Seroprevalence rates of antibodies against Theileria equi in team roping horses from central-western region of Paraná / Soroprevalência de anticorpos contra Theileria equi em equinos atletas da região centro-oeste do Paraná

The purpose of this study was to estimate the prevalence of Theileria equi in horses from central western region of Paraná state, Brazil. The presence of antibodies IgG against T. equi was determined in serum samples obtained from 400 team roping horses of the district of Guarapuava by the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Results showed that 242 (61%) animals were positive which demonstrates that equine piroplasmosis is widespread and therefore it might be a contributing factor for the irregular performance among athletes horses in the region studied. No association regarding age and sex were observed (p>0.05). To our knowledge, this is the first report describing a serological survey on equine piroplasmosis in the state of Paraná, Brazil.

O objetivo deste estudo foi estimar a prevalência de Theileria equi em equinos da região centro-oeste do Estado do Paraná, Brasil. A presença de anticorpos IgG contra T. equi foi determinada em amostras de soro obtidas a partir de 400 cavalos atletas do distrito de Guarapuava pelo ensaio imunoenzimático (ELISA). Os resultados mostraram que 242 (61%) animais foram positivos, o que demonstra que a piroplasmose equina apresenta ampla distribuição e, portanto, poderá contribuir para a performace irregular de cavalos que participam de eventos desportivos na região. Não foi observada associação com a idade ou sexo dos equinos (p>0,05). Pelo que se sabe, este é o primeiro relato de levantamento sorológico sobre piroplasmose equina no Estado do Paraná, Brasil.

Occurrence of Theileria equi in horses raised in the Jaboticabal microregion, São Paulo State, Brazil / Ocorrência de Theileria equi em equinos criados na microrregião de Jaboticabal, Estado de São Paulo, Brasil

Blood and serum samples from 170 horses raised in the Jaboticabal microregion, São Paulo State, Brazil, were collected and tested by microscopic examination of blood smears, indirect fluorescent antibody test (IFAT) and nested polymerase chain reaction (nPCR) for Theileria equi infections. The association among the test results was verified by the McNemar test. During the examination of thin blood smears, parasites were detected in six (3.52 percent) horses. Anti-T. equi antibodies were detected in 100 percent sera samples, with titers ranging between 1:80 and 1:5120. The nPCR based on the T. equi merozoite antigen gene (EMA-1) allowed the visualization of specie-specific amplified product in 108 (63.53 percent) horses. All six samples judged positive microscopically were also positive for nPCR. Statistical analysis indicated general disagreement (p < 0.0001) between IFAT and nPCR; IFAT and blood smear; and nPCR and blood smear on the detection of parasite carriers. The results of the present study indicate that T. equi is widely spread among horses in the Jaboticabal microregion, Northeast region of São Paulo State, Brazil.

Amostras de sangue e soro de 170 equinos criados na microrregião de Jaboticabal, Estado de São Paulo, Brasil, foram coletadas e avaliadas pelo exame direto em esfregaço sanguíneo, reação de imunofluorescência indireta (RIFI) e nested reação em cadeia da polimerase (nPCR) para a detecção de infecções por Theileria equi. A concordância dos resultados entre os testes de diagnóstico foi verificada pelo teste de McNemar. Durante o exame dos esfregaços sanguíneos, parasitos foram detectados em seis (3,52 por cento) equinos. Anticorpos anti-T. equi foram detectados em 100 por cento das amostras de soros, com títulos variando entre 1:80 e 1:5120. O nPCR, baseado na sequência do gene do antígeno de merozoíto de T. equi (EMA-1), permitiu a visualização de produtos de amplificação espécie-específico em 108 (63,53 por cento) equinos. Houve diferença altamente significativa (p < 0,0001) entre RIFI e nPCR; RIFI e esfregaço sanguíneo; e nPCR e esfregaço na detecção do parasito. O resultado do presente estudo indica que a infecção por T. equi está amplamente distribuída entre os equinos na microrregião de Jaboticabal, região Nordeste do Estado de São Paulo, Brasil.

