Diagnóstico de Cryptococcus neoformans mediante la PCR- RFLP en el líquido cefalorraquídeo (LCR) en pacientes hospitalizados en el sur de Brasil / Cryptococcus neoformans diagnosis using PCR-RFLP on cerebrospinal fluid (CSF) of hospitalized patients in southern Brazil

RESUMEN

Introducción: Cryptococcus neoformans es un hongo levaduriforme encapsulado, de distribución mundial, principalmente en regiones tropicales, causando infecciones en individuos inmunocomprometidos, sobre todo en los infectados con el virus de la inmunodeficiencia humana (HIV). La capacidad de infección de este hongo es variable, pudiendo citar la facultativa patogenicidad, cápsula con actividad fagocitaria y producción de melanina como antioxidante. El objetivo de este trabajo fue evaluar el uso de la PCR/ RFLP para la detección e identificación de C. neoformans directamente del líquido cefalorraquídeo (LCR) de pacientes ingresados en un hospital público de la ciudad de Lages, Estado de Santa Catarina, sur de Brasil, comparando el resultado con la tinción específica para el hongo y el crecimiento en medio de cultivo. Métodos: Las muestras fueran directamente teñidas con tinta china para observar la cápsula, bien como después sembladas en medio de cultivo (agar dextrosa Sabouraud y agar de Níger) para crecimiento fúngico; también se hizo la extracción del ADN con fenol-cloroformo. La técnica fue utilizada para amplificación del gen URA5 mediante reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y después con las enzimas de restricción HhaI y Sau96I para genotipaje mediante la PCR-RFLP. Resultados: En dos muestras fueran aislados C. neoformans con la tinción china y amplificados en la PCR, en las cuales fueran identificados como var. grubii. Conclusión: El serotipo A var. grubii es lo más aislado en la criptococosis humana, principalmente en pacientes HIV, pero se desconoce la preferencia de este serotipo por este grupo de enfermos. (AU)

ABSTRACT

Introduction: Cryptococcus neoformans is an encapsulated yeast with worldwide circulation, predominantly in tropical regions, causing infections in immunocompromised individuals, particularly those infected with human immunodeficiency virus (HIV). The virulence of this fungus is variable, and it should be mentioned the facultative pathogenicity, capsule with anti-phagocytic activity, and antioxidant melanin production. The aim of this study was to evaluate the use of polymerase chain reaction (PCR)/ restriction fragment length polymorphism (RFLP) for detection and identification of C. neoformans directly from the cerebrospinal fluid (CSF) of patients admitted to a public hospital with suspected meningitis and/or meningoencephalitis in the city of Lages, Santa Catarina, southern Brazil. Results were compared using Chinese ink and growth media. Methods: The samples were submitted to direct examination with Chinese ink for capsule observation, then to growth on culture media (Sabouraud Agar and Niger), with subsequent DNA extraction with phenol-chloroform. PCR was the technique used for amplification of URA5 gene, and then restriction enzymes HhaI and Sau96I were used for genotyping by PCR-RFLP. Results: In two samples, C. neoformans were isolated by Chinese ink and amplified by PCR. They were identified as serotype var. grubii. Conclusion: C. neoformans var. grubii is the most commonly isolated in human cryptococcosis, mainly in HIV patients. However, the preference of this serotype for this group of patients is unknown. (AU)