0,5% dos cães pela visualização de formas intraeritrocitárias. A infestação pelo carrapato Rhipicephalus sanguineus foi observada em 54,5% (220/404) dos cães. DNA de Babesia canis vogeli obtido pela PCR foi 6% (3/50) em carrapatos processados individualmente e 8,7% (7/80) em pools. Os fatores de risco para presença de anticorpos anti- B. canis vogeli utilizando modelo de regressão logística (P < 0,05) foram porte médio (P <0,001), contato com áreas de floresta (P = 0,021), e acesso dos cães à rua (P = 0,046). Este estudo descreve pela primeira vez a confirmação da infecção de Babesia canis infectando cães e carrapatos em uma região semiárida de Pernambuco, Brasil.

A survey for rickettsial agents on Rhipicephalus sanguineus (Ixodida, Ixodidae) ticks in Northeastern Brazil / Inquérito para agentes rickettsiais em carrapatos Rhipicephalus sanguineus (Ixodida, Ixodidae) no Nordeste do Brasil

In this study, rickettsial infection was searched in 108 canine blood samples and 22 Rhipicephalus sanguineus (Ixodida,Ixodidae) ticks collected on these dogs during 2011 and 2012 in Patos municipality, state of Paraíba, northeasternBrazil. Blood samples were tested through indirect immunofluorescence assay (IFA) by using antigens of six Rickettsiaspecies isolates from Brazil. All 108 dogs tested seronegative for R. rickettsii, R. parkeri, R. amblyommii, R. felis, R.rhipicephali, and R. bellii antigens, suggesting a non-endemic status of the studied region for spotted fever ricketsiosis.Among 22 R. sanguineus ticks, R. felis was detected in one (4.5%) specimen by PCR targeting a portion of the rickettsialgltA gene. The possible implications of this unusual PCR finding are discussed.

No presente trabalho, foi pesquisada infecção riquetsial em amostras de sangue de 108 cães e 22 carrapatos Rhipicephalussanguineus (Ixodida, Ixodidae) coletados destes animais durante 2011 e 2012, em Patos, Estado da Paraíba, Nordestedo Brasil. As amostras de sangue foram examinadas pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI) utilizando-seantígenos de seis isolados de Rickettsia do Brasil. Todos os 108 cães foram soronegativos para os antígenos de R.rickettsii, R. parkeri, R. amblyommii, R. felis, R. rhipicephali e R. bellii, sugerindo que a região estudada não é endêmicapara riquetsioses do grupo da febre maculosa. Dos 22 carrapatos R. sanguineus, R. felis foi detectada em um (4,5%)espécime por PCR do gene riquetsial gltA. São discutidas as possíveis implicações desse achado incomum na PCR.

Serological survey on Ehrlichia sp. among dogs in the central region of Rio Grande do Sul / Pesquisa sorológica de Ehrlichia sp. em cães da região central do Rio Grande do Sul

A serological survey on Ehrlichia canis was conducted among dogs in the central area of the state of Rio Grande do Sul, where the tick Rhipicephalus sanguineus is a common parasite of dogs. Out of a total of 316 dogs attended at the veterinary teaching hospital in the municipality of Santa Maria, only 14 (4.43%) reacted positively to E. canis antigens in the indirect immunofluorescence assay, with the following endpoint titers: 80 (three dogs), 160 (five), 320 (four), 640 (one) and 1280 (one). Like in previous studies in other regions of the state of Rio Grande do Sul, only a very small portion of the dogs in Santa Maria presented antibodies reactive to E. canis, even though canine infestations due to R. sanguineus are very common in this study region. These results contrast with other regions of Brazil, where E. canis is endemic among canine populations, with seropositivity values generally higher than 30%. Genetic differences among the R. sanguineus populations in South America might be implicated in these contrasting results.(AU)

Foi realizada uma pesquisa sorológica para Ehrlichia canis, em cães, na região central do estado do Rio Grande do Sul, onde o carrapato Rhipicephalus sanguineus é um parasita comum em cães. De um total de 316 cães atendidos no Hospital Veterinário Universitário no Município de Santa Maria, somente 14 (4,43%) reagiram positivamente para o antígeno de E. canis pela reação de imunofluorescência indireta, com os seguintes títulos finais: 80 (3 cães), 160 (5), 320 (4), 640 (1) e 1.280 (1). Semelhante aos estudos anteriores em outras regiões do estado do Rio Grande do Sul, apenas uma pequena parcela dos cães de Santa Maria apresentaram anticorpos reativos para E. canis, mesmo que as infestações caninas por R. sanguineus sejam muito comuns na região de estudo. Esses resultados contrastam com outras regiões do Brasil, nas quais E. canis é endêmica entre a população canina, com valores de soropositividade geralmente superiores a 30%. Diferenças genéticas entre as populações de R. sanguineus, na América do Sul, poderiam estar envolvidas nesses resultados contrastantes.(AU)

