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Obtención de una versión IgG1 de ratón del rituximab para detectar la molécula CD20 humana / Obtaining a mouse IgG1 version of rituximab to detect the human CD20 molecule
Harteman Ávila, Osmany; Casadesus Pazos, Ana Victoria; Mateo de Acosta del Río, Cristina María; López-Requena, Alejandro; Sosa Aguiar, Katya; Dorvignit Pedroso, Denise; Rodríguez Obaya, Teresita; Cedeño Arias, Mercedes; Hernández García, Tays.
  • Harteman Ávila, Osmany; Centro de Inmunología Molecular. La Habana. CU
  • Casadesus Pazos, Ana Victoria; Centro de Inmunología Molecular. La Habana. CU
  • Mateo de Acosta del Río, Cristina María; Centro de Inmunología Molecular. La Habana. CU
  • López-Requena, Alejandro; Centro de Inmunología Molecular. La Habana. CU
  • Sosa Aguiar, Katya; Centro de Inmunología Molecular. La Habana. CU
  • Dorvignit Pedroso, Denise; Centro de Inmunología Molecular. La Habana. CU
  • Rodríguez Obaya, Teresita; Centro de Inmunología Molecular. La Habana. CU
  • Cedeño Arias, Mercedes; Centro de Inmunología Molecular. La Habana. CU
  • Hernández García, Tays; Centro de Inmunología Molecular. La Habana. CU
Rev. cuba. hematol. inmunol. hemoter ; 35(3): e1014, jul.-set. 2019. graf
Article in Spanish | LILACS, CUMED | ID: biblio-1093280
RESUMEN

Introducción:

El rituximab, anticuerpo quimérico que reconoce la molécula CD20 humana, se ha utilizado en el tratamiento de diversos trastornos linfoproliferativos de células B. Para la selección de los potenciales beneficiarios del tratamiento con rituximab se han desarrollado técnicas que, mediante el uso de anticuerpos monoclonales, detectan la presencia del CD20 en los linfocitos de estos pacientes.

Objetivo:

Obtener y caracterizar un anticuerpo recombinante IgG1 de ratón específico para la molécula CD20 humana, que contenga las regiones variables del anticuerpo rituximab.

Métodos:

Para la expresión estable del anticuerpo recombinante se empleó la transducción lentiviral de células de embrión de riñón humano (HEK293). La caracterización inmunoquímica del anticuerpo se realizó por la técnica de Western Blot y su capacidad de reconocimiento de la molécula CD20 humana se evaluó por citometría de flujo e inmunohistoquímica.

Resultados:

Se obtuvo el anticuerpo 1F5 que reconoce, por citometría de flujo, la molécula CD20 en líneas celulares humanas de origen linfoide, así como en células de sangre periférica de humanos sanos y pacientes con trstornos linfoproliferativos de células B. Sin embargo, la técnica de inmunohistoquímica solo permitió detectar con este anticuerpo la molécula CD20 en tejidos frescos, no así en los embebidos en parafina.

Conclusiones:

Este trabajo sugiere las potencialidades del uso del anticuerpo 1F5 para las mediciones de la expresión de CD20 por citometría de flujo en pacientes con leucemias B o linfomas B avanzados en fase de leucemización. Esto complementaría los estudios para la selección apropiada de pacientes para el tratamiento con el rituximab(AU)
ABSTRACT

Introduction:

Rituximab, chimeric antibody specific for human CD20 molecule, has been widely used in the treatment of several B-cell linfoproliferative disorders. For the selection of patients with the greatest potential to benefit from the therapy with rituximab, a number of techniques using monoclonal antibodies have been developed to detect the CD20 molecule.

Objective:

To obtain and to characterize a mouse IgG1 recombinant antibody, specific for human CD20, that contains the variable regions of rituximab.

Methods:

The lentiviral transduction of human embryonic kidney cells (HEK293) was used for the stable expression of the recombinant antibody. The immunochemical characterization of the antibody was performed by Western Blot and the recognition of CD20 was evaluated by immunohistochemistry and flow cytometry.

Results:

We generated the antibody 1F5, able to recognize by flow cytometry the CD20 molecule expressed on lymphoid human cell lines, as well as peripheral blood mononuclear cells from healthy donors and patients with B-cell lymphoproliferative disorders. However, 1F5 antibody detected the CD20 molecule on fresh tissues, but not on formalin-fixed paraffin embedded tissues,by immunohistochemistry.

Conclusions:

This work suggests the potential use of 1F5 antibody for the measurement of CD20 expression by flow cytometry in patients with B-cell leukemias or B-cell lymphomas in phase of leukemization. This could complement the studies to ensure the appropriate selection of patients for the treatment with rituximab(AU)
Subject(s)

Full text: Available Index: LILACS (Americas) Main subject: Immunoglobulin G / Patient Selection / Rituximab / Antineoplastic Agents, Immunological / Antibodies / Antibody Formation Limits: Female / Humans / Male Language: Spanish Journal: Rev. cuba. hematol. inmunol. hemoter Journal subject: Allergy and Immunology / Hematology Year: 2019 Type: Article Affiliation country: Cuba Institution/Affiliation country: Centro de Inmunología Molecular/CU

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