Estudo da atividade biológica de adutos Morita-Baylis-Hillman sobre Trypanosoma cruzi / Study of the biological activity of Morita-Baylis-Hillman adducts against Trypanosoma cruzi

A doença de Chagas, causada pelo protozoário hemoflagelado Trypanosoma cruzi, consiste em um grave problema de saúde pública na América Latina, com cerca de 7 a 8 milhões de pessoas infectadas. O benznidazol é atualmente o único fármaco disponível para o tratamento, apresentando boa atividade na fase aguda, mas com eficácia questionada na fase crônica, além de apresentar severos efeitos colaterais e longo período de tratamento. Tendo em vista a sua fácil síntese e baixo custo, adutos aromáticos oriundos da reação Morita-Baylis-Hillman têm sido considerados promissores como quimioterápicos. Neste sentido, foi avaliada a atividade tripanocida e citotóxica de seis adutos Morita-Baylis-Hillman. Para analisar possíveis efeitos dos adutos sobre estruturas específicas do protozoário foi utilizado a microscopia confocal a laser, através da marcação com Rodamina 123, MitoSOXT, Laranja de Acridina e Kit Live/Dead(R). As alterações morfológicas em parasitas submetidos ao tratamento foram acompanhadas por microscopia eletrônica de transmissão. Nossos resultados mostraram que todos os compostos foram capazes de inibir o crescimento de formas epimastigotas e causaram uma diminuição da viabilidade em formas tripomastigotas, apresentando uma moderada citotoxicidade para células de mamíferos. Os adutos MBH1, MBH2, MBH5 e MBH7 também foram efetivos em inibir a infecção de macrófagos e diminuir a viabilidade das formas amastigotas. Os compostos não foram capazes de alterar os níveis de produção do óxido nítrico em macrófagos. Análises pela microscopia confocal e microscopia eletrônica de transmissão (MET) apontam a mitocôndria como principal alvo intracelular destes compostos. Alterações compatíveis com a perda da viabilidade e morte celular por necrose e autofagia foram observadas por MET. Os resultados obtidos neste trabalho colocam os adutos Morita -Baylis-Hillman em evidência como agentes promissores para o tratamento da tripanossomíase americana.

Avaliação da atividade biológica de adutos derivados da reação morita-baylis-hillman sobre Trypanosoma cruzi: uma abordagem molecular, citoquímica e ultraestrutural / Biological activity evaluation of morita-baylis-hillman adducts against Trypanosoma cruzi: a molecular, cytochemical and ultrastructural approach

A doença de Chagas, causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi, é um importante problema de saúde pública na América Latina, com cerca de 7,6 milhões de pessoas infectadas. O benznidazol e o nifurtimox são os únicos fármacos disponíveis para o tratamento, e além de apresentarem sérios efeitos colaterais, a sua eficácia na fase crônica da doença ainda é controversa. Neste sentido, nós sintetizamos o aduto Morita-Baylis-Hillman 3-hidroxi-2-metileno-3-(4-nitrofenilpropanonitrilo) (MBHA 3) e avaliamos sua atividade biológica sobre o T. cruzi. O MBHA 3 inibiu fortemente o crescimento das formas epimastigotas, com IC(50) / 72h de 28,5 µM e causou intensa lise de tripomastigotas, com IC(50)/ 24h de 25,5 µM. A análise ultraestrutural mostrou alterações morfológicas significantes, como arredondamento do corpo celular e desorganização intracelular. Alterações indicativas de apoptose, autofagia ou necrose também foram observadas nas células mais afetadas. A fim de melhor compreender o mecanismo envolvido na morte celular induzida pelo composto, nós utilizamos a microscopia confocal e a citometria de fluxo aliadas a sondas fluorescentes, como anexina-V (AV)/ iodeto de propídio (IP); Calceína-AM (CA)/ homodímero de etídio (HE); laranja de acridina (LA) e rodamina 123. O tratamento com 6 e 12 µg/ mL revelou uma alta porcentagem de células viáveis pela CA/ HE, mas também induziu alterações mitocondriais e aumento da marcação com a LA, sugerindo que um processo de morte celular programada (MCP) por autofagia poderia estar ocorrendo. Por outro lado, o tratamento com 24 µg/ mL levou à perda de viabilidade celular com danos excessivos sobre a membrana plasmática e mitocondrial e fragmentação inespecífica do DNA. Em conclusão, nossos achados sugerem que o MBHA 3, em alta concentração, induz MCP por necrose em T. cruzi.

