Caracterização da proteína quinase C Beta I nuclear em células tronco embrionárias / Characterization of protein kinase C beta I in embryonic stem cell nucleus

As proteína quinases C (PKC) pertencem à família das serina/treonina quinases, que vem sendo apontadas como importantes enzimas para os processos de proliferação e diferenciação das células tronco embrionárias (CTE), todavia, a função exata de cada isoforma dessa família ainda não está clara. Dados anteriores do nosso laboratório indicam que dentre as PKCs expressas em CTE, formas cataliticamente ativas da PKCßI são altamente expressas no núcleo das CTE murinas. Estas ao se diferenciarem expressam essa quinase no seu citoplasma ou deixam de expressar a mesma, e que a maioria dos alvos da PKCßI em CTE indiferenciada estão envolvidos em processos de regulação da transcrição de proteínas envolvidas em processos de proliferação/ diferenciação. Dando continuidade aos resultados anteriores do laboratório, no presente trabalho, com técnicas de proteômica e fosfoproteômica identificamos outros alvos nucleares da PKCßI em CTE indiferenciadas. Vimos que de fato inibindo-se a PKCßI diminuiu-se a fostorilação de fatores envolvidos com a indiferenciação das CTE. Dentre os alvos da PKCßI encontramos a proteína adaptadora, TIF1 que recruta proteínas remodeladoras de cromatina. Essa proteína é essencial para a manutenção do estado indiferenciado das CTE. In vitro a PKCßI foi capaz de fosforilar a TIF1ß e inibindo-se a PKCßI por RNAi vimos uma diminuição na expressão da TIF1ß e no fator de indiferenciação Nanog cuja expressão já foi demonstrada ser regulada pela TIF1ß. Além disso vimos que inibindo-se a PKCßI com o peptídeo inibidor da PKCßI aumentou a expressão de proteínas reguladas pelo c-Myc. E que o RNAi para a PKCßI aumentou a expressão de proteínas que regulam a expressão do c-Myc. Não vimos nenhum efeito na fosforilação ou expressão do c-Myc após a inibição da PKCßI o que sugere que a PKCßI ative proteínas repressoras do c-Myc. Nossos estudos sugerem que a PKCßI regula a manutenção do estado indiferenciado das CTE regulando a expressão e atividade da Tif1ß um possível alvo direto da PKCßI. Levando a modificações da cromatina e regulação da expressão de genes que mantém as CTE indiferenciadas. Outro ponto de regulação da PKCßI parece ser a nibição da atividade de c-Myc o que seria importante para a manutenção do estado indiferenciado visto que o c-Myc é um amplificador das vias de sinalização que mantém as células proliferando. Desta forma a PKCßI parece ter um papel central na regulação da expressão gênica de CTE à nível de modificações epigenéticas e a nível transcricional mantendo as CTE indiferenciadas

The Protein kinase C (PKC) family of serine/treonine kinases, are being described as important enzymes for proliferation and diferentiation of embryonic stem cells (ESC), however, the exact function of the different isoenzymes of this family still is unclear. Previous data from our laboratory indicates that amongst the PKCs expressed in ESC, catalytically active forms of PKCßI are highly expressed in nucleus of murine ESC. When these cells differentiate this kinase can be found in the cytoplasm or not expressed at all, and that the majority of PKCßI targets in undifferentiated ESC are involved in the regulation of proteins involved in transcription of proteins involved in proliferation/ diferentiation. Continuing our previous work herewith using proteomics and phosphoproteomics techniques we identified other nuclear PKCßI targets in undifferentiated ESC. We indeed saw that inhibiting PKCßI decreased the phosphorylation of factors involved with maintainance of the undifferentiated state of ESC. Amongst the targets of PKCßI we found the adaptor protein, TIF1ßI, that recruits cromatin remodeling proteins. This protein is essential for the maintenance of the undifferentiated state of ESC. In vitro PKCßI phosphorylated TIF1ß and inhibiting PKCßI with RNAi decreased the expression of TIF1ß and of the undifferentiation factor Nanog whose expression has been shown to be regulated by TIF1ß. We also saw that inhibiting PKCßI with a peptide inhibitor increased the expression of proteins regulated by c-Myc, and that RNAi for PKCßI increased the expression of proteins that regulate the expression of c-Myc. We did not see any effect on the phosphorylation or expression of c-Myc after inhibition of PKCßI suggesting that PKCßI activates c-Myc repressor proteins. Our studies sugest that PKCßI regulates the maintenance of the undiferentiated state of ESC regulating the expression and activity of Tif1ß a possibly a direct target of PKCßI, leading to chromatin modifications and regulation of genes that maintain ESC undiferentiated. Another form of regulation of PKCßI seems to be by inhibiting the activity of c-Myc which is importante to maintain ESC undifferentiated since c-Myc is na an amplifyer of signaling patheways that maintain ESC proliferating. Together PKCßI has a central role in the regulation of the gene expression of ESC at the level of epigenetic modifications and transcriptional regulation

