Estudo de novos compostos e suas combinações terapêuticas frente aos principais agentes da criptococose / Study of new compounds and their therapeutic combinations against the main agents of Cryptococcosis

RESUMO

Criptococose, causada por espécies de Cryptococcus, é micose letal sob a forma de meningoencefalite, com maior incidência entre indivíduos imunocomprometidos, em particular, naqueles com AIDS. Anfotericina B, fármaco tóxico, 5-fluorcitosina e terapias combinadas para criptococose não impedem recidivas e persistência da doença. Novas classes de medicamentos anti-Cryptococcus são necessárias para evitar o desenvolvimento de resistência a esse escasso arsenal terapêutico. A prospecção de O objetivo deste trabalho foi prospectar compostos ativos contra os principais agentes da criptococose para aumentar a gama de opções terapêuticas para essa infecção. Poucos (1,9%) compostos foram ativos contra cepas do complexo C.neoformans/C. gattii em uma coleção de 154 compostos neste estudo. Laevicarpina e poligodial, além de 3 fármacos antimaláricos-cicloguanil, proguanil e clorproguanil foram identificados como ativos in vitro contra C. gattii. Os valores de CE50, obtidos para cicloguanil, clorproguanil foram, respectivamente, 11,33µM e 9,39µM, com MIC e MFC de 32µg/mL. Para proguanil CE50 23,87µM, MIC 16µg/mL e MFC 32µg/mL. Os fármacos apresentaram valores de CC50 > 200µM para cicloguanil e proguanil, e 30,21µM para clorproguanil, demonstrando uma seletividade de >17, >8,37 e 3, respectivamente. O estudo da combinação terapêutica, demonstrou que a combinação dos antimaláricos com os fármacos tradicionais foi indiferente para AmB e 5-Fc, mas sinérgica com FCZ. O mecanismo de ação do proguanil não pode ser determinado segundo a metodologia empregada, redirecionando os estudos para outros caminhos investigativos; no entanto, foi demonstrada alteração de estruturas intracelulares, incluindo mitocôndrias, retículo endoplasmático e membrana plasmática, relacionadas à exposição ao proguanil, estimulando investimento de pesquisa nessa direção. Os ensaios de sobrevida em larvas de Galleria mellonella, de outro modo, indicaram que a eficácia do proguanil in vivo depende da sua associação com fluconazol, não tendo sido demonstrado que a monoterapia seja adequada. (AU)

ABSTRACT

Cryptococcosis, caused by Cryptococcus species, is a lethal mycoses in the form of meningoencephalitis, with the highest incidence among immunocompromised individuals, particulary those with AIDS. Amphotericin B, toxic drug and with administration associated with adverse effects, besides fluconazole, 5-fluorocytosine and combination therapies for cryptococcosis not prevent recurrence and persistence of the disease. New classes of anti-Cryptococcus drugs are needed to prevent the development of drug resistance to the current therapeutic arsenal. The aim of this work was to prospect active compounds against the main agents of cryptococcosis to increase the range of therapeutic options for this infection. Few (1.9%) compounds were active against C.neoformans/C. gattii complex strains in a collection of 154 compounds in this study. Laevicarpin and polygodial, in addition to 3 antimalarial drugs-cycloguanil, proguanil and chlorproguanil, were active against C. gattii in vitro. The EC50 values for cycloguanil, chlorproguanil were 11.33µM and 9.39µM, respectively, with MIC and MFC of 32µg/mL. For proguanil CE50 value of 23.87µM, MIC16µg/mL and MFC32µg/mL. The drugs showed CC50 values of > 200µM for cycloguanil and proguanil, and 30.21µM for chlorproguanil, with selective index valeus of >17, > 8.37 and 3, respectively. Combination therapy study showed indifference between antimalarials and the traditional drugs amphotericin B and that the combination of biguanide with traditional drugs to be indifferent to AmB and 5-Fc, but synergistic with FCZ. The mechanism of action of proguanil could not be determined according to the applied methodology, redirecting the studies to other investigative paths; however, alterations of intracellular structures, including mitochondria, endoplasmic reticulum and plasma membrane, related to the exposition of proguanil, have been shown, stimulating research investment in this direction. Otherwise, survival assay in caterpillar of Galleria mellonella indicated that the in vivo efficacy of proguanil depends on its association with fluconazole, and monotherapy has not been shown to be adequate. (AU)