RESUMO
Background: Using Agrobacterium rhizogenes due to create hairy roots, is a useful method to increase secondary metabolites many plants
Objective: Purpose of this research is to transgenic hairy roots culture, in order to produce secondary metabolites in Datura innoxia
Methods: Explants leaf and cotyledon of Datura innoxia were inoculated for two months with A7, A4 and 15834 strains of Agrobacterium rhizogenes; Furthermore injection and Immersion methods were used in this scrutiny. The presence of T-DNA in transgenic hairy roots were confirmed by PCR. Transgenic hairy roots in liquid medium of 1/2MS were cultured. In order to induct elicitors, methyl jasmonate in tow densities of 50 micro M and 100micro M, and salicylic acid in three densities of 1mM, 0.1mM and 0.01 mM were used randomly three times. Atropine and scopolamine content of transgenic hairy roots were examined by HPLC
Results: The highest and lowest rate of transgenic hairy roots production was respectively related to the strains of A4 and 15834. Best explants for inoculation, leaf with A4 strain and cotyledon with A7 strain, were reported. With highest production rate of hairy roots, Simple deposit using a syringes method was recognized as the best method of inoculation. The effect of salicylic acid at a density of 0.1 mM increases the content of atropine concentrations. Also the results showed that usage of Methyl jasmonate at higher doses [100 micro M] reduces the content of atropine and scopolamine
Conclusion: A. rhizogenes as an appropriate method to produce hairy roots and elicitors the best treatment for increase alkaloids
Assuntos
Técnicas de Transferência de Genes/tendências , Agrobacterium/genética , Transformação Genética , Salicilatos , Óleos Voláteis , Derivados da EscopolaminaRESUMO
Objetivo: revisar la literatura relacionada con la utilización de queratinocitos como células blanco de transferencia de genes en general y utilizando vectores retrovirales como vehículo de transferencia en particular. Fuente de los datos: se describen resultados obtenidos acerca del tema mencionado, publicados en las principales revistas de investigación en dermatología y terapia génica; además información obtenida de revisiones recientes publicadas por expertos en el área y algunas páginas web. Selección de los datos: se seleccionaron los datos más relevantes en relación con el tema propuesto, de trabajos publicados en los últimos 10 años, en los cuales se abordara experimentalmente el tema. Extracción de los datos: se incluyeron datos obtenidos de algunas páginas web especializadas en el tema de queratinocitos, transferencia de genes y vectores retrovirales (http://info.med.yale.edu/). (www.interscience.wiley.com). entre otros. Adicionalmente, datos de publicaciones y revisiones que tuvieran relevancia en áreas como: principios generales de transferencia de genes, tipos de vectores más utilizados, aplicaciones más importantes de los queratinocitos, importancia, ventajas y desventajas de estas células como células blanco de transferencia. Las bases de datos utilizadas fueron: Entrez Home.http:// www.ncbi.nim.nih.gov/Entrez/. SRS:http://srs.ebi.ac.uk/, DBGET: www.genome.ad.jp/dbget/ dbget2.html/ Síntesis de los datos: las bases de la terapia génica fueron cimentadas a principios de la década de los 60; este progreso científico continuó en los años ochenta con el desarrollo de las técnicas de clonación de genes, los vectores virales, los cultivos celulares y las técnicas de transfección in vitro. La comprensión de los procesos moleculares y celulares de muchas enfermedades, permitió pensar en la transferencia de genes como una herramienta terapéutica para el tratamiento tanto de enfermedades heredadas como adquiridas. Igualmente la transferencia de genes ha hecho posible introducir y expresar material genético exógeno en las células somáticas de mamíferos, proporcionando una poderosa herramienta para el estudio de la función y la regulación genética. Los queratinocitos han sido utilizados como células blanco para transferencia de genes...