Detection of Toxoplasma gondii DNA in peripheral blood and aqueous humor of patients with Toxoplasmic active focal necrotizing retinochoroiditis using real-time PCR / Detecção de DNA do Toxoplasma gondii no sangue periférico e humor aquoso por PCR em tempo real

ABSTRACT Purpose: To evaluate the ability of real-time quantitative PCR (qPCR) for detectingToxoplasma gondii DNA in the peripheral blood and aqueous humor of patients with toxoplasmic active focal necrotizing retinochoroiditis. Methods: Fifty-five patients with infectious uveitis seen from 2009 to 2013 at the Department of Ophthalmology and Visual Sciences of the Federal University of São Paulo were enrolled in this study. Forty-three patients had toxoplasmic active focal necrotizing retinochoroiditis, and the remaining 12 had non-toxoplasmic infectious uveitis and served as controls. qPCR analysis forT. gondii DNA was performed on the patients' peripheral blood and aqueous humor samples. Results: The qPCR was positive for T. gondii DNA in 37.21% (16/43) of the aqueous humor samples and 2.33% (1/43) of the peripheral blood samples; further, 16.27% (7/43) of the patients had positive results in both their blood and aqueous humor samples. Conclusion: qPCR was able to detect T. gondii DNA in patients with toxoplasmic active focal necrotizing retinochoroiditis in the blood as well as the aqueous humor and can help with the diagnosis of the disease.

RESUMO Objetivo: Analisar o uso do PCR em tempo real (qPCR) na detecção do DNA do T. gondii no sangue periférico e no humor aquoso de pacientes com lesões de retinocoroidite focal, ativa por toxoplasmose. Métodos: Cinquenta e cinco pacientes com uveite infecciosa foram incluídos neste estudo. Os pacientes foram atendidos entre 2009 a 2013, no Departamento de Oftalmologia e Ciências Visuais da Universidade Federal de São Paulo. Quarenta e três pacientes tiveram o diagnóstico de lesões de retinocoroidite focal, ativa por toxoplasmose e, os outros 12 tiveram o diagnóstico de uveíte infecciosa não toxoplásmica e, por isso foram usados como grupo controle. A técnica de qPCR foi utilizada na detecção de DNA do T. gondii em amostras de sangue periférico e humor aquoso. Resultados: O qPCR foi positivo para o DNA do T. gondii em 37,21% (16/43) das amostras de humor aquoso, 2,33% (1/43) nas amostras de sangue periférico e, 16,27% (7/43) em ambas amostras simultaneamente. Conclusão: O qPCR foi capaz de detectar o DNA do T. gondii em pacientes com lesões de retinocoroidite focal, ativa por Toxoplasmose, no sangue bem como, no humor aquoso, podendo ajudar no diagnostico.

Participação dos polimorfismos em genes que codificam TLRs, citocinas e NOS2 com a susceptibilidade à toxoplasmose ocular / Involvement of polymorphisms in genes encoding TLRs, cytokines and NOS2 with susceptibility to ocular toxoplasmosis

A toxoplasmose é uma zoonose com distribuição mundial e prevalência que pode variar de 15 a 85%. Na maioria dos casos a infecção é assintomática. A toxoplasmose ocular pode ocasionar perdas visuais relacionadas à uveites. A resposta imune do hospedeiro tem um papel determinante no curso da infecção pelo Toxoplasma gondii e na evolução da doença onde, estão envolvidas citocinas como IL-12, IFN-gama, TNF-alfa, TGF-beta, além da expressão de radicais de óxido nítrico (NO). Modificações no padrão destes fatores regulatórios da resposta imune podem acarretar no desequilíbrio da relação parasito-hospedeiro. Variações alélicas em regiões regulatórias de genes que codificam citocinas têm sido demonstradas afetando os níveis de expressão de algumas citocinas podendo assim influenciar no curso de infecções. Polimorfismos em genes que codificam citocinas têm sido associados com a susceptibilidade ou resistência a doenças infecciosas e parasitárias. O presente trabalho teve como objetivo analisar a ocorrência de polimorfismos nos genes que codificam IL-10 (-592C/A, -819C/T e -1082G/A), TNFA (-238G/A e -308G/A), NOS2A (-954G/C) E TLR4 (Asp299 Gly e Thr399lle) em indivíduos com toxoplasmose ocular e em indivíduos sororreagentes para a infeção por T. gondii sem lesão ocular com a finalidade de tentar correlacioná-los com o desenvolvimento da lesão ocular toxoplasmica. A casuística incluída nesta proposta foi oriunda de uma população rural do Estado do Rio de Janeiro. Foram incluídos no estudo 34 indivíduos com lesão ocular (grupo ocular) e 134 indivíduos no grupo controle. Não foi observada diferença estatística significativa na distribuição genotípica e na frequência alélica ou haplotípica nos polimorfismos estudados. A média dos níveis séricos de nitrito e óxido nítrico foi similar entre os grupos ocular e controle, bem como quando separados pelos genótipos de NOS2A -954G/C. Desta forma, não evidenciamos na população estudada associações entre estes polimorfismos e a suscetibilidade à toxoplasmose ocular.

