Avaliação das alterações na sinalização das Células Estromais Mesenquimais da Medula Óssea em pacientes com Leucemia Mielóide Aguda / [Assessment of cell signaling changes Bone Marrow Mesenchymal Stromal In Patients With Acute Myeloid Leukemia]

RESUMO

A Leucemia Mieloide Aguda (LMA) é uma neoplasia hematológica heterogênea caracterizada pela proliferação e acúmulo dos precursores mielóides na medula óssea (MO), podendo ser classificada em 8 subtipos a partir das características de leucócitos e da fase interrompida na diferenciação celular. Apesar dos diversos estudos na área, os eventos relacionados com o início da doença assim como sua progressão ainda não foram elucidados. O nicho hematopoético apresenta um papel importante na manutenção e diferenciação das Células Tronco Hematopoéticas normais (CTH) e acredita-se que alterações nesse meio podem estar influenciando no surgimento da uma Célula Tronco Leucêmica (CTL). O microambiente medular é formado por um grupo heterogênio de células não hematopoéticas, dentre elas as células estromais da medula (MSC). Por isso, o objetivo deste trabalho é avaliar se o processo de transformação leucêmica da CTH pode ser influenciado pela sinalização realizada pela MSC em pacientes com LMA. Para isso, amostras de MO de pacientes com LMA ao diagnóstico e de doadores saudáveis (DS) foram colocadas em cultura para isolamento e cultivo das MSC. Realizamos uma caracterização das culturas de acordo com a SITC e todas apresentaram características de MSC tanto na morfologia como na expressão de marcadores de superfície celular. Nos ensaios de diferenciação adipogênica e osteogênica in vitro todas as MSCs apresentavam capacidade de se diferenciar, entretanto, o potencial de diferenciação osteogênica foi menor em pacientes com LMA. Comparamos também o perfil de proliferação e ciclo celular e não foi observada diferenças estatísticas entre as culturas de MSCs. Para verificarmos então se havia diferença de expressão gênica entre as culturas, realizamos ensaios de Chiparray. Para a realização desse ensaio foram utilizadas 7 amostras de pacientes e comparadas com dois pools de DS. Cinquenta e cino genes foram encontrados diferencialmente expressos e escolhemos 6 genes para serem confirmados por RT-qPCR em 19 amostras de pacientes e 13 amostras de doadores (Ccl2 e Spond2 aumentados e Mmp16, Bmp4, Cldn1 e Opn diminuídos em MSCs de pacientes com LMA). Com esses resultados podemos sugerir que existe uma assinatura molecular comum a todas as MSCs de LMA independente do subtipo quando comparado com DS. Realizamos também análises in silico para avaliar as vias de sinalização e as interações que os genes diferencialmente expressos encontrados apresentavam. Nessas análises os genes encontrados estão envolvidos principalmente com as vias de diferenciação de osteoclastos e sinalização de Wnt. Também avaliamos os níveis das proteínas CCL2, BMP4 e OPN no plasma de pacientes com LMA e DS Nossos resultados confirmam o aumento de CCL2 no plasma de pacientes com LMA assim como a redução de BMP4. No entanto, os níveis de OPN não foram alterados. Esses genes têm sido descritos como importantes componentes produzidos pelo microambiente medular xvi queregulam tanto o número de CTH quanto a função. Com esses resultados, podemos sugerir que a MSC de pacientes com LMA apresentam alterações na sinalização no contexto da doença, e alterações na expressão dos genes Ccl2 e Bmp4 podem estar relacionados com o processo de transformação leucêmica.