Prevalence of equine Piroplasmosis and its association with tick infestation in the State of São Paulo, Brazil / Prevalência da Piroplasmose equina e sua associação com infestação por carrapatos no Estado de São Paulo

Serum samples were collected from 582 horses from 40 stud farms in the State of São Paulo and tick (Acari: Ixodidae) infestations were evaluated on them. Serum samples were subjected to the complement fixation test (CFT) and a competitive inhibition ELISA (cELISA) for Babesia caballi and Theileria equi. Logistic regression analyses were performed to construct multivariate models that could explain the dependent variable (horses positive for B. caballi or T. equi) as a function of the independent variables (presence or abundance of each one of the tick species found on the farms). A higher overall prevalence of B. caballi (54.1 percent) than of T. equi (21.6 percent) was found by the two tests. The ticks Dermacentor nitens Neumann, 1897, Amblyomma cajennense (Fabricius, 1787) and Rhipicephalus (Boophilus) microplus (Canestrini, 1887) were present on horses on 38 (95 percent), 20 (50 percent), and 4 (10 percent) farms, respectively. Infestations by D. nitens were statistically associated with B. caballi-positive horses on the farms by either the CFT or cELISA. Infestations by A. cajennense were statistically associated with T. equi-positive horses on the farms by either CFT or cELISA.

Amostras de soro sanguineo foram coletadas de 582 equinos de 40 haras no estado de São Paulo, onde as infestações por carrapatos foram avaliadas nos animais. Os soros foram testados por reação de fixação do complemento (RFC) e ELISA competitivo por inibição (cELISA) com antígenos de Babesia caballi e Theileria equi. Análises de regressão logística foram realizadas para construir modelos multivariados que pudessem explicar as variáveis dependentes (equinos positivos para B. caballi ou T. equi) em função de variáveis independentes (presença e abundância de cada uma das espécies de carrapatos encontradas nos equinos dos haras). Em geral, os dois testes sorológicos indicaram uma prevalência maior para B. caballi (54,1 por cento) do que para T. equi (21,6 por cento). Os carrapatos Dermacentor nitens Neumann, 1897, Amblyomma cajennense (Fabricius, 1787) e Rhipicephalus (Boophilus) microplus (Canestrini, 1887) estiveram presentes em equinos de 38 (95 por cento), 20 (50 por cento) e 4 (10 por cento) haras, respectivamente. As infestações por D. nitens estiveram estatisticamente associadas com equinos positivos para B. caballi tanto pela RFC como pelo cELISA. As infestações por A. cajennense estiveram estatisticamente associadas com equinos soropositivos para T. equi, tanto pela RFC como pelo cELISA.

Estudo comparativo de três métodos de diagnóstico para detecção de anticorpos anti-Theileria equi em eqüinos de áreas endêmicas do estado do Rio de Janeiro / Comparative studies of three methods for detection Theileria equi antibody in endemic areas horses from Rio de Janeiro state

Este trabalho teve o objetivo de avaliar a reação de imunofluorescência indireta (RIFI), ensaio imunoenzimático (ELISA) e a reação de fixação do complemento (RFC) no diagnóstico de Theileria equi em amostras de soro de 79 equinos na Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro(UFRRJ), Seropédica, RJ, Brasil. Houve reação positiva para Theileria equi em 74,7, 75,9 e 60,8% das amostras testadas pela RIFI, ELISA eRFC, respectivamente. Observou-se discrepância em 16,45% (n=13) das amostras de soro testadas pelo ELISA indireto e RIFI. Quando comparado a RIFI e a RFC, a discrepância observada entre os soros testados foi de 36,70% (n=29). O teste ELISA indireto e a RFC apresentaram discordância em 37,97% (n=30) das amostras de soros. Os resultados do presente estudo sugerem que a melhor alternativa para o diagnóstico sorológico de T. equi em eqüinos portadores é aassociação dos testes de RIFI e ELISA indireto, especialmente para a realização de estudos soroepidemiológicos