Participação de Rhipicephalus sanguineus (Latreille, 1806) e Ctenocephalides felis felis (Bouché, 1835) na epidemiologia da leishmaniose visceral canina

Foi realizado um estudo caso-controle para avaliar possíveis associações entre as infestações por Rhipicephalus sanguineus, ou por Ctenocephalides felis felis, e a detecção de anticorpos anti – Leishmania em cães de uma área endêmica para leishmaniose visceral. Foi avaliado, também, a capacidade. vetorial de R. sanguineus na transmissão da leishmaniose visceral canina (LVC), utilizando condições controladas de laboratório. Para o estudo casocontrole, foi utilizada uma amostra de 200 cães soropositivos e 200 soronegativos provenientes de um inquérito sorológico censitário em 5556. cães, dos quais 7,8% (432) foram positivos na detecção de anticorpos anti – Leishmania pelos testes de ELISA e RIFI (Bio-Manguinhos). Os cães foram considerados infestados ou não por carrapato e pulga com base em inspeção direta para detecção dos ectoparasitas. Foi realizado o georreferenciamento. dos cães soropositivos e da presença dos ectoparasitos na área de estudo. O estudo em condições controladas para a detecção da infecção de R. sanguineus por Leishmania sp., assim como uma possível interação entre estas duas espécies, foi realizado utilizando a PCR, isolamento em cultura e esfregaço em lâminas coradas por Panótico-Laborclin. Os exames foram realizados em estádios do carrapato provenientes de infestação artificial em cães com LVC.

Os cães utilizados no experimento foram infectivos para Lutzomyia longipalpis pelo exame de xenodiagnóstico . Antes da realização dos. exames os estádios foram mantidos de 4 a 15 dias em condições controladas de laboratório. A prevalência de infestação por R. sanguineus nos cães soropositivos (38,5%) foi significativamente maior que nos cães soronegativos (29%) (p=0,04); para C. felis felis também houve diferença significativa nas prevalências de infestação (36,5% e 15,5%, respectivamente) (p<0,01). A chance de positividade para Leishmania sp. foi 53% mais alta nos cães infestados por carrapato (Odds ratio [OR] = 1,53; intervalo de 95% de confiança [IC95%] = 1,01-2,33 ) e cerca de 3 vezes mais alta nos cães com infestação por pulga (OR = 3,13; IC95% = 1,94-5,06). Ambos os ectoparasitos estiveram amplamente distribuídos na área de estudo com uma tendência em acompanhar a distribuição dos cães soropositivos. A presença de anticorpos anti – Leishmania mostrou – se associada tanto à infestação por R. sanguineus. quanto por C. felis felis. No estudo controlado, foram positivos pela PCR 10 “pools” de estádios do carrapato, incluindo estádios de ecdises sem alimentar. Nos esfregaços não foram observadas formas parasitológicas sugestivas de Leishmania spp., embora pode – se observar a presença de uma estrutura. flagelada em um estádio de larva ingurgitada sugestivo de um tripanosomatídeo. Na cultura em meio NNN/LIT de todos os estádios analisados não foi observado o crescimento de Leishmania spp. Potenciais. explicações para estes resultados recaem sobre a capacidade vetorial dessas espécies em transmitir Leishmania sp. para a população canina, porém mais estudos são necessários para rejeitar ou não essa hipótese.

Participação de Rhipicephalus sanguineus (Latreille, 1806) e Ctenocephalides felis felis (Bouché, 1835) na epidemiologia da leishmaniose visceral canina / Participation of Rhipicephalus sanguineus (Latreille, 1806) and Ctenocephalides felis felis (Bouche, 1835) in the epidemiology of canine visceral leishmaniasis

Foi realizado um estudo caso-controle para avaliar possíveis associações entre as infestações por Rhipicephalus sanguineus, ou por Ctenocephalides felis felis, e a detecção de anticorpos anti – Leishmania em cães de uma área endêmica para leishmaniose visceral. Foi avaliado, também, a capacidade. vetorial de R. sanguineus na transmissão da leishmaniose visceral canina (LVC), utilizando condições controladas de laboratório. Para o estudo casocontrole, foi utilizada uma amostra de 200 cães soropositivos e 200 soronegativos provenientes de um inquérito sorológico censitário em 5556. cães, dos quais 7,8% (432) foram positivos na detecção de anticorpos anti – Leishmania pelos testes de ELISA e RIFI (Bio-Manguinhos). Os cães foram considerados infestados ou não por carrapato e pulga com base em inspeção direta para detecção dos ectoparasitas. Foi realizado o georreferenciamento. dos cães soropositivos e da presença dos ectoparasitos na área de estudo. O estudo em condições controladas para a detecção da infecção de R. sanguineus por Leishmania sp., assim como uma possível interação entre estas duas espécies, foi realizado utilizando a PCR, isolamento em cultura e esfregaço em lâminas coradas por Panótico-Laborclin. Os exames foram realizados em estádios do carrapato provenientes de infestação artificial em cães com LVC.