Planejamento e síntese de pró-fármacos recíprocos de nitrofural e primaquina potencialmente antichagásicos / Planning and synthesis of mutual prodrugs of nitrofural and primaquine antichagasic potentially

A doença de Chagas, causada pelo Trypanosoma cruzi, atinge cerca de um quarto da populaçäo da América latina onde representa um dos mais importantes problemas médico-sanitários em 17 países. De acordo com a OMS (1991), cerca de 100 milhöes de pessoas vivem sob o risco de contrair a parasitose e entre 16 a 18 milhöes de indivíduos encontram-se infectados. A transmissäo por transfusäo sanguínea tem sido a principal causa de novas infeccöes em áreas fora dos focos naturais de transmissäo. Apenas dois fármacos, säo disponíveis: nifurtimox e benznidazol, eficazes somente na fase aguda da doença. No Brasil, o problema é agravado pela emergência de T. cruzi resistentes ao nifurtimox e apenas o benznidazol é comercializado. A falta de fármacos realmente eficazes torna urgente a busca de novos e melhores agentes antichagásicos. Os nitrofuranos apresentam a capacidade de inibir a tripanotiona redutase, enzima chave no metabolismo antioxidante do T. cruzi. A primaquina, utilizada clinicamente em malária, apresenta atividade antichagásica, provavelmente através de estresse oxidativo e/ou da ação oxidativa de seus metabólitos ativos. Neste sentido, o objetivo deste trabalho foi sintetizar, mediante emprego da latenciaçäo, pró-fármcos recíprocos de nitrofuranos, como o nitrofural (nitrofurazona), com a primaquina. Os dois fármacos, um agindo como transportador do outro, foram ligados diretamente ou por agentes espaçantes como o grupo succinil. Além disso, aproveitando a especificidade primária da cruzipaína, protease encontrada apenas no tripanossoma, empregaram-se outros agentes espaçantes como Arg, Ala, Phe-Arg, Phe-Ala e Lys-Arg. Espera-se que, in vivo, após açäo proteolítica da peptidase específica, ocorra a liberaçäo do nitrofural e da primaquina in situ. Com o sistema antioxidante inibido pelo nitrofural, o parasita tornar-se-á, provavelmente, mais suscetível à açäo da primaquina. Os testes biológicos in vitro realizados em cultura de células LLC-MK 2 infectadas com formas tripomastigotas de T. cruzi comprovaram atividade antichagásica potencial destes pró-fármacos recíprocos e também de seus intermediários dipeptídios-primaquina e hidroximetilnitrofural.

Sinthetic trypanocides: growth-inhibiting properties of new 1, 2, 3, 4 - tetrahydrocarbazoles on Trypanosoma cruzi

Se sintetizaron varios nuevos derivados del 1,2,3,4, tetrahidrocarbazol, 5,6-dihidrobenzo (alfa) carbazol, 3-metilindol y benzimidazol, que se ensayaron sobre cultivos del Trypanosoma cruzi, en el medio líquido de Warren. El 6-cloro-y el 6,8 dicloro-N-(1-etil-N-dimetilamino) 1,2,3,4, tetrahidrocarbazol fumarato resultaron los más potentes inhibidores del crecimiento del parásito. Estos carbazoles fueron relativamente más activos que los preparados previamente por Poliakoff y col