Avaliação da microdureza e do potencial antimicrobiano de cimentos para cimentação modificados com diacetato de clorexidina a 0, 5% / Microhardness and antimicrobial potential evaluation of cements for cementation modified with 0, 5% diacetate chlorhexidine

RESUMO

O objetivo deste estudo foi avaliar, in vitro, a microdureza e o potencial antimicrobiano de três cimentos para cimentação utilizados em dentística modificados com diacetato de clorexidina a 0,5%. Para o teste de exaustão foram usados 48 corpos de prova de 5 mm de diâmetro por 2 mm de altura, colocados numa placa de 96 orifícios, divididos em 2 corpos de prova de acordo com o período de eluição para cada grupo previamente determinado. A eluição foi feita com PBS (tampão fostato), tornando o ambiente isotônico, por períodos de 60, 30 e 15 dias, ou sem exaustão (imediato), com posterior exposição ao inóculo bacteriano (Streptococcus mutans em 80 Unidades Formadoras de Colônias - UFC), em meio isotônico para evitar a morte da bactéria. Após 60 minutos de exposição a 37ºC, cada corpo de prova recebeu 100 µL de agar TSA, para a análise do crescimento das colônias. A viabilidade celular foi avaliada através do teste colorimétrico de Metiltetrazolium (MTT), em que foi utilizada uma suspensão celular L929 (fibroblastos gengival de camundongo), linhagem recomendada pela ISO 10993-5 de 2009 para a realização dos testes de citotoxicidade. As amostras ficaram em eluição pelos períodos de 24 horas, 72 horas e 7 dias , momentos em que foram aliquotados 200 µL da solução de eluição do corpo de prova, para a realização do teste. No geral foram testadas quatro réplicas de cada uma das amostras obtidas distribuídas nos grupos de corpo de prova previamente definidos, sendo confeccionados 18 corpos de prova com 5 mm de diâmetro por 2 mm de altura. A análise de microdureza Knoop (KHN) foi feita confeccionando cinco espécimes para cada grupo experimental com 5 mm de diâmetro e 2 mm de altura, incluídos em seis blocos de resina acrílica rosa. Cada grupo foi denominado conforme os respectivos tratamentos a serem utilizados. Grupo 1 (G1) - cimento de fosfato de zinco sem diacetato de clorexidina; Grupo 2 (G2) - Ketac™ Cem Easymix sem diacetato de clorexina; Grupo 3 (G3) - RelyX™ U 200 sem diacetato de clorexidina; Grupo 4 (G4) - cimento de fosfato de zinco com diacetato de clorexidina 0,5%; Grupo 5 (G5) - Ketac™ Cem Easymix com diacetato de clorexidina 0,5%; Grupo 6 (G6) - RelyX™ U 200 com diacetato de clorexidina 0,5%. Em relação ao teste de exaustão, o cimento de fosfato de zinco foi o que apresentou melhor atividade antimicrobiana. No referente à citotoxicidade, não houve efeito citotóxico significativo entre todas as amostras testadas, tendo apenas o cimento de fosfato de zinco sem adição de diacetato de clorexina no período de eluição de 72 h ficado ligeiramente acima da barra de viabilidade celular. Considerando a microdureza Knoop, o cimento de fostato de zinco apresentou comportamento inferior ao Ketac™ Cem Easymyx e ao RelyX™ U 200, que não foram diferentes entre si e, assim, a adição do diacetato de clorexidina a 0.5% não modificou a propriedade mecânica analisada dos cimentos testados.

ABSTRACT

The aim of this study was to evaluate, in vitro, the hardness and the antimicrobial potential of three cements for cementation used in dentistry modified with 0.5% chlorhexidine diacetate. For the exhaustion test were used 48 specimens samples with 5 mm in diameter and 2 mm in height, placed in a 96 well plate, divided into 2 specimens samples according to the elution period for each previously determined group. The elution was done with PBS (phosphate buffer), making an isotonic environment for periods of 60, 30 and 15 days, or without exhaustion (immediate), with subsequent exposure to the bacterial inoculum (Streptococcus mutans in 80 Colony Forming Units - UFC) in an isotonic medium to prevent the death of bacteria. After 60 minutes at 37°C exposure, each specimen received 100 µL of agar TSA, for the analysis of the colonies' growth. Cell viability was evaluated by colorimetric test Metiltetrazolium (MTT), which was used in a suspension of the cell type L929 (mouse fibroblasts gum), strain recommended by ISO 10993-5 2009 for carrying out the cytotoxicity tests. The samples were eluted in the periods of 24 hours, 72 hours and 7 days, when 200 µL were aliquoted from specimens samples eluting solution, to perform the colorimetric test. In general, four replicates were tested of each obtained samples, distributed into previously defined specimen groups, totalizing 18 specimens samples with a diameter of 5 mm and a height of 2 mm. The Knoop microhardness analysis (KHN) was done preparing five specimens samples for each experimental group with 5 mm in diameter and 2 mm in height, included in 6 pink acrylic resin blocks. Each group was designed according to the treatment to be received. Group 1 (G1) - Zinc phosphate cement without chlorhexidine diacetate; Group 2 (G2) - Ketac™ Cem Easymyx without clorexina diacetate; Group 3 (G3) - RelyX™ U 200 without chlorhexidine diacetate; Group 4 (G4) - Zinc phosphate cement with 0,5 % chlorhexidine diacetate; Group 5 (G5) - Ketac™ Cem EasyMix with 0,5% chlorhexidine diacetate; Group 6 (G6) - RelyX™ U 200 with 0,5% chlorhexidine diacetate. Regarding to exhaustion test, zinc phosphate cement showed the best antimicrobial activity. With regard to cytotoxicity, there was no significant cytotoxic effect of all tested samples, having only the zinc phosphate cement without adding chlorhexidine diacetate in the elution period of 72 h, stayed slightly above the cell viability bar. Considering the Knoop hardness, zinc phosphate cement showed less behavior than Ketac™ Cem Easymyx and RelyX™ U 200, which were not different between them. Thus, the addition of 0.5% chlorhexidine diacetate did not modified the mechanical property of the tested cements.