Os cães utilizados no experimento foram infectivos para Lutzomyia longipalpis pelo exame de xenodiagnóstico . Antes da realização dos. exames os estádios foram mantidos de 4 a 15 dias em condições controladas de laboratório. A prevalência de infestação por R. sanguineus nos cães soropositivos (38,5%) foi significativamente maior que nos cães soronegativos (29%) (p=0,04); para C. felis felis também houve diferença significativa nas prevalências de infestação (36,5% e 15,5%, respectivamente) (p<0,01). A chance de positividade para Leishmania sp. foi 53% mais alta nos cães infestados por carrapato (Odds ratio [OR] = 1,53; intervalo de 95% de confiança [IC95%] = 1,01-2,33 ) e cerca de 3 vezes mais alta nos cães com infestação por pulga (OR = 3,13; IC95% = 1,94-5,06). Ambos os ectoparasitos estiveram amplamente distribuídos na área de estudo com uma tendência em acompanhar a distribuição dos cães soropositivos. A presença de anticorpos anti – Leishmania mostrou – se associada tanto à infestação por R. sanguineus. quanto por C. felis felis. No estudo controlado, foram positivos pela PCR 10 “pools” de estádios do carrapato, incluindo estádios de ecdises sem alimentar. Nos esfregaços não foram observadas formas parasitológicas sugestivas de Leishmania spp., embora pode – se observar a presença de uma estrutura. flagelada em um estádio de larva ingurgitada sugestivo de um tripanosomatídeo. Na cultura em meio NNN/LIT de todos os estádios analisados não foi observado o crescimento de Leishmania spp. Potenciais. explicações para estes resultados recaem sobre a capacidade vetorial dessas espécies em transmitir Leishmania sp. para a população canina, porém mais estudos são necessários para rejeitar ou não essa hipótese.

Rhipicephalus sanguineus e a epidemiologia da leishmaniose visceral canina no Estado de Pernambuco / Rhipicephalus sanguineus and the epidemiology of canine visceral leishmaniosis in the State of Pernambuco

No presente trabalho, objetivou-se estudar o papel do carrapato vermelho do cão (Rhipicephalus sanguineus) na epidemiologia da leishmaniose visceral canina no Estado de Pernambuco, Nordeste do Brasil. Em março de 2007, coletaram-se carrapatos de um cão naturalmente infectado por Leishmania (Leishmania) infantum que residia no município de Vicência, onde a presença de Lutzomyia longipalpis ainda não foi demonstrada. Todos os carrapatos coletados (n=21) foram identificados como Rh. sanguineus e quando testados para presença de DNA de L. (L.) infantum por PCR, quatro foram positivos. Adicionalmente, 73 carrapatos coletados de 25 cães soropositivos residentes no município de Bezerros foram testados para presença de DNA de L. (L.) infantum por PCR em tempo real e nove (12,3%) foram positivos, com uma carga parasitária variando de 0,001 a 0,003. Em junho de 2008, realizou-se um estudo epidemiológico no município de São Vicente Férrer, onde a presença de Lu. longipalpis também é incerta. Dentre os 41 cães testados por uma reação de imunofluorescência indireta para presença de anticorpos anti-Leishmania spp., 12 (29,3%) foram positivos. Apenas dois cães foram positivos no exame parasitológico (um em esfregaço corado de medula óssea e outro de lesão cutânea). Similarmente, apenas dois cães foram positivos para presença de DNA de L. (L.) infantum (um na PCR em tempo real em amostra de sangue e outro na PCR convencional em medula óssea). A prevalência geral, considerando todos os métodos diagnósticos, foi de 34,1%. Não houve diferença significativa na soropositividade em relação à idade, sexo ou status clínico dos cães. Em relação à presença de ectoparasitos, 29 (70,7%) cães estavam infestados por artrópodes. Não houve diferença significativa na soropositividade em relação à presença (ou ausência) de piolhos ou pulgas. Porém, a maioria dos cães soropositivos não apresentava infestação por carrapatos (p)valor = 0,05). O presente não descarta a possível...

Ticks, ivermectin, and experimental Chagas disease

Following an infestation of dogticks in kennels housing dogs used for long-term studies of the pathogenesis of Chagas disease, we examined the effect of ivermectin treatment on the dogs, ticks, trypanosome parasites, and also on triatomine vectors of Chagas disease. Ivermectin treatment was highly effective in eliminating the ticks, but showed no apparent effect on the dogs nor on their trypanosome infection. Triatominae fed on the dogs soon after ivermectin treatment showed high mortality, but this effect quickly declined for bugs fed at successive intervals after treatment. In conclusion, although ivermectin treatment may have a transient effect on peridomestic populations of Triatominae, it is not the treatment of choice for this situation. The study also showed that although the dogticks could become infected with Trypanosoma cruzi, this only occurred when feeding on dogs in the acute phase of infection, and there was no evidence of subsequent parasite development in the ticks.