Reguladores vegetais e substratos no enraizamento de estacas de erva-baleeira (Varronia curassavica Jacq. ) / Growth regulators and substrates on rooting of Varronia curassavica Jacq

A erva-baleeira, espécie medicinal anti-inflamatória, pode ser propagada por sementes, no entanto, o desenvolvimento de métodos eficientes para a propagação vegetativa possibilitará a uniformidade nas populações e a clonagem de plantas de interesse quanto aos aspectos agronômico e de composição química. O presente trabalho objetivou avaliar os efeitos do ácido naftaleno acético (NAA) e do ácido indolbutírico (IBA) e de diferentes substratos no enraizamento de estacas semi-lenhosas de erva-baleeira. Os experimentos foram conduzidos em casa de vegetação em Montes Claros em delineamento inteiramente casualizados. Para o experimento teste da influência das auxinas, as estacas foram submetidas a tratamentos com NAA e IBA nas concentrações de 0, 500, 1000, 2000, 3000 e 4000 mg L-1, e para o experimento dos substratos, cinco substratos foram avaliados (vermiculita expandida + casca de arroz parcialmente carbonizada (proporção de 1:1); vermiculita expandida; substrato orgânico comercial para hortaliça (Tropstrato HT ®); areia; solo + compostagem (proporção de 1:1)). Após 90 dias, para ambos os experimentos, foram avaliadas porcentagem de estacas enraizadas, de estacas mortas, de estacas vivas com calos, de estacas mortas com calos, número de raízes formadas por estaca e comprimento das três maiores raízes (cm). O regulador vegetal ideal para o enraizamento da espécie é o IBA, na concentração de 2.000 mg L-1, sendo que o NAA não é recomendado para a indução radicial em estacas erva-baleeira. O substrato vermiculita com casca de arroz carbonizada na proporção de 1:1 proporcionou maior porcentagem de enraizamento nas estacas da erva-baleira que o substrato solo + compostagem (1:1), os demais substratos não diferenciaram entre si.

The Varronia curassavica Jacq., black sage, is an anti-inflammatory medicinal species that can be propagated by seed; however, the development of efficient methods for vegetative propagation will enable uniformity in the populations and cloning of plants of interest regarding the agronomic aspects and chemical composition. The aim of this study was to assess the effects of the naphthalene acetic acid (NAA) and indole butyric acid (IBA) and different substrates on the rooting of semi-hardwood cuttings of black sage. The experiments were conducted in a greenhouse at Montes Claros, in the State of Minas Gerais, Brazil, as a randomized complete design. For the experiment to test the influence of auxin, the cuttings were subjected to treatments with NAA and IBA at the concentrations of 0, 500, 1000, 2000, 3000 and 4000 mg L-1, and for the experiment with substrates, five substrates were evaluated (expanded vermiculite + carbonized rice husk (1:1); expanded vermiculite; commercial organic substrate for vegetable (Tropstrato ® HT); sand; soil + compost (1:1)). After 90 days, in both experiments, we evaluated the rooting percentage of cuttings, dead cuttings, live cuttings with callus, dead cuttings with callus, number of roots per cutting and length of the three longest roots (cm). The best plant growth regulator for the rooting of the species is the IBA at a concentration of 2.000 mg L-1, and the NAA is not recommended for the induction of roots in cuttings of black sage. Vermiculite with carbonized rice husk in the ratio of 1:1 showed greater percentage of rooting in cuttings of black sage than soil + composting (1:1); other substrates did not differ among themselves.