Diferenciación de especies de Rhodococcus mediante una prueba de PCR-RFLP basada en los genes codificantes para la subunidad 16S ribosomal / Differentiation of Rhodococcus's species by means of a test of PCR-RFLP based on the genes codificantes for the subunit 16S ribosomal

Dada la dificultad en diferenciar las especies de Rhodococcus por pruebas bioquímicas, se desarrolló unaprueba de Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR), seguida de un ensayo de Polimorfismo de Longitud de Fragmentos de Restricción (PCR-RFLP) para la diferenciación de las mismas. R. equi, R. rhodnii y otrasbacterias fueron cultivadas en agar sangre y BHI a 37 y 26 °C. El ADN bacteriano fue extraído y amplificadocon los iniciadores descritos por Hypsa y Dale. Los productos de amplificación fueron sometidos a digestióncon diversas enzimas de restricción y los patrones de restricción obtenidos fueron confirmados mediante análisis in silico. Se obtuvo el fragmento de amplificación esperado de 1300 pb en todas las bacterias analizadas. Se pudo diferenciar R. equi de R. rhodnii con las endonucleasas PstI y HindIII y con respecto a otrasbacterias con PstI, HindIII, SstI, BamHI y EcoRI. Los patrones de restricción obtenidos fueron confirmadosmediante análisis in silico. La prueba PCR-RFLP constituye una alternativa para la diferenciación entreespecies de Rhodococcus tales como R. equi y R. rhodnii.

Avaliaçäo da atividade co-hemolítica de estreptococos, listerias e corinebactérias usando placas de agar sangue de carneiro e uma microtécnica quantitativa / Evaluation of cohemolytic activity in atreptococci, listeria and corynebacteria by using sheep blood agar plates and a quantitativemicroassay

Sinergismo e antagonismo hemolíticos entre estreptococos, listérias e corinebactérias foram avaliados em placas de agar sangue de carneiro, na presença de Staphylococcus aureus, Rhodococus(Corynebacterium) equi e Corynebacterium haemolyticum como amostras indicadoras.Hemólise sinérgica com R.(C.)equi e antagonismo hemolítico com S.aureus foram abservados com C.haemolyticum, Corynebacterium pseudotuberculosis, Corynebacterium ulcerans e Listeriaivanovii.Quando estas últimas foram também testadas como amostras indicadoras, somente C.haemolyticum fornaceu resultados inequívocos.C.haemolyticum pode ser útil para eliminar dúvidas causadas, no teste de CAMP, pelas reaçöes fracas ou näo específicas.Todas as amostras de Streptococus agalactiaetestadas e uma de Streptococus uberis foram positivas com S.aureus, mas apenas S.agalactiae deu reaçöes positivas com C.haemolyticum.R.(C.)equi, Corynebacterium hoagii(esta agora, também, considerada como R.equi) e Corynebacterium renale apresentaram sinergismo hemolítico com S.aureus.Quando esta indicadora foi substituída por C.haemolyticum, R.(C.)equi e C.hoagii foram positivas, mas näo C.renale.C.Haemolyticum apresentou resultados fracamente positivos com Listeria monocytogenes e antagonismo com L.ivanovii, enquanto tanto L.monocytogenes, quanto Listeria seeligeri forneceram reaçöes fracas com S.aureus.amostras de L.monocytogenes também foram positivas ou fracamente positivas com R.(C.)equi.Uma microtécnica precisa foi adaptada para a determinaçäo quantitativa da atividade co-hemolítica correlacionaram bem com os resultados obtidos em meio sólido.Uma exceçäo importante ocorreu com a ativadade co-hemolítica detectável entre listérias patogênicas, as quais apresentaram reaçöes duvidosas em placas de agar sangue.Além de facilitar o estudo das co-citolisinas bacterianas, a determinaçäo quantitativa da atividade co-hemolítica pode ser importante para diferenciar espécies patogênicas de Listeria.