This study was carried out to evaluate indirect fluorescent antibody test (IFAT), enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and complement fixation test (CFT) of Theileria equi diagnosis in sera samples of 79 horses at Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro(UFRRJ), Seropédica, RJ, Brazil were tested. Positive reaction was obtained in 74.7, 75.9 and 60.8% of samples tested by IFAT, indirect ELISA and CFT, respectively. Discrepancy was observed in 16.45%(n=13) of serum samples tested by ELISA and IFAT. While IFAT and CFT were compared, the discrepancy observed among the samples tested were 36.71% (n=29). Indirect ELISA and CFT test presented disagreement in 37.97% (n=30) of serum samples tested. Results of present study suggests that the best alternative for serological diagnosis T. equi in carriers horses is the combined use of IFAT and indirect ELISA test, especially for accomplishment of seroepidemiological studies.

Frequency of seropositive equines for Theileria equi in the Southern Rio Grande do Sul State, Brazil

Foi realizado um levantamento sobre theileriose equina em uma propriedade da região sul do estado do Rio Grande do Sul (RS). Amostras de sangue foram coletadas de 108 éguas de um haras localizado no municipio de Bagé, latitude 31°30' Sul e longitude 54Ú10' Oeste. A sorologia foi realizada com o uso da imunofluorescência indireta (IFAT) e utilizou-se a técnica de Nested Reacão em Cadeia Polimerase (nPCR). Do total de amostras examinadas, 22 por cento (24) foram positivas por IFAT e 15 por cento (16) por nPCR). Na análise por raca, 15.05 por cento (14) dos animais Puro Sangue Inglês (PSI) foram soro-positivos, e dos animais da raça Crioula (RC), 55 por cento (11) foram positivos por IFAT.

A study on equine theileriosis was carried out in the southern region of the Brazilian state of Rio Grande do Sul (RS). Blood samples were collected from 113 mares from an equine breeding farm located in the city ofBagé, latitude 31 "30'S and a longitude of 54 U10' W. The serological testing was carried out with the use of indirect fluorescence test (IFAT) and compared with Nested Polimerase Chain Reaction (nPCR). Among the sera collected from 118 horses, 25 were found positive to Theileria equi by the IFAT, while by nPCR 17 positive for T. equi was observed, corresponding to a frequency of22.1 percent> and 15.0 percent, respectively. The racial analysis showed 15.05 percent (14) thoroughbred and 55 percent (11) Crioulo breed horses to be positive by IFAT.

Vaccine development against Theileria parasite.

Bovine piroplasmosis caused by Theileria sergenti is a major cause of economical loss in grazing cattle in Japan. We found that parasite stocks and isolates consist of genetically and antigenically mixed population. To differentiate parasite populations bearing 2 allelic forms of p32, an immunodominant piroplasm surface protein, 2 sets of oligonucleotide primers were designed to amplify either of the 2 alleles by polymerase chain reaction (PCR). By using this allele-specific PCR, we found that the majority of T. sergenti-infected calves in Japan harbored mixed parasite populations with C and I type parasites. Amino acid sequence of p32 contains Lys-Glu-Lys (KEK) motif which is one of tripeptide necessary for malaria parasite to invade erythrocytes. We produced 2 vaccine candidates, recombinant baculovirus p32 and synthetic peptide containing KEK motif. Immunization of either recombinant p32 or synthetic peptide containing a KEK sequence with adjuvant resulted in low parasitemia and reduced the clinical symptoms compared to control calves. Interestingly, parasites with a p32 allelic form corresponding to one used as the immunogen were suppressed. Therefore, a cocktail vaccine containing KEK peptides derived from C and I type parasites is desired for control Theileria parasite infection in Japan.