Different sample preparation methods for glomerular morphological evaluation: to coat or not to coat? / Diferentes métodos de preparación de muestras para la evaluación morfológica glomerular ¿recubrir o no recubrir?

ABSTRACT

The renal glomerulus is coated by fenestrated endothelial cells and externally covered by specialized epithelial cells, known as podocytes. Scanning electron microscopy becomes an important and effective tool for its studies. Normally, samples destined for scanning microscopy are covered with a thin metallic layer. However, this step can be dispensed for some analyzes. We aimed to compare coated and uncoated samples for evaluation of the glomerular morphology of the Wistar rat kidney. Cortical region of the kidney of the 5month-old male Wistar rats were used. The fragments followed the routine procedure for scanning electron microscopy processing. Half of 10 fragments were coated with palladium gold and the remaining were not coated. Auriga Compact FIB - SEM scanning electron microscope was used to observe the samples. Different increases and voltages was evaluated. For the uncoated samples, when using voltages of 2 KV (or higher) a great charging was observed, impairing the use of such voltage. Thus, these samples were always observed under voltage of 0.5 KV. On the other hand, in the coated samples, the use of 2 KV was adequate. Almost as a consequence, in the coated samples, the podocyte structures were better characterized, generating better images. Inversely, in the uncoated samples, it was possible to visualize the desired structures and to detect the morphological characteristics of these. The results showed that it is possible to use kidney samples without previous coating to evaluate the glomerular morphology at the ultrastructural level, serving as a tool in the study of pathologies.

RESUMEN

El glomérulo renal está recubierto por células endoteliales fenestradas y cubierto externamente por células epiteliales especializadas, conocidas como podocitos. La microscopía electrónica de barrido se convierte en una herramienta importante y efectiva para sus estudios. Normalmente, las muestras destinadas a microscopía de barrido se cubren con una capa metálica delgada. Sin embargo, este paso se puede dispensar para algunos análisis. El objetivo fue comparar muestras recubiertas y no recubiertas para evaluar la morfología glomerular del riñón de rata Wistar. Se utilizó la región cortical del riñón de ratas Wistar macho de 5 meses de edad. Se realizó el procedimiento de rutina para el procesamiento de microscopía electrónica de barrido. La mitad de 10 fragmentos se recubrieron con oro paladio y los restantes no se recubrieron. Se utilizó un microscopio electrónico de barrido SEM Auriga Compact FIB para observar las muestras. Se evaluaron diferentes aumentos y voltajes. Para las muestras no recubiertas, al usar voltajes de 2 KV (o más) se observó una gran carga, impidiendo el uso de dicho voltaje. Por lo tanto, estas muestras siempre se observaron a bajo voltaje de 0,5 KV. Por otro lado, en las muestras recubiertas, el uso de 2 KV fue adecuado. Como consecuencia, en las muestras recubiertas, las estructuras de los podocitos se caracterizaron mejor, generando mejores imágenes. Inversamente, en las muestras no recubiertas, fue posible visualizar las estructuras deseadas y detectar las características morfológicas de éstas. Los resultados mostraron que es posible utilizar muestras de riñón sin recubrimiento previo para evaluar la morfología glomerular a nivel ultraestructural, que sirve como una herramienta en el estudio de patologías.