Immunopathology in ocular toxoplasmosis: facts and clues

Although parasite-mediated host cell lysis is deemed to be an important cause of tissue destruction in ocular toxoplasmosis (OT), the severity of the disease is probably correlated with hypersensitivity and inflammation. Notwithstanding, the mechanisms that regulate the inflammatory process in recurrent OT are poorly understood. Recent evidence has identified interleukin (IL) 17 as a marker for disease severity. The ocular and cerebral presence of this cytokine is generally associated with the induction of autoimmune responses in the brain and the eye. Indeed, there are indications that autoimmunity may contribute to clinical variability in the activity of OT. IL-23, which induces the proliferation of IL-17-producing cells and IL-27, which is a counterplayer to IL-17, may regulate T(H)-1-cell-mediated responses in OT. The importance of these cytokines in experimental models of uveitis and encephalitis has been recently reported. CD25(+) regulatory T-cells may control the local inflammatory response and protect the host against collateral inflammatory tissue damage. The responses of these cells to OT may be suitably tailored to cope with either an acquired or a congenital aetiology. Knowledge relating to immunoreactivity in OT has grown impressively during the past few years. Its characteristic and variable features have been identified and the potential relevance of autoimmunity has been assessed. In light of this knowledge, potential future treatment options have been considered.

Acometimento ocular em pacientes com AIDS e toxoplasmose do sistema nervoso central: antes e depois do HAART / Ocular involvement in AIDS patients with central nervous system toxoplasmosis: before and after HAART

OBJETIVO: Descrever o comprometimento ocular em pacientes com AIDS e toxoplasmose do sistema nervoso central, comparando os períodos pré e pós-terapia anti-retroviral (HAART). MÉTODOS: Em estudo retrospectivo, comparamos 118 pacientes com AIDS e toxoplasmose do sistema nervoso central que foram examinados em nossa instituição antes do pré e pós-terapia anti-retroviral (1994-1996) com 24 pacientes com AIDS e toxoplasmose do sistema nervoso central que foram tratados com pré e pós-terapia anti-retroviral (1996-1999). Todos os pacientes foram submetidos a exame oftalmológico completo e a testes específicos para confirmar o diagnóstico e não houve interseção entre os grupos. RESULTADOS: No grupo pré e pós-terapia anti-retroviral, foi encontrado 23 por cento de toxoplasmose ocular entre os pacientes com toxoplasmose do sistema nervoso central. O envolvimento ocular foi bilateral em 37 por cento dos casos. No grupo dos pacientes que receberam pré e pós-terapia anti-retroviral, que tinham CD4 médio de 256 cel/mm³ e carga viral média de 52.620 cópias, 16,6 por cento apresentaram concomitantemente toxoplasmose ocular e toxoplasmose do sistema nervoso central. O envolvimento ocular foi bilateral em 50 por cento dos casos. CONCLUSÃO: Pacientes com AIDS e toxoplasmose do sistema nervoso central apresentam freqüente associação com toxoplasmose ocular. Embora a incidência de infecções oportunistas tenha diminuído desde a introdução de pré e pós-terapia anti-retroviral, a toxoplasmose ocular continua sendo freqüente em pacientes com toxoplasmose do sistema nervoso central.

Acquired and congenital ocular toxoplasmosis experimentally induced in Calomys callosus (Rodentia, Cricetidae)

An experimental model for acquired and congenital ocular toxoplasmosis as well as a model to induce experimental autoimunne uveitis (EAU) was investigated in Calomys callosus. Toxoplasma gondii, ME-49 strain, was used to infect males and pregnant and not pregnant-females while S-antigen, a major glycoprotein of the retinal photoreceptor cell, was used to induce EAU. The ocular lesions elicited by T. gondii were characterized by the presence of cysts, free tachyzoites and inflammatory cells in the retina or related tissues. In the congenital form, 40 per cent of the fetus presented ocular lesions, i.e., presence of cysts in the retina, vitreous, and extra-retinal tissues. In the acquired form, 75 per cent of the females and 50 per cent of the males presented unilateral ocular cysts both at 21 and 47 days post-infection. It was also demonstrated that S-antigen was not uveitogenic in the C. callosus model. No lesion was observed in the animals exclusively immunized with this retinal component, even when jacalin was used as addicional adjuvant for polyclonal response to the retinal antigen. It can be concluded that C. callosus may constitue in a promising model for study both acquired and congenital ocular toxoplasmosis, particularly when it is important to make sure that a non autoimmune process is involved in the genesis of the ocular infection.

Toxoplamose ocular: aspectos imunologicos / Ocular toxoplasmosis: immunological aspects

A toxoplasmose, protozoose comum e benigna, assume eventualmente carater grave. O olho e um importante orgao-alvo do toxoplasma, sendo a retina frequente reservatorio de cistos de toxoplasma gondii. Assim, embora o quadro sistemico seja geralmente assintomatico, a toxoplamose e responsavel por 50 por cento dos casos de uveite no Brasil, sendo importante causa de cegueira. Em adicao, com o crescimento do numero de pessoas com SIDA e, por consequencia de pacientes com encefalite toxoplasmica, o estudo da toxoplasmose vem se tornando cada vez mais relevante...